发酵生产染菌及其防治

1、发酵工程发酵工程 第七章第七章 发酵生产染菌及其防治发酵生产染菌及其防治 染菌对工业发酵的危害，轻则影响产品的质和量，重染菌对工业发酵的危害，轻则影响产品的质和量，重则倒罐，颗粒无收，严重影响工厂的效益。染菌的发生不则倒罐，颗粒无收，严重影响工厂的效益。染菌的发生不仅有技术问题，也有生产管理方面的问题。仅有技术问题，也有生产管理方面的问题。 在克服染菌问题时必须先树立起这样的信念，染菌不在克服染菌问题时必须先树立起这样的信念，染菌不会无缘无故，是人无意识所为，如果防范得当是可以把杂会无缘无故，是人无意识所为，如果防范得当是可以把杂菌拒之门外的。菌拒之门外的。 一、污染原因一、污染原因从技术上分

2、析，染菌的途径不外有以下几方面：从技术上分析，染菌的途径不外有以下几方面：种子出问题；种子出问题；培养基的配制和灭菌不彻底；培养基的配制和灭菌不彻底；设备问题；设备问题；空气除菌不彻底；空气除菌不彻底；过程控制操作疏漏。过程控制操作疏漏。日本抗菌素生产中统计的染菌原因：日本抗菌素生产中统计的染菌原因： 从发酵工厂的从发酵工厂的生产经验来看，染生产经验来看，染菌原因是以菌原因是以设备渗设备渗漏漏和和空气系统的染空气系统的染菌菌为主，其他则次为主，其他则次之。之。 遇到染菌首先要监测杂菌的来源。遇到染菌首先要监测杂菌的来源。 对顽固的染菌，应对种子、消后培养基和补料液、对顽固的染菌，应对种子、消后

3、培养基和补料液、发酵液及无菌空气取样作无菌试验以及设备试压检漏，发酵液及无菌空气取样作无菌试验以及设备试压检漏，只有系统、严格监测和分析才能判断其染菌原因，做到只有系统、严格监测和分析才能判断其染菌原因，做到有的放矢。有的放矢。（一）、染菌原因分析的思路（一）、染菌原因分析的思路1、从染菌的规模来分析、从染菌的规模来分析 （1）、大批发酵罐染菌）、大批发酵罐染菌 发酵罐都出现染菌而且染的是同一种菌，发酵罐都出现染菌而且染的是同一种菌，一般是由一般是由空气过滤器失效造成的空气过滤器失效造成的，大批发酵罐染菌的现象较少但，大批发酵罐染菌的现象较少但危害极大。危害极大。 所以对于空气系统必须定期经常

4、检查。所以对于空气系统必须定期经常检查。（2）、部分发酵罐）、部分发酵罐(或罐组或罐组)染菌染菌 如果出现在发酵前期可能是如果出现在发酵前期可能是种子带菌种子带菌，如果发生在，如果发生在中后期则可能是中后期则可能是中间补料系统或油管路系统中间补料系统或油管路系统发生问题所发生问题所造成的。造成的。 通常同一产品的几个发酵罐其补料系统往往是共用通常同一产品的几个发酵罐其补料系统往往是共用的，倘若补料灭菌不彻底或管路渗漏，就有可能造成这的，倘若补料灭菌不彻底或管路渗漏，就有可能造成这些罐同时发生染菌现象。些罐同时发生染菌现象。 另外，采用培养基连续灭菌系统时，那些用连续灭另外，采用培养基连续灭菌系

5、统时，那些用连续灭菌进料的发酵罐都出现染菌，可能是连消系统灭菌不彻菌进料的发酵罐都出现染菌，可能是连消系统灭菌不彻底所造成的。底所造成的。（3）、个别发酵罐连续染菌和偶然染菌）、个别发酵罐连续染菌和偶然染菌 个别发酵罐连续染菌大多是由个别发酵罐连续染菌大多是由设备问题设备问题造成的，如造成的，如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损，阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损，特别是冷却管的不易觉察特别是冷却管的不易觉察的穿孔等的穿孔等。设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发。设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象，即第二批的染菌时间比酵的染菌时间向前推移的现象，即第二批的染菌时间比第一批提早，第三

6、批又比第二批提早。第一批提早，第三批又比第二批提早。 至于个别发酵罐的偶然染菌其原因比较复杂，因为至于个别发酵罐的偶然染菌其原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。各种染菌途径都可能引起。2、从染菌的时间来分析、从染菌的时间来分析 发酵早期发酵早期染菌一般认为除了种子带菌外，还有培养染菌一般认为除了种子带菌外，还有培养液灭菌或设备灭菌不彻底，而液灭菌或设备灭菌不彻底，而中、后期中、后期染菌则与这些原染菌则与这些原因的关系较少，而与中间补料、设备渗漏以及操作不合因的关系较少，而与中间补料、设备渗漏以及操作不合理等有关。理等有关。 3、从染菌的类型来分析、从染菌的类型来分析 一般染耐热性芽孢杆菌

7、多数是由于设备存在死角或一般染耐热性芽孢杆菌多数是由于设备存在死角或培养基灭菌不彻底。培养基灭菌不彻底。 污染球菌、酵母等可能是从蒸汽的冷凝水或空气中污染球菌、酵母等可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的。带来的。 在检查时如平板上出现的是浅绿色菌落在检查时如平板上出现的是浅绿色菌落(革兰氏阴性革兰氏阴性杆菌杆菌)，由于这种菌主要生存在水中，所以发酵罐的冷却，由于这种菌主要生存在水中，所以发酵罐的冷却管或夹套渗漏所引起的可能能性较大。管或夹套渗漏所引起的可能能性较大。 污染霉菌大多是灭菌不彻底或无菌操作不严格所致。污染霉菌大多是灭菌不彻底或无菌操作不严格所致。 种子带菌种子带菌的检查可从菌种室保藏

8、的菌种、斜面、摇瓶的检查可从菌种室保藏的菌种、斜面、摇瓶直到种子罐。保藏菌种定期作复壮、单孢子分离和纯种培直到种子罐。保藏菌种定期作复壮、单孢子分离和纯种培养；斜面、摇瓶和种子罐种子作无菌试验，可以用肉汤和养；斜面、摇瓶和种子罐种子作无菌试验，可以用肉汤和斜面或平板培养基检查有无杂菌。显微镜检观察菌形是否斜面或平板培养基检查有无杂菌。显微镜检观察菌形是否正常，正常，应注意在显微镜检不出杂菌时不等于真的无杂菌，应注意在显微镜检不出杂菌时不等于真的无杂菌，需作无菌试验才能最后肯定。需作无菌试验才能最后肯定。（二）、种子带菌（二）、种子带菌 培养基和设备没消透培养基和设备没消透的原因有多方面，如蒸汽

9、压的原因有多方面，如蒸汽压力或灭菌时间不够，培养基配料未混合均匀，存在结力或灭菌时间不够，培养基配料未混合均匀，存在结块现象，设备未清洗干净，特别是罐冲洗不到的犄角块现象，设备未清洗干净，特别是罐冲洗不到的犄角处，有结痂而未铲除干净。处，有结痂而未铲除干净。（三）、（三）、 培养基和设备没消透培养基和设备没消透 设备方面设备方面特别是老设备也常会遇到各种问题，如夹特别是老设备也常会遇到各种问题，如夹层或盘管、轴封和管道的渗漏，空气除菌效果差，管道层或盘管、轴封和管道的渗漏，空气除菌效果差，管道安装不合理，存在死角等是造成染菌的重要原因。安装不合理，存在死角等是造成染菌的重要原因。（四）、设备原

10、因 设备和管件的渗漏一般是指设备和管件由于腐蚀、设备和管件的渗漏一般是指设备和管件由于腐蚀、内应力或其他原因形成微小漏孔所发生的渗漏现象。内应力或其他原因形成微小漏孔所发生的渗漏现象。 这些漏孔很小，特别是不锈钢材料形成的漏孔更小，这些漏孔很小，特别是不锈钢材料形成的漏孔更小，有时肉眼不能直接觉察，需要通过一定的试漏方法才能发有时肉眼不能直接觉察，需要通过一定的试漏方法才能发现。现。1、发酵罐的渗漏、发酵罐的渗漏（1）冷却管的渗漏）冷却管的渗漏 由于发酵液腐蚀、固体物料摩擦引起管外壁磨损。管由于发酵液腐蚀、固体物料摩擦引起管外壁磨损。管内冷却水的浸泡、冲击、蒸汽冲击导致管内壁磨损。所以内冷却水

11、的浸泡、冲击、蒸汽冲击导致管内壁磨损。所以冷却管是发酵罐中最容易渗漏的部件之一。冷却管是发酵罐中最容易渗漏的部件之一。 最易穿孔的是冷却列管的弯曲处，原因是弯曲处外壁最易穿孔的是冷却列管的弯曲处，原因是弯曲处外壁减薄和加热致弯时使材料的性质有所改变所致。减薄和加热致弯时使材料的性质有所改变所致。 冷却水的压力通常大于罐压，如果有微孔，冷却水就冷却水的压力通常大于罐压，如果有微孔，冷却水就会进入发酵液而引起染菌。会进入发酵液而引起染菌。 列管渗漏在漏孔极小时不易发现的。需将管外壁污列管渗漏在漏孔极小时不易发现的。需将管外壁污垢铲除，烘干，管内加水压试漏。垢铲除，烘干，管内加水压试漏。 管子与罐体

12、的连接方式有两种：管子与罐体的连接方式有两种：法兰联接和焊接法兰联接和焊接。 法兰易拆卸更换，但联接处有垫片易渗，而焊接无此现法兰易拆卸更换，但联接处有垫片易渗，而焊接无此现象。象。 为及早发现漏孔，冷却管要定期检查作渗漏试验。为及早发现漏孔，冷却管要定期检查作渗漏试验。 试漏方法有两种：试漏方法有两种：气压试验气压试验和和水压试验水压试验。 水压法：水压法：是用泵将水逐渐压入冷却管，一定压力下是用泵将水逐渐压入冷却管，一定压力下观察管子有否渗漏。观察管子有否渗漏。 气压法：气压法：是先在罐内放满水，用压缩空气通入管子，是先在罐内放满水，用压缩空气通入管子，观察水面有无气泡产生。气压法快速方便

13、，但管子下部观察水面有无气泡产生。气压法快速方便，但管子下部弯曲处积水不易排尽，有漏孔时不产生气泡就难以发现。弯曲处积水不易排尽，有漏孔时不产生气泡就难以发现。 （2）、罐体的穿孔）、罐体的穿孔 浸在液体中的罐体都有可能发生腐蚀穿孔，特别是罐浸在液体中的罐体都有可能发生腐蚀穿孔，特别是罐底，由于空气管喷出的压缩空气的冲击力及发酵液中的固底，由于空气管喷出的压缩空气的冲击力及发酵液中的固体物料的摩擦，罐底钢板产生麻点般的斑痕，称为体物料的摩擦，罐底钢板产生麻点般的斑痕，称为麻蚀麻蚀。每年大修时需检查钢板减薄的程度。有夹套的发酵罐可在每年大修时需检查钢板减薄的程度。有夹套的发酵罐可在夹套内用水压或

14、气压的试验方法检查罐壁有无渗漏。夹套内用水压或气压的试验方法检查罐壁有无渗漏。 有保温层的发酵罐，如果水经常渗入保温层并积聚在有保温层的发酵罐，如果水经常渗入保温层并积聚在里面，罐外壁就产生不均匀的腐蚀现象，所以当保温层有里面，罐外壁就产生不均匀的腐蚀现象，所以当保温层有裂缝和损坏时，应及时修补。裂缝和损坏时，应及时修补。2、管件的渗漏、管件的渗漏 与发酵罐相连接的管路很多，有空气、蒸汽、水、与发酵罐相连接的管路很多，有空气、蒸汽、水、物料、排气、排污等管，管路多，相应的管件和阀门也物料、排气、排污等管，管路多，相应的管件和阀门也多。多。 管道的连接方式、按装方法以及选用的阀门形式对管道的连接

15、方式、按装方法以及选用的阀门形式对防止污染有很大的关系。防止污染有很大的关系。 所以，与发酵有关的管路不能同一般化工厂的化工所以，与发酵有关的管路不能同一般化工厂的化工管路完全一样，而有其特殊的要求。管路完全一样，而有其特殊的要求。 因阀渗漏引起的染菌比例很大，值得引起重视。因阀渗漏引起的染菌比例很大，值得引起重视。与发酵罐直接连通的管道应选用密封性较高的阀门。与发酵罐直接连通的管道应选用密封性较高的阀门。 目前使用的阀门大多采用目前使用的阀门大多采用截止阀截止阀和和橡胶隔膜阀橡胶隔膜阀。 (1) 阀阀 A截止阀截止阀 阀体为横放阀体为横放S形，阀座与阀心形，阀座与阀心接触面小。污物不易附在上

16、面，但接触面小。污物不易附在上面，但构造复杂，流体阻力大。构造复杂，流体阻力大。 能很方便地调节流量，小型发能很方便地调节流量，小型发酵罐多采用。酵罐多采用。 平面形紧密面的垫料采用橡胶平面形紧密面的垫料采用橡胶或聚四氟乙烯，关闭后垫料与阂座或聚四氟乙烯，关闭后垫料与阂座紧紧地吻合，达到不漏的目的。紧紧地吻合，达到不漏的目的。 阀心垫料需定期检查，损坏后立阀心垫料需定期检查，损坏后立即调换。即调换。 截止阀在使用中经常发生以下两个问题：截止阀在使用中经常发生以下两个问题： a 阀心轧坏阀心轧坏。物料中的物料中的硬质物硬质物或焊接施工后的或焊接施工后的焊渣焊渣以以及螺钉及螺钉零件零件等被带到阀内

17、，当关闭的，阀心与阀座被上述等被带到阀内，当关闭的，阀心与阀座被上述坚硬物轧住，能将紧密面轧成凹凸不平的痕迹，就关不严坚硬物轧住，能将紧密面轧成凹凸不平的痕迹，就关不严密。密。 b 填料的渗漏填料的渗漏。操作时用扳手过分关紧，会使阀杆弯操作时用扳手过分关紧，会使阀杆弯曲，弯曲后的阀杆不仅启动费力，并且使填料部分不紧密曲，弯曲后的阀杆不仅启动费力，并且使填料部分不紧密而引起渗漏。阀门在使用一定时间后，阀杆磨损或填料损而引起渗漏。阀门在使用一定时间后，阀杆磨损或填料损坏也会引起渗漏，就需要将填料压盖适当拧紧或更换填料。坏也会引起渗漏，就需要将填料压盖适当拧紧或更换填料。B隔膜阀隔膜阀 阀体内装有橡

18、皮隔膜，用螺阀体内装有橡皮隔膜，用螺钉与阀芯连接，当阀杆作上下运钉与阀芯连接，当阀杆作上下运动时就带动隔膜上升或下降。动时就带动隔膜上升或下降。 隔膜阀的制造要求不高，关隔膜阀的制造要求不高，关键在于膜的性能，如采用橡皮隔键在于膜的性能，如采用橡皮隔膜阀，在一般情况下，对橡胶隔膜阀，在一般情况下，对橡胶隔膜的要求是耐压膜的要求是耐压4公斤厘米公斤厘米2以以上，耐温上，耐温160C以上，在压紧和以上，在压紧和放松时不变形。放松时不变形。隔膜阀有以下优点：隔膜阀有以下优点： 1)、严密不漏。、严密不漏。 2)、无填料。、无填料。 3)、阀结构为流线型，流量大，阻力小，无死角，、阀结构为流线型，流量

19、大，阻力小，无死角，无堆积物，在关闭时不会使紧密面轧坏。无堆积物，在关闭时不会使紧密面轧坏。 4)、检修方便。但须定期检查隔膜有否老化及脱、检修方便。但须定期检查隔膜有否老化及脱落。落。（2）管路的连接）管路的连接管子的连接有管子的连接有螺纹连接螺纹连接、法兰连接法兰连接和和焊接焊接三种。三种。 A. 螺纹连接。螺纹连接。 需在管端铰出螺纹，安装时在螺纹上涂以白漆并加麻需在管端铰出螺纹，安装时在螺纹上涂以白漆并加麻丝丝(或聚四氟乙烯薄膜或聚四氟乙烯薄膜)作填料，密封要求高的可用石墨粉作填料，密封要求高的可用石墨粉加少许机油作填料，用氧化铅甘油胶合剂更好。加少许机油作填料，用氧化铅甘油胶合剂更好

20、。 螺纹连接简单，但装拆麻烦，为便于装拆，要在管路螺纹连接简单，但装拆麻烦，为便于装拆，要在管路上安装活接头上安装活接头(“由宁由宁”)，接头平面用石棉橡胶板或橡皮，接头平面用石棉橡胶板或橡皮等作垫圈。由于受冷热和震动影响，活接头的接口易松动，等作垫圈。由于受冷热和震动影响，活接头的接口易松动，使密封面不能严密而造成渗漏。在接种时，因液体快速流使密封面不能严密而造成渗漏。在接种时，因液体快速流动造成局部真空，在渗漏处将外界空气吸入，菌就被带入动造成局部真空，在渗漏处将外界空气吸入，菌就被带入发酵罐。发酵罐。 所以，重要的管路连接大多采用法兰连接。所以，重要的管路连接大多采用法兰连接。B 法兰连

21、接法兰连接 密封可靠，压力、温度和管径的适用范围大，但费密封可靠，压力、温度和管径的适用范围大，但费用较高。用较高。 C 焊接焊接 焊接的方法比其他方法简便，且密封可靠，所以空焊接的方法比其他方法简便，且密封可靠，所以空气灭菌系统、培养液灭菌系统和其他物料管路以焊接连气灭菌系统、培养液灭菌系统和其他物料管路以焊接连接为好。接为好。 经常拆卸的管路不宜焊接。经常拆卸的管路不宜焊接。管路、管件的试漏：管路、管件的试漏： 在管路中通入压缩空气并在焊缝和连接处涂肥皂水，在管路中通入压缩空气并在焊缝和连接处涂肥皂水，如有肥皂泡发生，则有泄漏。如有肥皂泡发生，则有泄漏。3、管路的配置、管路的配置 (1)、

22、排气管与下水管、排气管与下水管 为节约管材，多个发酵罐的排气管、下水管汇集在一为节约管材，多个发酵罐的排气管、下水管汇集在一条总管路上，使用中相互串通、干扰，一只罐染菌会影响条总管路上，使用中相互串通、干扰，一只罐染菌会影响其他罐。排气管路串通连接尤甚。其他罐。排气管路串通连接尤甚。 解决方法：解决方法： 易染菌场合以每台罐具有独立排气、排水管路为宜。易染菌场合以每台罐具有独立排气、排水管路为宜。 总排气管选择大直径管子，保证通畅，不致倒流罐总排气管选择大直径管子，保证通畅，不致倒流罐内。内。 (2)、发酵罐的管路、发酵罐的管路 对于蒸汽可能达不到的死角对于蒸汽可能达不到的死角(如阀如阀)要装

23、设旁路要装设旁路(图中图中的小阀门的小阀门)。灭菌时，将旁路阀门打开，使蒸汽自由通过。灭菌时，将旁路阀门打开，使蒸汽自由通过。 接种、取样和加油等管路要配置单独的灭菌系统，接种、取样和加油等管路要配置单独的灭菌系统，使能在发酵罐灭菌后或在发酵过程中单独进行灭菌。使能在发酵罐灭菌后或在发酵过程中单独进行灭菌。 4、发酵罐与管件的死角、发酵罐与管件的死角 发酵罐及其管路如有死角存在则死角内潜伏的杂菌发酵罐及其管路如有死角存在则死角内潜伏的杂菌不易杀死，会造成连续染菌，影响生产的正常进行。不易杀死，会造成连续染菌，影响生产的正常进行。 现将经常出现死角的场合及形成死角的几种原因介现将经常出现死角的场

24、合及形成死角的几种原因介绍如下：绍如下： (1)、法兰连接的死角、法兰连接的死角 如果对染菌的概念了解不够，按照一般化工厂管如果对染菌的概念了解不够，按照一般化工厂管路的常规加工方法来焊接和安装管道法兰就会造成死路的常规加工方法来焊接和安装管道法兰就会造成死角。角。 发酵工厂的有关管路要保持光滑、通畅、密封性发酵工厂的有关管路要保持光滑、通畅、密封性好，以避免和减少管道染菌的机会。好，以避免和减少管道染菌的机会。例如例如: 法兰与管子焊接时受热不匀使法兰翘曲密封面发生法兰与管子焊接时受热不匀使法兰翘曲密封面发生凹凸不平现象就会造成死角。凹凸不平现象就会造成死角。 垫片的内圆比法兰内径大或比较小

25、以及安装时没有垫片的内圆比法兰内径大或比较小以及安装时没有对准中心也会造成死角。对准中心也会造成死角。 (2)、渣滓在罐底与环式空气分布管所形成的死角、渣滓在罐底与环式空气分布管所形成的死角 培养基中如含有钙盐及固形物，在搅拌功率较小和培养基中如含有钙盐及固形物，在搅拌功率较小和采用环式空气分布管的情况下，由于在灭菌时培养基得采用环式空气分布管的情况下，由于在灭菌时培养基得不到强有力的翻动，罐底会形成一层不到强有力的翻动，罐底会形成一层12毫米甚至更厚毫米甚至更厚的膜层的膜层(图图79)，具有一定的绝热作用，膜下潜伏的耐，具有一定的绝热作用，膜下潜伏的耐热菌不易杀死。必须定期铲除罐底积垢。热菌

26、不易杀死。必须定期铲除罐底积垢。 大的发酵罐为了减少搅拌轴的摆动，罐底装有底轴承，大的发酵罐为了减少搅拌轴的摆动，罐底装有底轴承，轴承支架处也容易堆积菌体。轴承支架处也容易堆积菌体。 在底轴承下增加在底轴承下增加小型搅拌桨小型搅拌桨可改善罐底积垢的情况。可改善罐底积垢的情况。 环式空气分布器在整个环管中空气的速度并不一致，环式空气分布器在整个环管中空气的速度并不一致，靠近空气进口处流速最大，远离进口处的流速减小，当发靠近空气进口处流速最大，远离进口处的流速减小，当发酵液进入环管内，菌体和固形物就会逐渐堆积在远离进口酵液进入环管内，菌体和固形物就会逐渐堆积在远离进口处的部分形成死角，严重时甚至会

27、堵塞喷孔处的部分形成死角，严重时甚至会堵塞喷孔(图图711)。其他容易造成死角的地区：其他容易造成死角的地区： 如挡板如挡板(或冷却列管或冷却列管)与罐身固定的支撑板周围和不与罐身固定的支撑板周围和不能在灭菌时排气的盲肠管，温度计接头等。能在灭菌时排气的盲肠管，温度计接头等。 对于这些地区每次放罐后的清洗工作应注意，经常对于这些地区每次放罐后的清洗工作应注意，经常检查仔细清洗才能避免因死角而产生污染。检查仔细清洗才能避免因死角而产生污染。 （3）、不锈钢衬里的死角）、不锈钢衬里的死角 有机酸发酵，大型碳钢发酵罐，一有机酸发酵，大型碳钢发酵罐，一般采用般采用不锈钢衬里不锈钢衬里 (厚厚13mm)

28、。 如衬里加工焊接不善，在钢板和焊如衬里加工焊接不善，在钢板和焊缝处有裂缝，或在操作时不注意、使不缝处有裂缝，或在操作时不注意、使不锈钢皮鼓起后产生裂缝，发酵液就会通锈钢皮鼓起后产生裂缝，发酵液就会通过裂缝进入衬里和钢板之间，窝藏在里过裂缝进入衬里和钢板之间，窝藏在里面形成死角。面形成死角。不锈钢皮怎样会鼓起的呢？不锈钢皮怎样会鼓起的呢？ 因衬里较薄，灭菌时，罐加热后再行冷却，不及时因衬里较薄，灭菌时，罐加热后再行冷却，不及时通入空气保压、会因蒸汽突然冷凝而形成真空将衬里吸通入空气保压、会因蒸汽突然冷凝而形成真空将衬里吸出，严重者造成破裂。出，严重者造成破裂。 所以应尽可能增加衬里的刚度，每隔

29、一定距离用点所以应尽可能增加衬里的刚度，每隔一定距离用点焊增加强度。操作时要注意避免罐内发生真空现象。焊增加强度。操作时要注意避免罐内发生真空现象。 (4)、接种管路的死角、接种管路的死角 接种一般采用以下两种方法接种一般采用以下两种方法 (A)、压差接种法。、压差接种法。 (B)、微孔接种法。、微孔接种法。 利用注射器在罐的接种口橡皮膜利用注射器在罐的接种口橡皮膜上注入罐内，在操作时要注意防止注射器针孔堵塞。上注入罐内，在操作时要注意防止注射器针孔堵塞。 压力差压力差接种时移种管路的灭菌是与发酵罐的灭菌同时接种时移种管路的灭菌是与发酵罐的灭菌同时进行的。进行的。 如图如图713a所示有一小段

30、管路存在蒸汽不流通的死角，所示有一小段管路存在蒸汽不流通的死角，所以应在阀所以应在阀1的半截上装设旁通，如图的半截上装设旁通，如图713b所示。所示。 （5）、排气管的死角）、排气管的死角 排气管弯头处如有堆积物，其中窝藏的杂菌不容排气管弯头处如有堆积物，其中窝藏的杂菌不容易彻底消灭，发酵因震动与排气冲击会剥落，造成污染。易彻底消灭，发酵因震动与排气冲击会剥落，造成污染。 排气管直径太大，灭菌时蒸汽流速小，也会使管中排气管直径太大，灭菌时蒸汽流速小，也会使管中耐热菌不能杀死。所以排气管要与罐的尺寸有一定比例，耐热菌不能杀死。所以排气管要与罐的尺寸有一定比例，不宜过大或过小。不宜过大或过小。5、

31、空气过滤器、空气过滤器 空气过滤器如纤维铺设不匀，会使部分空气因短路而空气过滤器如纤维铺设不匀，会使部分空气因短路而带菌。带菌。 纤维层装得太松、太紧都会影响过滤效率。如果太紧，纤维层装得太松、太紧都会影响过滤效率。如果太紧，灭菌时蒸汽穿透力差，灭菌效果差。所以用过分压实纤维灭菌时蒸汽穿透力差，灭菌效果差。所以用过分压实纤维层来增加过滤效率不可行。层来增加过滤效率不可行。 最合适充填密度：棉花最合适充填密度：棉花150180公斤米公斤米3；玻璃纤；玻璃纤维维130180公斤米公斤米3。 纤维分层均匀铺设是必要的。纤维分层均匀铺设是必要的。 过滤器器壁腐蚀形成过滤器器壁腐蚀形成氧化铁层氧化铁层，

32、是多孔物质，空气，是多孔物质，空气会短路，使空气中带菌并造成污染。会短路，使空气中带菌并造成污染。 活性炭棉花作为介质的过滤器，活性活性炭棉花作为介质的过滤器，活性炭受到气流的冲击而破碎、灰化、体积减炭受到气流的冲击而破碎、灰化、体积减小、空间增大，上下两端的棉花受空气的小、空间增大，上下两端的棉花受空气的顶撞力而逐渐改变位置。顶撞力而逐渐改变位置。 蒸汽灭菌时，检查排出蒸汽的情况可蒸汽灭菌时，检查排出蒸汽的情况可以判断过滤层是否有问题。以判断过滤层是否有问题。 排出蒸汽均匀并呈青色有力表示情况排出蒸汽均匀并呈青色有力表示情况良好，呈雾状无力表明压得太紧，断续不良好，呈雾状无力表明压得太紧，断

33、续不均匀以及进出口两测的压力降过小时则就均匀以及进出口两测的压力降过小时则就有可能是过滤层有位移现象。有可能是过滤层有位移现象。过滤介质变位：过滤介质变位： 不论何种过滤介质，必须保持其干燥不论何种过滤介质，必须保持其干燥。 油水分离的洁净是保证过滤效果、延长使用寿命的油水分离的洁净是保证过滤效果、延长使用寿命的关键因素。关键因素。 要根据发酵的特点和要求选用要根据发酵的特点和要求选用合理的空气流程合理的空气流程并选并选用用高效的气液分离设备高效的气液分离设备(如气液过滤网如气液过滤网)。 发酵期间需要改变空气流量，但油水分离设备、过发酵期间需要改变空气流量，但油水分离设备、过滤器是根据空气流

34、速来设计的，流速改变会影响油水分滤器是根据空气流速来设计的，流速改变会影响油水分离效果和过滤效率，设计时要充分注意这种情况，掌握离效果和过滤效率，设计时要充分注意这种情况，掌握空气流量改变的范围，选择合适的空气流速。空气流量改变的范围，选择合适的空气流速。 生产时各罐的发酵时间要尽量叉开，使空气流量均生产时各罐的发酵时间要尽量叉开，使空气流量均匀。匀。注意空气流量对发酵的影响：注意空气流量对发酵的影响： 过滤器灭菌用的过滤器灭菌用的蒸汽阀蒸汽阀的微小渗漏会使蒸汽管路的微小渗漏会使蒸汽管路中的冷凝水抽吸到过滤器内使过滤介质受潮，影响过中的冷凝水抽吸到过滤器内使过滤介质受潮，影响过滤效果，所以最好

35、装设双重阀以防渗漏。滤效果，所以最好装设双重阀以防渗漏。 灭菌和发酵时，如操作不当使罐压高于过滤器中灭菌和发酵时，如操作不当使罐压高于过滤器中空气压力，就会将冷凝水或发酵液倒灌至过滤器内。空气压力，就会将冷凝水或发酵液倒灌至过滤器内。 突然停电，空压机停转，也会发生倒灌。突然停电，空压机停转，也会发生倒灌。 过程控制过程控制主要包括接种、过程加糖补料和取样操主要包括接种、过程加糖补料和取样操作等是否严密规范。一级种子罐的接种可分为血清瓶针作等是否严密规范。一级种子罐的接种可分为血清瓶针头或管道方式或火焰敞口式接种，罐与罐之间的移种前头或管道方式或火焰敞口式接种，罐与罐之间的移种前管道冲洗或灭菌

36、不当也会出问题。管道冲洗或灭菌不当也会出问题。（五）、过程控制原因（五）、过程控制原因二、 染菌的判断和防治 发现杂菌的方法：发现杂菌的方法：常用镜检或无菌试验方法。常用镜检或无菌试验方法。 局限性：局限性：染菌初期，从镜检中发现是很难的，如能从视野染菌初期，从镜检中发现是很难的，如能从视野中发现杂菌，染菌已很严重；无菌试验通常要十来个小时才能中发现杂菌，染菌已很严重；无菌试验通常要十来个小时才能发现，再作处理为时已晚。发现，再作处理为时已晚。 种子种子有无杂菌尤为重要，如能及时检出，则可避免带菌接有无杂菌尤为重要，如能及时检出，则可避免带菌接种。种。 溶氧变化的规律也可作为染菌预报的根据。溶

37、氧变化的规律也可作为染菌预报的根据。 污染好气性杂菌，溶氧会一反往常在较短时间内下降到污染好气性杂菌，溶氧会一反往常在较短时间内下降到接近零，且长时间不回升，便很可能染菌。但不是一染菌溶接近零，且长时间不回升，便很可能染菌。但不是一染菌溶氧便掉到零，要看杂菌的种类和数量。在罐内与生产菌比，氧便掉到零，要看杂菌的种类和数量。在罐内与生产菌比，谁占优势。谁占优势。 有时会出现染菌后溶氧反而升高的现象。这是因为生产有时会出现染菌后溶氧反而升高的现象。这是因为生产菌受到杂菌的抑制，而杂菌本身又非十分好气。这样生产菌菌受到杂菌的抑制，而杂菌本身又非十分好气。这样生产菌的呼吸大为减弱而使溶氧上升。的呼吸大

38、为减弱而使溶氧上升。 补料或加油也会引起溶氧迅速下降，在低谷处维持补料或加油也会引起溶氧迅速下降，在低谷处维持13h即回升。这与染菌使溶氧的变化是不同的。即回升。这与染菌使溶氧的变化是不同的。从发酵参数的异常变化判断杂菌污染：从发酵参数的异常变化判断杂菌污染： 红霉素发酵过程中污染噬菌体或其他不明原因会出现发酵红霉素发酵过程中污染噬菌体或其他不明原因会出现发酵液变稀，溶氧迅速回升液变稀，溶氧迅速回升。图。图7-30显示红霉素发酵生产溶氧实际显示红霉素发酵生产溶氧实际监测情况。监测情况。红霉素发酵红霉素发酵 污染噬菌体常表现在发酵液污染噬菌体常表现在发酵液变稀，溶氧迅速回升。变稀，溶氧迅速回升。 谷氨酸发酵染噬菌体后发谷氨酸发酵染噬菌体后发现溶氧提前在现溶氧提前在15h上升，但上升，但OD此此时还在上升。这是由于当时的菌时还在上升。这是由于当时的菌已受侵