肝精补血素口服液质量标准的完善.docx

1、StandardForum肝精补血素口服液质量标准的完善基金项目：国家药典委员会国家药品标准提高项目(2015Z103)第一作者简介：申二永#主管药师J研究方向：中药检验.彳Tel：037165566064018625569068Email：sheneryongsinacom肝精补血素口服液质量标准的完善基金项目：国家药典委员会国家药品标准提高项目(2015Z103)第一作者简介：申二永#主管药师J研究方向：中药检验.彳Tel：037165566064018625569068Email：sheneryongsinacom申一永1。金建闻2甫李杨1(1.河南省食品药品检验所i国家药品监督管理局中

2、药材及饮片质量控制重点实验室i郑州450018；2.河南省食品药品审评查验中心，郑州450018)摘要目的：修订并提高肝精补血素口服液的质量标准用方法:研究并建立了党参、枸杞子的薄层色谱鉴别B建立了HPLC法测定维生素B1的含量贝修订方中枸椽酸铁铉的含量测定方法5建立肝精膏的标准M结果:党参、枸杞子的薄层图谱均与相应的对照药材在相同位置上显现相同颜色的斑点府且阴性样品无干扰MHPLC法测定维生素B,采用的色谱柱为AgelaVenusilASBC18柱(粒径56mmx250mm)府流动相为乙月青一01%磷酸(每100mL含05g十二烷基硫酸钠)(50：50河检测波长为246nmnf维生素在475

3、857096ng进样范围内线性关系良好由标准曲线为Y=23161X-12943#r=09997,回收率为1016%(RSD=24%)M结论：肝精补血素口服液的质量标准经完善后府方法可行由有利于保障该药品的质量川关键词：肝精补血素口服液0质量标准提高M党参0枸杞子0维生素B1中图分类号：R9212文献标识码：A文章编号:1009-3656(2021)03-0220-07do二1019778/jchp202103005TheimprovementofspecificationofGanjingbuxuesuOralLiquid*SHENEryongJINJianwen2fLIYang1(1Hena

4、nInstituteforFoodandDrugControl-NMPAKeyLaboratoryforQualityControlofTraditionalChineseMedicineandDecoctionPieces-Zhengzhou450018-ChinajH2enanFoodandDrugEvaluationandInspectonCenter-Zhengzhou450018-AbstractObjective:ToreviseandimprovethespecificationofGanjingbuxuesuOralLiquidMethods:TLCidentification

5、ofCodonopsisradixandLyciifructuswasstudiedandestablishedHPLCmethodwasestablishedforthedeterminationofVitaminB1ThetestmethodofferricammoniumcitratewasrevisedandthespecificationofliveressencecreamwasestablishedRe5uIls:TheTLCofCodonopsisradixandLyciifructusshowedthesamecolorspotsinthesamepositionswitht

6、hecorrespondingcontrolherbs-andthenegativesampleshadnointerferenceVitaminBiwasdeterminedinAgelaVenusilasbCi8column(46mmx250mm-5/m)undertheisocraticelutionofacetonitrile01%phosphoricacid(05gsodiumdodecylsulfateper100mL)(50：50)Thedetectionwavelengthwas246nm;andtherecoverywas1016%withRSDas24%Thelinearr

7、angeofVitaminBifellinto475857096ng:andtheregressionequationwasY=23161X-12943(r=09997)Conclusion:TheimprovedspecificationofGanjingbuxuesuOralLiquidisfeasibleandcanguaranteetheproductqualityKeywords:GanjingbuxuesuOralLiquid-improvementofspecification：Codonopsisradix-Lyciifructus-VitaminBi肝精补血素口服液由肝精膏、

8、党参、枸杞了、枸椽酸铁铉、维生素B1等5种药物组成U系仿上海力维隆补血口服液彳处方中去掉烟酸、抗坏血酸及一些辅料R同时改变各药的处方量巾增加党参、枸杞子$并定名为肝精补血素口服液巾收载于1984年版河南省药品标准i现收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册f经国家药监局网站查询后表明全国现有4个生产厂家、4个批准文号N方中的肝精膏彳由新鲜或冷藏的猪肝提取制得用具有补肝养血、明目的功效P党参补中益气、健脾益肺P枸杞子滋养肝肾、益精明目J枸椽酸铁铉为造血原料B对治疗缺铁性贫血有效P维生素B1促进糖代谢N以上五味构成肝精补血素口服液的组方R起到养血益气、气血双补的作用对治疗缺铁性贫血具有良好的作用或

9、4斗现行标准为部颁第十三册WS3B_2530_97i标准较早。多种药味控制缺失K枸椽酸铁铉的测定方法存在终点判定误差较大等问题未收载原料肝精膏的质量标准#根据中药质量标准研究制定技术要求、中华人民共和国药典2020年版以及国家药品标准提高工作科研立项任务单2015Z103中的要求f对该质量标准进行了研究完善.*研究并建立了党参、枸杞子的薄层色谱鉴别建立了维生素B1的含量测定P修订并建立了原子吸收火焰法测定枸椽酸铁铉中Fe的含量0建立了肝精膏的标准#1仪器与试药1 1仪器薄层色谱数码成像系统(瑞士卡玛TLCVisuali-zer)j高效液相色谱仪一二极管阵列检测器(Waterse2695)j分析

10、天平(梅特勒)；2试药党参对照药材(121057-201206)、枸杞子对照药材(121072_201611)和维生素B】对照品(100390-201806)均购自中国食品药品检定研究院；Fe标准溶液(19C0068)购自国家有色金属及电子材料分析测试中心K硅胶G板购自青岛海洋化工厂分厂正丁醇、浓氨、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、等均为分析纯N均购自国药集团化学试剂有限公司N样品来自全国生产企业3家巾合计21批由分别为河南某公司(简称企业函批号20140805.20150510.20150805)!河南省某公司(简称企业B(批号170101、170102、180901、180902、190801

11、、191213.200301.200302）j开封某公司（简称企业Ci批号H18010.H18O12.H18013.H18014、H18015.H18016、H18017、H18018、H18019、H18020）I2方法和结果21党参薄层色谱鉴别取肝精补血素口服液20mU用水饱和正丁醇提取3次K每次15mLil合并正丁醇液if用氨试液洗涤2次H每次15mJ弃去氨试液R正丁醇液置水浴上蒸干R残渣加甲醇1mL使溶解R作为供试品溶液j另取党参对照药材3g：'加水50mL煮沸1hi滤过R滤液浓缩至约10mU加乙醇15mU过滤#滤液挥去乙醇H同供试品溶液“用水饱和正丁醇提取3次”同法制成对照药

12、材溶液N模拟肝精补血素口服液生产工艺制备缺党参阴性样品H同法制备阴性样品溶液i照薄层色谱法i吸取上述三种溶液各5山分别点于同一硅胶G薄层板上以甲苯一乙酸乙酯-甲酸(15：5：2)为展开剂展开i取出i晾干i喷以硫酸乙醇(1：1)溶液i105°c加热至斑点显色清晰i置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中i在与对照药材色谱相应的位置上n显相同颜色的荧光主斑点n阴性样品无干扰*见图M1234567K910II12H1234567K910II12H1.党参对照药材溶液(Codonopsisradixreferencesubstance)25.创kB(批号170101、170102、180

13、901、180902)manufacturerB(batchNo17010V'170102(18090V180902)69.企业C(批号H18017.H18018sH18019,H18020)manufacturerC(batchNoH18O174H18018CH18019：H18020)1012.企业A(批号20140805、20150805、20150510)CmanufacturerA(batchNO20140805-20150805-20150510)13.缺党参药材阴性样品(negativecontrolwithlackofCodonopsisradix)图l党参鉴别薄层色谱

14、图Fig1TLCofCodonopsisradix1 2枸杞子薄层色谱鉴别取肝精补血素口服液15mlJ用乙酸乙酯提取3次B每次10mlJ合并乙酸乙酯液*隹水浴上浓缩至1 mU作为供试品溶液3另取枸杞子对照药材1照加水30mU加热煮沸15min*放冷滤过*滤液同法制成对照药材溶液I模拟肝精补血素口服液生产工艺制备缺枸杞子阴性样品*同法制备阴性样品溶液i照薄层色谱法试验;吸取上述三种溶液各5分别点于同一硅胶G薄层板上彳以乙酸乙酯一三氯甲烷-甲酸(3：2：1)为展开剂1展开，取出：晾干S置紫外光灯(365nm)下检视:供试品色谱中i在与对照药材色谱相应的位置上R显相同颜色的荧光斑点R阴性样品无干扰。

15、见图2$234567X9101.枸杞子对照药材(Lyciifructusreferencesubstance)2.缺枸杞子药材阴性样品(negativecontrolwithlackoffructuslycii)35.企业B(批号170102、180901、180902)manufacturerB(batchNo.170102f180901(180902)68.企业C(批号H18017、H18018、H18019)manufacturerC(batchNoH18017fH18018-H18019)910.企业A(批号20150805、20150510)manufacturerA(batchNo

16、20150805;20150510)图2枸杞子鉴别薄层色谱图Fig2TLCofLyciifructus23维生素B1含量测定2 3l色谱条件与系统适用性试验色谱柱AgelaVenusilASBCi8tt(46mmx250mm-5柱温35°C)以乙腊01%磷酸(每100mL含05g十二烷基硫酸钠)(50：50)为流动相i流速1mLmin检测波长为246nmti理论板数按维生素Bi峰计算不低于2000逆叫32溶液的制备232I对照品溶液取维生素B1对照品适量i精密称定加含01%甲酸的20%甲醇溶液制成每1mL含25的溶液f作为对照品溶液H2322供试品溶液精密量取本品5mU置10mL量瓶

17、中，加含01%甲酸的20%甲醇溶液i'定容至刻度&摇匀i滤过R取续滤液R即得§2323阴性样品溶液模拟肝精补血素口服液生产工艺制备缺维生素B1的阴性样品i按“2322”项下方法制备阴性样品溶液！233专属性试验分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品洛液各10jUL注入高效液相色谱仪8记录色谱图#结果显示阴性样品无干扰#证明本方法测定含量专属性良好*见图3H234精密度试验精密吸取同一对照品溶液（含维生素2773UgmL的对照品溶液）10“U重复进样6次i以维生素B,的峰面积计算RSD为0247%，仪器精密度良好：235检测限与定量限用信噪比法测定彳维生素B1的检测限和

18、定量限分别为二0952ng和2856ngl236线性关系考察取维生素Bi对照品适量i精密称定，加含01%甲酸的20%甲醇溶液制成每1mL含11895曙的溶液。精密量取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10、12mL分别罔.25mL量瓶中:加含01%甲酸的20%甲醇溶液稀释至刻度彳制成7种不同浓度分别为4758、9516、19032、28548、38064、47580、57096”gml_T的对照品溶液；精密吸取上述7种对照品溶液各10Z/U注入液相色谱仪*测定计算得到线性回归方程：Y=23161X-12943r=09997样品在475857096ng进样范围内线性关系良好H237稳定性试验精密

19、吸取室温放置的同一供试品溶液（企业C批号H18016）10"Li分别在0、2、4、6、8、10、12h依法测定;'维生素B1的峰面积的RSD为14%i表明供试品溶液在12h内稳定用1 38耐用性使用五根不同商品规格的色谱柱#测定同一批号样品（企业Ci批号H18016）i结果见表U方法耐用性良好N239加样回收实验取已知含量的本品（企业CH批号H18016#维生素印浓度542/gmL_1）25mU量取9份：分别精密加入维生素岛对照品溶液（1167/gmL'1）10、12、14mL各3份i加含01%甲酸的20%甲源溶液分别定容至10mU制备加样供试品溶液月精密吸取对照品溶

20、液与供试品溶液各10Z/U分别注入液相色谱仪。测定维生素B1的含量*计算回收率f结果见表2fo.io0.080.060.040.02010020（VitaminB1）表l不同商品规格的色谱柱测定结果Tab!Therobustnesstestresultsofdifferentcolumns色谱柱（column）VitaminBi（j/gmL'）AgelaVenusilASBCis542PhenomenexGeminiCisAgilentZORBAX553SBCis549CHROMMATRIXInnovationCis548AgilentZORBAXEclipseXDBCi8556RSD

21、%10本品21批样品的含量#结果见表3寸2311维生素B1含量限度的拟定根据“2310”项下测定结果以及处方投料量拟定维生素B1的含量限度K17批样品平均值为每1mL含维生素B1为50理论值为100gmL".维生素B1图3维生素B1对照溶液（A）供试品溶液（B）阴性对照溶液（C）色谱图F:g3HPLCchromatogramsofVitaminBreferencesolution（A）Atestsolution（B）andnegativecontrolsolution（C）310样品测定按“231”“233”项下含量测定方法测定（01g制成1000mL）J转移率较低i考虑原因应该为灌

22、封后高温灭菌工艺所致巾维生素B1遇热不稳定彳所以造成整体转移率不高用综合样品的测定数据*建议按平均值的80%设定限度R设定为每1mL含维生素印不得少于400问22424枸椽酸铁铉中总铁的测定24I标准曲线的制备取铁单元素标准溶液*用2%硝酸溶液稀释制成浓度分别为05、1、2、3、4、5mgL'1的系列标准溶液H以相应的试剂作为空白彳照原子吸收分光光度中国药品标准DrugStandardsofChina202122（3）法i在2483nm波长处测定吸光度i以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标B绘制标准曲线。线性方程为：Y=00654X+00052r=09970标准溶液在05mgL-1范围内吸光

23、度线性关系良好月表2回收率试验结果（n=3）Tab?TherecoveryresultsofVitamin取样量(amountofsampling)样品含量(contentofsample)ilg对照品加入昂：（added）j/g总测得量(measured)pg回收率(recovery)%平均回收率(averagerecovery)%RSD/%2513551167257103510162425135511672529992513551167254101325135514002761003251355140027398125135514002749892513551634305104525135

24、51634304103825135516343041038Fe标准溶液04.05.06mb定容后测定i计算回收率i结果见表5!表3样品测定结果Tab3Thetestresultsofsamples加硝酸510mL混匀li盖好内盖ii旋紧外套It置适宜的微波消解炉内进行消解N消解完全后#消解生产企业批号VitaminBi/内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽并近(manufacturer)(batchnumber)(“gml_T)干ll用2%硝酸溶液转移至50mL量瓶中1精密量A20140805398取2mU用2%硝酸溶液稀释至20mL量瓶中B摇A20150510332匀R作为供试品溶液N同法

25、制备试剂空白溶液NA20150805432依法测定吸光度#从标准曲线上读出供试品中总A180901546B170102526铁的量甘B180902526243不同方法及仪器的比较B170101528取供试品（企业C（批号H18016）!按照原质量B1908011228标准的滴定法、本法以及ICP'MS法，分别使用德国B1912131018耶拿AAS_ZEEnit700P型、GBCSavantAA型以及安B200301892捷伦ICP_MS7900进行测定口°i结果见表4JB200302938CH18010534CH18012528表4不同方法及仪器的比较cH18013546T

26、H4ThecomparisonofdifferentmethodsandinstrumentscH18014538方法(methods)Fe含量(contentofFe)/(mgmL1)cH18015534滴定法(titration)076cH18016542火焰法-耶拿（AAFJena）150cH18017520火焰法"GBC(AAFGBC)151cH18018502ICPMS-安捷伦QCPMS-Agilent)149cH18019526c收率242测定法精密量取本品1mU置聚四氟乙烯消解罐内B取批号为H18016企业C的样品（Fe浓度为1498mgmL&

27、#39;）9份i各精密量取05mL-分为3组6每一组分别精密加入浓度为1000mgl_T的表5回收率结果(n=3)Tab5TherecoverytestresultsofFe样品的Fe量(amountofFeinthesample)mg对照加入Fe虽(Feadded)mg总测得量(measured)mg回收率(recovery)%平均回收率(averagerecovery)%RSD/%0749041149100010061507490411511005074904115210080749051251100407490512349700749051258101807490613581015074

28、90613571013074906135910172 5肝精膏质量标准的建立原标准收载的附录标准为肝浸骨£未收载肝精膏质量标准但处方中使用的原料为肝精膏1因此需建立肝精膏的质量标准寸肝精膏是由肝浸膏经醇沉后的精提制得A经调研相关生产企业实际生产工艺A增加了肝精膏名称和来源项j增加了肝精膏的制法j确定了肝精膏的性状通过建立总固体（不得少于400%）、醇中溶解物（不低于300%）、水中不溶物（不得过70%）、相对密度（不低于115）的检查项以确保肝精膏的质量N3讨论3 1薄层色谱方法的建立原标准未收载党参及枸杞子的鉴别方法N本实验通过查阅相关文献&主要参考了提取原理4展开剂*建立

29、了党参及枸杞子的TLC鉴别方法*能够有效地提高对该两味药材的质量控制M在建立薄层色谱方法时B分别考察了不同环境和薄层板对色谱分离的影响R结果表明党参及枸杞子在不同的环境条件下以及使用不同的薄层板K色谱耐用性良好。色谱斑点均能有效分离H同时N实验中发现汁党参鉴别实验在色谱显色时8需要将显色剂喷至近湿的程度后再加热才可确保斑点显色清晰B分析原因可能与特征组份需要与较多的硫酸反应有关K2维生素B1含量测定方法的建立原标准未收载维生素B1的鉴别或含量测定方法B本实验通过参考文献的系统适应性条件等K建立了通过HPLC法测定维生素B1含量的方法月考察了30°C、35°C和40°

30、;C的柱温条件#结果表明柱温对实验结果影响不大彳故选用35°C作为柱温条件N还考察了6种不同填料及新旧的色谱柱£发现AgelaVenusilASBC18色谱柱以及AgilentZORB_AXSB_C18色谱柱分离效果最好！能将样品中维生素B1出峰前的小干扰峰完全分离彳建议实验人员在选择色谱柱时加以注意在前处理方法考察时比较了直接进样和稀释1倍进样的方式R结果发现直接进样方式由于杂质过多易造成色谱柱超载R影响色谱图峰形R且对色谱柱损坏过大K故采用稀释1倍方式进样H维生素B1的收率较低，是由于维生素B1对热不稳定所致S有文献报道维生素B,降解后会生成5-羟甲基异啜哩、2一甲基一

31、3-吠喃硫源等脂肪族含硫化合物、含硫段基化合物等。建议在进一步的研究中研究阐明降解组分.与主成分之间的联系口巧2 3枸椽酸铁铉测定方法的改进原标准收载的方法为滴定法测定总铁的含量#原理为间接碘量法彳存在诸多问题V查阅该部颁标准的起草说明该滴定方法的建立主要是参照了枸椽酸铁铉原料含量测定方法口2（由于肝精补血素口服液组方后*成分较枸椽酸铁铉原料复杂*存在终点判断因人而异从而导致结果误差较大的问题经调研相关生产企业B企业为规避上述问题V一般采用加大投料量的方式加以解决*最大投料量为处方量的16倍之多i表明现行质量标准可能存在问题1亟需改进N本法采用了微波消解-火焰法测定总铁含量*方法准确简便较原方

32、法可排除辅料及人为影响因素K34小结通过建立党参、枸杞子的薄层色谱鉴别H建立维生素B1的含量测定彳修订总铁的测定方法彳建立肝精膏的质量标准彳有效地提升了原肝精补血素口服液质量标准彳可以更有效地保证肝精补血素口服液药品的质量#参考文献1河南省药品标准二豫QWS134'84肝精补血素CSJ.1984HenanProvincialDrugStandardYuQWS13484edition:GanjingbuxuesuLS.19842卫生部药品标准WS3B'2530_97i中药成方制剂二肝精补血素口服液第十三册SJ.1997DrugSpecificationsPromulgatedby

33、theMinistryofPublicHealth.PRChinaWS3B253097-ChineseMedicinePrescriptionPreparation:GanjingbuxuesuoralliquidVolume13S.1997谷聚爱f王志芹4杜雪芬(等肝精补血素口服液治疗婴幼儿缺铁性贫血疗效观察J.河南中医20131(B10):13GUJAiWANGZQDUXFie:al.TherapeuticEffectofGan_jingbuxuesuoralliquidonirondeficiencyanemiaininfantsJ.HenanTraditChinMed-2013(B10

34、):13韩海年n宫临征i张金霞肝精补血素联合铁剂治疗缺铁性贫血临床观察】J.中国误诊学杂志-2007-7(19):4467HANHN-GONGLZ：ZHANGJXClinicalobservationofGanjingbuxueSucombinedwithferraliumintreatmentofirondeficiencyanemiaJ.ChinJMisdiagni2007(7(19):44675中华人民共和国药典2020年版四部】S.2020:49-591611327ChP2020VolIVES.2020:49-596V3276苗明三常用中药定性定量分析技术M.北京:人民卫生出版社1999MIAOMSQualitativean