实验十环糊精增敏4-羟基香豆素衍生荧光法测定肉制品中痕量

1、实验十 环糊精增敏4-羟基香豆素衍生荧光法测定肉制品中痕量亚硝酸盐1 实验目的n（1）学习衍生荧光法。n（2）学习环糊精增敏荧光法的原理2 实验原理n 亚硝酸盐是食品、环保、纺织及电镀等工业中重要的分析项目之一。亚硝酸盐可能与蛋白质分解产物仲胺类物资结合，生成致癌物质亚硝胺，食品中亚硝酸盐含量必须控制在一个很低的水平。亚硝酸盐本省无荧光，不能用荧光法直接测定。衍生荧光法借助一定的化学反应，可以测定那些本身不发荧光的物质，亦可通过衍生反应，改变被测组分的化学组成和结构，借助于发光特性（波长、强度等）的改变，提高测量的选择性和灵敏度。n酸性介质中，亚硝酸根能与过量4-羟基香豆素迅速反应形成低荧光性

2、的亚硝基衍生物一3-亚硝基4-羟基香豆素，该产物经 Na2S2O3还原为 3-氨基4-羟基香豆素后，在碱性介质中能发射较强的荧光，若有适量-环糊精(-CD）存在，由于-CD对发光体的包络作用，荧光强度大大增强，可显著提高测量的灵敏度。体系的/ =332urn457urn，亚硝酸盐（以 NaNO2计）在 11200ng25mL浓度范围内与荧光强度呈良好线性关系，检出限40pgmL。本法灵敏度高，选择性好，可用于水样、肉制品中痕量亚硝酸盐的测定。 3 仪器与试剂 n 仪器：日立 M850荧光分光光度计（或 PE LS-50B型发光光度计）：基本操作参见附录 n参数设置如下： n带通（Bandpas

3、）：EXEM30nm n增益（PM gain）：Normal； n 2 5mL定量试管（容量瓶）n分度吸量管。 试剂n4-羟基香豆素溶液：用1：1（体积比）的乙腈-2mol/L盐酸混合液配制成0.04溶液；n NaNO2标准溶液：NaNO2（A R级）于110红外灯下干燥4h后，用水配制1mg/mL标准溶液，在冰箱中保存（每周新配一次），用时用水准确稀释到1g/mL；n -CD溶液：用市售品经水重结晶的-CD配制成0.01 mol/L水溶液；n Na2S2O3（A R级）8水溶液；n 1.5mol/LNaOH水溶液；n pH 9.6NH4Cl-NH3H2O缓冲溶液；n KAl（SO4）2饱和水

4、溶液。5 注意事项n（1）NaNO2水溶液不稳定，其标准溶液要新配制，并注意保存。n（2）4-羟基香豆素的亚硝基化反应要在冰水浴中进行n（3）检出限测定中的空白实验，按规定应做更多的次数。实验时应特别注意容器的清洗。6 数据处理和结果表达n（1）选择 NaNO2含量相同的试样（如含0.05mL 1gmL NaNO2标准液）实验比较有、无CD时的荧光激发和发射光谱图，说明CD的增敏作用。n（2）由实验数据拟合工作曲线方程，并按照国际纯粹及应用化学联合会（IUPAC）规n定，以试剂空白荧光值的3倍标准偏差除以工作曲线斜率，计算本法测定 NaNO2的检出限。 （3）计算加标回收率（）和肉制品中NaNO2含量，并与国家食品添加剂使用卫生标准GB2760一81进行比较，判定是否合格。7 思考题n（1）为什么4 -羟基香豆素的亚硝基化反应要在冰水浴中进行？n（2）从发光物质激发态的辐射和