食用菌栽培技术

1、食用菌栽培技术第二章第二章 食用菌菌种生产食用菌菌种生产&菌种生产类型及生产流程菌种生产类型及生产流程&菌种生产的基本设备菌种生产的基本设备&培养基的配制培养基的配制&消毒与灭菌消毒与灭菌&接种与培养接种与培养&菌种的分离方法菌种的分离方法&菌种的保藏与复壮菌种的保藏与复壮&液体菌种生产液体菌种生产本章主要内容本章主要内容一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程v 菌种：菌种：n是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是

2、指人工培养，就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。v 菌种的生产类型：菌种的生产类型：n食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在生产上通常把菌种分为一级菌种（生产上通常把菌种分为一级菌种（母种）母种）、二级菌种（、二级菌种（原原种）种）和三级菌种（和三级菌种（栽培种）栽培种）。一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程菌种一级菌种二级菌种三级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。由二级菌种扩大繁殖成的菌

3、丝体，是直接用于栽培的菌种。一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程母种母种一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程原种原种一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程栽培种栽培种一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程三级菌种之间的关系三级菌种之间的关系菌种类型菌种类型制种容制种容器器培养培养基基菌株来源菌株来源用途用途要求要求一级菌种一级菌种（ 母种、母种、试管种）试管种）试管PDA、PSA种菇（孢子或菌肉组织） 扩制二级种菌种保藏 纯度高，质量好，绝对无杂菌 二级菌种二级菌种（原种）（原种）菌种瓶固体培养基一级菌种 扩制三级菌种

4、 纯度高，质量好，无杂菌三级菌种三级菌种（栽培种）（栽培种）罐头瓶、菌种袋固体培养基二级菌种 用于栽培 高纯度，高质量，无杂菌 一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程菌种生产流程：菌种生产流程：种菇一级菌种一级菌种二级菌种二级菌种三级菌种三级菌种栽培栽培一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程菌种生产工艺流程：菌种生产工艺流程：三级种培养三级种培养基制备基制备高压或高压或常压灭菌常压灭菌接种接种三级菌种三级菌种栽培栽培培养培养斜面斜面一级种培一级种培养基制备养基制备高压灭菌高压灭菌接种接种培养培养筛选筛选提纯提纯原始种原始种中试后确中试后确定一级种定一级种保存

5、保存孢子或组织分离孢子或组织分离一级种转管、扩大一级种转管、扩大菌种瓶菌种瓶二级种培二级种培养基制备养基制备高压灭菌高压灭菌接种接种培养培养二级菌种二级菌种罐头瓶罐头瓶菌种袋菌种袋一、菌种的生产类型及生产流程一、菌种的生产类型及生产流程菌种制作的四个基本环节菌种制作的四个基本环节配制培养基配制培养基灭菌灭菌接种接种培养培养二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 菌种厂的布局菌种厂的布局仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 接种设备接种设备n接种室接种室缓冲间：23m2接种间：56m2面积79m2高2.22.5m要求 6个面平滑

6、两门错开、平拉式顶装紫外灯二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 接种设备接种设备n接种室接种室清洁物品放缓冲间消毒 移物至接种间 喷消毒液 10min 后接种消毒液清洁 使用二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 接种设备接种设备n接种室接种室二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n接种箱接种箱观察窗紫外灯操作孔二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n超净工作台（净化工作台）超净工作台（净化工作台）二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n超净工作台（净化工作台）超净工作台（净化工作台）双人单人二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n接种工具接种工具n要

7、求：前端为导热性好的金属材料枪匙钩铲镊耙针环接种二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 培养设备培养设备n培养室：培养大量菌种的恒温房培养室：培养大量菌种的恒温房要求光线暗；光线暗；密闭好、通风性强；密闭好、通风性强；能升温、降温（空调机）；能升温、降温（空调机）；有培养架有培养架二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n培养室：培养大量菌种的恒温房培养室：培养大量菌种的恒温房二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备n培养箱培养箱n培养少量菌种的恒温电器（2040）二、菌种生产的基本设备二、菌种生产的基本设备v 灭菌设备灭菌设备手提式高压灭菌锅手提式高压灭菌锅高压锅外锅：装水内

8、锅：装物锅盖安全阀排气阀压力表三、培养基的配制三、培养基的配制v 培养基培养基n概念：采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，概念：采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，以供给食用菌生长繁殖的基质。以供给食用菌生长繁殖的基质。n要求：含有该菌生长发育所需要的营养物质；水分、要求：含有该菌生长发育所需要的营养物质；水分、pH适宜；必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。适宜；必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。三、培养基的配制三、培养基的配制n培养基种类培养基种类类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：原料来源状态液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%2%琼脂表面形

9、状斜面培养基平板培养基三、培养基的配制三、培养基的配制n培养基成分：培养基成分：l水分水分l碳源：单糖、双糖、多糖碳源：单糖、双糖、多糖l氮源：有机氮（氨基酸、蛋白质、尿素）、铵态氮（硫酸铵）氮源：有机氮（氨基酸、蛋白质、尿素）、铵态氮（硫酸铵）l无机盐：磷、钾、钙、镁、硫等。磷酸氢二钾对无机盐：磷、钾、钙、镁、硫等。磷酸氢二钾对pH变化具有缓冲变化具有缓冲作用作用l生长素：生长素：B族维生素族维生素l凝固剂：琼脂凝固剂：琼脂三、培养基的配制三、培养基的配制粉状条状属天然植物多糖 融点96以上凝点40 以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用琼脂三、培养基的配制三、培养基的配制三、培

10、养基的配制三、培养基的配制v 母种培养基母种培养基nPDA培养基和培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。种基础培养基。PDA 培养基培养基PSA 培养基培养基马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）200g马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）200g葡萄糖葡萄糖 20g 蔗糖蔗糖20g琼脂琼脂1820g琼脂琼脂1820g水水1000ml水水1000ml三、培养基的配制三、培养基的配制n母种培养基配制过程母种培养基配制过程煮沸2

11、0min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调节pH值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl 三、培养基的配制三、培养基的配制n母种培养基配制过程母种培养基配制过程三、培养基的配制三、培养基的配制v 原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基棉籽壳培养基棉籽壳培养基主料主料棉籽壳棉籽壳87，麦麸，麦麸10辅料辅料白糖白糖1，石灰，石灰1，过磷酸钙，过磷酸钙1棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量配制三、培养基的配制三、培养基的配制v 原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基谷粒培养基谷粒培养基主料主料麦粒、玉米粒等麦粒、玉米粒等98.5%辅料辅料石

12、膏粉石膏粉1%,碳酸钙碳酸钙0.5%调pH与分装 pH：一般为8.0左右原种培养基装大口瓶栽培种培养基装菌种袋 颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料配制四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 基本概念基本概念杀死一切微生物，包括芽孢。灭菌分为杀菌：菌体尚存溶菌：菌体消失消毒：只杀死病原菌，未伤及芽孢防腐：暂时抑制微生物生长除菌：用冲洗、过滤等法，除去微生物四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法n热力灭菌热力灭菌（一）原理高温使菌体蛋白质、核酸、酶等凝固或变性失活。四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法n热力灭菌热力灭菌（二）方法

13、 湿热灭菌 干热灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌干热灭菌热源火焰及热空气特点简便、快速、范围有限方法小的金属、玻璃器皿酒精灯烧烘箱烤大的玻璃、金属器皿四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌器皿包装1601702h干燥箱使用注意70以下开箱取物勿超180随用随开包 四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌湿热灭菌热源热蒸气或热水特点范围广、温度低、效果好、时间短方法高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌巴氏消毒四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌蛋白质凝固点与其含水量的关系蛋白质含水量蛋白质含水量(%)(%)凝固温度凝固温度()()5050252518186 60 05656747480808080909014

14、5145160160170170热蒸气穿透力大蛋白质凝固点随其含水量的增加而降低四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌干热灭菌与湿热灭菌穿透力的比较加热加热方式方式传导传导介质介质温度温度()()加热加热时间时间（h h）透过布层温度（透过布层温度（）结果结果2020层层4040层层100100层层干热干热空气空气130130140140 4 48686 72 727070以下以下灭菌灭菌不完不完全全湿热湿热饱和饱和蒸汽蒸汽 105.3 105.3 3 3101101 10l 10l 10l 10l灭菌灭菌完全完全四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌1.高压蒸气灭菌概念利用高压产生的高蒸汽温度杀灭微生物的方法

15、原理水沸点随热蒸汽压力的增加而升高密闭锅 蒸气多 压力高 沸点高四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌步骤：装锅加热排气升压保压灭菌降压出锅关键：排净冷空气注意灭菌时间和压力因物而异升降压力要稳灭菌时间从保压时算起压力降至“0”才能开盖使用四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌排气四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌纯蒸气压力与温度的关系1kg/cm2=0.098Mpa(兆帕）=98Kpa（千帕）四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌2. 常压蒸气灭菌概念利用常压产生的100蒸汽温度进行灭菌的方法 特点设备简，成本低，灭温低，时间长用法 一次性灭菌（100 ，10余h)尽快达到100 达到100 时开始

16、计时灭菌中勿降温，勿干锅四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌1.常压蒸气灭菌四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌3.巴氏消毒概念利用低于100的温度杀灭有害微生物的方法 培养料堆积发酵料温6070杀死有害微生物方法四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法n紫外线灭菌紫外线灭菌概念 利用电子射过水银气体 产生的紫外线而杀菌的方法 杀菌机理直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢使用有效距离：1.52.0m理想波长：265nm30w紫外灯照30min避光30min四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法n紫外线灭菌紫外线灭菌便携式四、消毒与灭菌四、消毒与灭

17、菌v 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法n紫外线灭菌紫外线灭菌透力很弱定期更换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤特点四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌v 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法利用化学药剂杀灭或抑制微生物的方法概念抑菌剂消毒剂灭菌剂浓度液态：喷雾、浸泡、洗刷等气态：加热、焚烧、氧化等状态划分四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n气雾消毒灭菌法气雾消毒灭菌法（一）要求密闭条件下保持一定时间（二）种类甲醛气雾盒四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n气雾消毒灭菌法气雾消毒灭菌法机理：结合蛋白质氨基， 使其变性 。喷：5%熏：10ml/m3+1/2KMnO4用法1.甲醛有刺激性和腐蚀性四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法

18、液体消毒灭菌法固体或液体药品水药液（多现配现用）概念种类氧化剂熟石灰表面活性剂乙醇酚类新洁尔灭四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法液体消毒灭菌法（一）氧化剂氧化菌体蛋白质的活性基团，使其变性。 机理种类高锰酸钾过氧化氢漂白粉过氧乙酸四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法液体消毒灭菌法1.高锰酸钾紫色针状结晶 0.1%0.2%浸泡手、器具等。 四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法液体消毒灭菌法2.过氧化氢无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒 6浸泡器皿30min四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法液体消毒灭菌法3.漂白粉2%5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒

19、作用约30min使用注意原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌4.过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。 1.5%熏蒸7ml/m30.2%洗手0.5%浸泡0.5%喷雾使用四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌法液体消毒灭菌法（二）表面活性剂脱水剂脂溶剂蛋白质变性剂1.乙醇7075效果最好 皮肤、器皿擦拭或浸泡浓度高浓度效果差无水的无杀菌作用四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌3.新洁尔灭0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾2.酚类石炭酸：3%5%浸泡或喷雾来苏尔刺激性小效力比苯酚强4倍3%5%喷雾、擦洗2%消毒手四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌n液体消毒灭菌

20、法液体消毒灭菌法（三）重金属盐类n1、氯化汞（升汞）：常用浓度、氯化汞（升汞）：常用浓度0.1%0.2%，主要用于食用菌菌，主要用于食用菌菌种分离种分离n2、硝酸银：、硝酸银：0.1%1.0%n3、硫酸铜：常配制波尔多液、硫酸铜：常配制波尔多液五、接种与培养五、接种与培养v 母种的接种与培养母种的接种与培养n接种（转管）：接种（转管）：过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多五、接种与培养五、接种与培养n培养：接种后的试管放入温箱内，于培养：接种后的试管放入温箱内，于25左右的温度条件下培养。左右的温度条件下培养。3d后检查菌丝生长情况及有无杂菌，培养

21、后检查菌丝生长情况及有无杂菌，培养715d母种菌丝即可长母种菌丝即可长好。好。五、接种与培养五、接种与培养v 原种的接种与培养原种的接种与培养n接种：接种：过程用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上五、接种与培养五、接种与培养n培养：前培养：前3-5d内直立放置，当菌丝吃料后倒卧叠放，并适时转动，内直立放置，当菌丝吃料后倒卧叠放，并适时转动，这样可以保证水分分布均匀，使菌丝生长一致。定期检查有无杂菌这样可以保证水分分布均匀，使菌丝生长一致。定期检查有无杂菌污染。原种应在污染。原种应在3个月内使用。个月内使用。五、接种与培养五、接种与培养v 栽培种的接种与培养栽培种的接种与培养n接种：接种：过程用接

22、种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及老种块勿接入五、接种与培养五、接种与培养n培养：培养：30-40d后栽培菌种即可长满菌丝，供栽培使用。后栽培菌种即可长满菌丝，供栽培使用。五、接种与培养五、接种与培养v 菌种质量鉴定菌种质量鉴定n母种质量鉴定：母种质量鉴定：1、形态（外观）：、形态（外观）：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等五、接种与培养五、接种与培养退化母种退化母种好母种好母种五、接种与培养五、接种与培养2、长势：将菌种接入合适的培养基，在适宜的温度条件下培养，、长势：将菌种接入合适的培养基，在适宜的温度条件下培养，若菌丝

23、生长快而整齐，浓而健壮，则为优良品种。若菌丝生长若菌丝生长快而整齐，浓而健壮，则为优良品种。若菌丝生长过快或过慢，菌丝不整齐且凌乱，则为劣质品种。过快或过慢，菌丝不整齐且凌乱，则为劣质品种。五、接种与培养五、接种与培养3、出菇试验：、出菇试验：栽培出菇快产量高品质好抗逆性强五、接种与培养五、接种与培养2、温度适应性：、温度适应性：仍正常生长适温培养7天 3035 锻炼4h 再适温培养五、接种与培养五、接种与培养2、干湿性鉴定：、干湿性鉴定：仍正常生长湿：15g琼脂/1000ml培养基 适宜：16.5g琼脂/1000ml培养基干：18g琼脂/1000ml培养基五、接种与培养五、接种与培养n原种与

24、栽培种质量鉴定：原种与栽培种质量鉴定：具有菌丝白（符合该菌种的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快菌种种类品种名称菌种级别代 时生产厂家接种日期用于生产没有无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象五、接种与培养五、接种与培养n原种与栽培种质量鉴定：原种与栽培种质量鉴定：产生原基五、接种与培养五、接种与培养n原种与栽培种质量鉴定：原种与栽培种质量鉴定：黄水污染六、菌种分离方法六、菌种分离方法v 孢子分离法：孢子分离法：孢子分离法概念特点操作过程利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌孢子的采集孢子的分离孢子的萌发六、菌种分离方法六、菌种分离方法v 孢子分离法：孢子分离法：孢子分离法多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法多孢分离单孢分离单个孢子萌发获得纯菌种的方单个孢子萌发获得纯菌种的方法法整菇插种法钩悬法孢子印法平板稀释法连续稀释法毛细血管法六、菌种分离方法六、菌种分离方法v 组织分离法：组织分离法：组织分离法将食用菌的部分组织移接到斜面培