杜仲叶 质量评价标准 刘电航

1、杜仲叶的质量评价标准杜仲叶的质量评价标准 刘电航刘电航 研五班研五班内容简介内容简介一、杜仲叶性状鉴定一、杜仲叶性状鉴定二、杜仲叶显微鉴定二、杜仲叶显微鉴定三、光谱鉴定三、光谱鉴定四、色谱鉴定四、色谱鉴定五、理化鉴定五、理化鉴定一、杜仲叶性状鉴定一、杜仲叶性状鉴定1 1、【名称名称】杜仲科植物杜仲的干燥叶。夏、秋二季枝叶茂盛时采收，晒干或低温烘干。2 2、【性状性状】 本品多破碎，完整叶片展平后呈椭形或卵形，长715cm，宽3.57cm。表面黄绿色或黄褐色，微有光泽，先端渐尖，基部圆形或广楔形，边缘有锯齿，具短叶柄。质脆，搓之易碎，折断面有少量银白色橡胶丝相连。气微，味微苦。3 3、主要分布在

2、贵州、四川、广西、广东、湖南、河南、甘肃、陕西、江西等省区普遍种植。杜仲叶的干燥叶二、杜仲叶显微鉴定二、杜仲叶显微鉴定p组织构造横切面 1、上表皮细胞一列，下表皮细胞一列，外披单细胞非腺毛，较少易碎。2、栅栏组织一列，内含黄棕色物质占整个叶肉组织的三分之一左右，海绵组织细胞内含胶丝。3、导管径向排列成行，形成层明显，韧皮部细胞内含棕色物质。p粉末显微特征 胶丝较多，散在或贯穿于叶肉组织及叶脉组织碎片中，成团。非腺毛单细胞多破碎，常弯曲。导管为螺纹、网纹导管。含量测定含量测定杜仲叶中分离得到的化学成分包括：木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类（槲皮素、芦丁）、杜仲胶、维生素、苯丙酸类物质（绿原

3、酸）2010年版药典中对杜仲叶含量的测定方法，以绿原酸为对照品，用HPLC法进行测定。杜仲叶中主要有效成分绿原酸具有抗菌、抗病毒、利胆、保肝、降压、兴奋中枢神经系统等作用，黄酮类化合物具有良好的抗氧化作用，可作为抗衰老、抗癌等功能保健食品的有效成分之一。半仿生法（SBE）模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理，为经消化道给药的中药试剂设计的一种提取工艺。半仿生法的工艺条件为：杜仲叶为原料，以磷酸氢二钠- 柠檬酸的缓冲溶液作为提取液，m（杜仲叶）1m（提取液）= l120，提取液pH 分别为2. 0，7. 5，8. 3，在70 ，每次提取l h，提取3 次。缺点：调PH值很繁琐，每一个中药成分的P

4、H值都有一个固定范围，很不好把握。三、光谱三、光谱鉴定鉴定UVUV鉴定鉴定 UV鉴定 甲醇、乙醇或其他溶剂的浸出物的UV光谱有相对的稳定性与特征性，其光谱特征可作为特种或品种的鉴定依据。鉴定时应与标准药材或标准图谱对照。称取分离纯化后的杜仲叶精提物粉末组分0.0027 g、用无水甲醇溶解、定容至10 mL，摇匀。 以无水甲醇为参比， 进行紫外扫描。四四、色谱鉴定、色谱鉴定色谱法反映的是中药材提取物的化学成分及含量情况，能定性定量地反映中药材的鉴定特征，具有分离能力强、分析速度快、定量准确的特点。三、色谱鉴定三、色谱鉴定HPLCHPLC法法【含量测定含量测定】 照高效液相色谱法测定。 色谱条件与

5、系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相

6、色谱仪，测定绿原酸的峰面积，即得。 本品按干燥品计算，含绿原酸(C16H1809)不得少于0.080%。四四、色、色谱谱鉴定鉴定薄层色谱法薄层色谱法TCLTCL法法供试品溶液:取含量测定项下的供试品溶液。对照药材溶液：另取杜仲叶对照药材lg，加甲醇25ml，加热回流1小时，放冷，滤过，得滤液。对照品溶液：绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg溶液。吸取上述三种溶液各510l，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7：2.5：2.5)的上层溶液为展开剂， 展开，取出，晾干， 置紫外光灯 (365nm)下检视。 五、理化鉴定纸纸层析层析- -硝酸硝酸铝比色法铝比色法纸层析-硝酸铝比色

7、法（亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法）测定杜仲叶总黄酮含量为了消除绿原酸的干扰，本研究首先采用纸层析法将样品中的黄酮与绿原酸分离，对分离出的黄酮用硝酸铝比色法进行测定。实验过程步骤供试品溶液的配置用芦丁选择测定波长用芦丁绘制吸收度的标准曲线纸层析-硝酸铝比色法测总黄酮精密度、回收率实验总黄酮含量的测定供试品溶液的配置1、 杜仲叶样品液制备 精密称取杜仲叶粉，用质量分数为70%的乙醇提取3次，每次1.5h，合并滤液，浓缩定容至50ml，吸取2ml.于50ml容量瓶中，用质量分数为30%的乙醇定容，备用。2、杜仲纯粉样品液制备 精密称取杜仲纯粉（杜仲叶水提取液浓缩干燥所得） 0.1g，用质量分数为

8、60%的乙醇定容在100ml容量瓶中，然后吸取25ml,于50ml容量瓶中用水稀释定容至刻度，备用。3、杜仲黄酮粗品供试液制备 精密称取杜仲黄酮（杜仲叶乙醇提取液浓缩后经大孔树脂吸附，用质量分数为80%乙醇洗脱，收集洗脱液后，回收溶剂浓缩干燥所得）0.1g,用水溶解在100ml容量瓶中，备用。测定波长的选择和工作曲线的绘制测定波长的选择和工作曲线的绘制精密称取芦丁20mg（烘至恒重）置100ml容量瓶中，加质量分数为60%的乙醇定容至刻度，摇匀，取25ml用蒸馏水稀释至50ml，准确吸取0、1.0、2.0、3.0、4、0、5.0ml别置于10ml具塞试管中，先加质量分数为5%的亚硝酸钠溶液0.

9、3ml，摇匀，放置6min，再加入质量分数为10%的硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6min,再加入1mol/LNaOH溶液4.0ml, 分别用质量分数为30%的乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min，在480、540nm的波长范围内进行扫描，选择最佳吸收峰波长，并在此波长下作工作曲线。标准曲线的绘制标准曲线的绘制 精密称取于120干燥至恒重的芦丁20mg,用甲醇在10ml，容量瓶中定容，用10l 微量进样器点样，点样量分别为10、20、30、40、50l ，然后用溶剂系统用BAW溶剂（正丁醇:冰醋酸:水=4:1:2（体积比）分别在层析缸中展开，挥干溶剂后在365nm紫外分析仪下观察，将褐色带状

10、部分剪成细条，分别装在10ml 具塞试管中，各加入5ml甲醇，超声波震荡20min，取出加入硝酸铝显色剂，在510nm下测定吸光度，绘制出标准曲线，回归方程为A=0.02+6.1cry=0.9992其中，A为吸光度；c为浓度(mg/g)；r为回归系数。测定步骤 将杜仲叶的乙醇提取物（或各种杜仲制品的溶液）定量点样于层析纸上，用BAW溶剂（正丁醇:冰醋酸:水=4:1:2（体积比）系统展开，在365nm紫外分析仪下，杜仲中所含的各种黄酮为棕褐色的谱带（自然光下为淡黄色），绿原酸为强烈的蓝色荧光带。将代表黄酮的谱带用铅笔标记后剪下，处理方法同上，测定吸光度并下测定吸光度根据标准曲线计算总黄酮含量。若需要，可将发荧光的绿原酸谱带剪下，并进行含量测定。 精密度试验 精密度试验以杜仲粗黄酮为样品，平行称取5份，用上述方法进行测定，结果如表所示。从下表可以看出，用纸层析-硝酸铝比色法测定杜仲中的总黄酮，标准差为10.6，说明该法重现性好。回收率试验回收率试验以杜仲黄酮粗品为供试样，加入芦丁标准品，进行回收率试验，结果如表B所示。由表B可以看出，该方法测定的平均回收率为99.75%。杜仲叶总黄酮含量的测定杜仲叶总黄酮含量的测定 用纸层析-硝酸铝比色法对杜仲叶中的总黄酮进行了测定。由下表可见，总黄酮平均含量为13.6mg。这一结果，与实际