强直性脊柱炎与TNF β遗传多态性研究

1、    强直性脊柱炎与TNF 遗传多态性研究蒋黎华范丽安杨珏琴姚芳娟 周嘉陵许荣钟丽民 关于强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)发病机制，除发现其与HLA-B27的强相关之外，很多证据提示还可能有其它遗传因素参与1。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)是一种参与免疫应答的细胞因子，其基因TNF 位于HLA 类和类基因之间并与之紧密连锁，近年来有研究发现TNF 的遗传多态性与一些免疫性疾病相关联2，3。本文对AS与TNF 多态性的关系进行调查，以期为AS与B27关联机制提供线索。 1资料与方法 1

2、.1研究对象：60例AS病人取自上海光华医院风湿科，均经血清学方法确定为HLA-B27阳性。79例正常对照取自本室建立的随机正常配组。均取静脉血常规盐析法抽提DNA。 1.2研究方法：TNF 等位基因的检测采用PCR/RFLP方法，先用一对引物TNFL(5"CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA3')和TNFR(5"AGAGCTGGTGGGGACATGT-CTG3')扩增TNFB基因外显子1与内含子3之间一段靶DNA，PCR循环温度为95 、55 、和72 。PCR扩增产物再用限制性内切酶Nco进行酶切，1.5% agarose电泳检查酶切结果，740

3、 bp的PCR产物经酶切后形成555 bp和185 bp两种片段，根据酶切格局可确定TNF 等位基因。 2结果 2.1TNF等位基因的指定：标本经PCR/RFLP后可产生3种酶切格局：TNF*2纯合子的标本，其PCR产物经Nco消化后不产生酶切，则电泳后只出现740bp一根条带；TNF*1纯合子产生完全酶切，则出现555 bp和185 bp两根条带；TNF*1/TNF*2杂合子产生部分酶切，则出现740 bp、555 bp和185 bp三根条带。 2.2AS病人和正常对照组TNF等位基因的分布见表1。TNF*1/TNF*2杂合子在AS病人和正常对照组中均是最常见的检出形式，分别占50%和58.

4、2%，其次是TNF*2纯合子的检出率在AS病人组比正常对照组要高一些，但经统计学2检验P0.05，差异无显著性。其它各种TNF遗传多态性的分布在两组间无显著性差异。 表1AS病人和正常对照组TNF遗传多态性分布 AS病人组 正常对照组 检出率 TNF*1纯合子 13.3%(8/60) 18.9%(15/79) TNF*2纯合子 36.7(22/60) 22.8%(18.79) TNF*1/*2杂合子 50%(30/60) 58.2%(46/79) 表型频率 TNF*1 63.3%(38/60) 77.2%(61/79) TNF*2 86.7%(52/60) 81.0%(64/79) 等位基因频

5、率 TNF*1 0.383(46/120) 0.481(76/158) TNF*2 0.617(74/120) 0.519(82/158) 3讨论 HLA是人类第6号染色体上一组高度多态性的基因群，在免疫系统尤其是免疫识别及其遗传控制中起极重要作用，但AS与HLA-B27关联的机制迄今不明。有调查发现，AS患者的一级相关亲属中B27()个体的发病率比一般的B27()群体高10倍1，提示除B27外AS还 可能与其它遗传因素有关，对双胞胎的研究也证明了这一可能4。近年来研究显示除B27外其它一些HLA基因如HLA-B60、DR1、DR8在某些人群中也可能与AS关联，我们的有关研究则发现HLA-DP

6、B1*0401与AS呈负相关5。由于HLA作为人体最具多态性的遗传系统是疾病基因的极好遗传标志，故提示上述的所谓其它遗传因素可能就位于HLA区域。另外一些观点则认为B27抗原分子因与某些肠道菌存在分子模拟而可被上述其它自身HLA抗原递呈导致自身免疫。 TNF与免疫调节和免疫炎症有关，近年来发现TNF 具有遗传多态性，不同TNF 基因型的个体在功能上还可能存在差异，且TNF 多态性与SLE、糖尿病、原发性膜性肾小球肾炎等疾病相关2，3。因此极有可能TNF 是与AS发生有关的遗传因素之一，而前述与AS关联的HLA基因只是作为一种遗传标志，因其与TNF基因之间的紧密连锁而显示出与AS相关。我们的调查

7、结果显示TNF 各等位基因与AS无相关性，则初步排除了这种可能性。 作者单位：200025上海第二医科大学上海市免疫学研究所(蒋黎华、范丽安、杨珏琴、姚芳娟)，上海光华医院(周嘉陵、许荣、钟丽民) 参考文献 1Feltkamp TEW,Khan MA,Lopez de Castro JA.The pathogenetic role of HLA-B27.Immunology Today,1996,17(1)5 2Bettinotti MP,Hartung K,Deicher H,et al.Polymorphism of the tumor necrosis factor beta gene in systemic lupus erythematosus:TNF-MHC haplotypes.Immunogenetics,1993,37:449 3Medcraft J,Hitman GA,Sachs JA,et al.Autoimmune renal disease and tumor necrosis factor gene polymorphism.Clin Nephro,1993,40(2):63 4Jarvinen P.Occurrence of ankylosing spondylitis in a nationwide series