达肝清颗粒提取工艺的研究

1、达肝清颗粒提取工艺的研究                       作者：吴玉强， 邓家刚，王志萍，冯旭【摘要】  目的 优选达肝清颗粒最佳的提取工艺。方法采用正交实验法，以人参皂苷Rg1含量及干膏率作为评价指标，筛选最佳的提取工艺。结果达肝清颗粒最佳提取工艺为：药材加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先将药材浸泡1 h。结论优选出的达肝清颗粒的提取工艺稳

2、定合理可行。 【关键词】  达肝清颗粒； 提取工艺； 正交设计； 人参皂苷Rg1病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病，我国病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位，仅慢性乙型肝炎病毒携带者就达1.3亿1。河南学术科研网慢性乙型肝炎病程迁延，如得不到及时的治疗，将会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康2。达肝清颗粒原方系长期用于临床实践的经验方达肝清汤剂。其由广西特色药材绞股蓝、三姐妹、黄根等7味药组成,具有清热解毒、益气健脾、利湿等功效。现代药理研究表明达肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能3、抗肝纤维化4的作用。为了将达肝清汤剂更好地应用于临床上，广西中医学院研究开发

3、出服用、携带方便的达肝清颗粒剂，并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。1  仪器和材料1.1  仪器与设备 RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）； Agilent1100（DAD、VWD）高效液相色谱仪； HB43水分测定仪（梅特勒-托利多中国地区）。1.2  材料绞股蓝、三姐妹（三叶香茶菜）、黄根等多味药材均购自南宁市日益旺中草药材经营部，经鉴定为正品。人参皂苷Rg1标准品购自中国药品生物制品检定所（批号：110703-200322）。2  方法与结果2.1  考察指标的确定 达肝清颗粒处方中有多味药材，有效成分众

4、多，因此以干膏率作为考察指标之一较全面合理，君药绞股蓝的主要有效成分为人参皂苷Rg1，故将人参皂苷Rg1作为考察指标。2.2考察指标的测定方法按处方比例称取黄根、三姐妹等药材适量，共9份，根据L9(34)正交实验设计表，将药材浸泡适当时间后提取。提取完毕后浓缩到密度1.05 g/ml(6070)，醇沉(水提液95%乙醇=12，醇沉24 h)，弃去沉淀，得醇沉液，测量其体积，备用。将不同条件下的水提液分别浓缩至相对密度为1.20（65），称重。称取2 g，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，并于105干燥至恒重，取出，置于干燥器中放置30 min，迅速精密称定干膏重量。  &

5、#160; 干膏率（%）=干膏重×浓缩液总重取样量×生药总量×100%色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水（2080）为流动相；检测波长为203 nm。柱温为35，流速为1 ml/min，理论塔板数按绿原酸峰计应不低于4 000。    对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇溶解，制成每毫升含人参皂苷Rg1 2.03 mg的溶液，即得。    供试品溶液的配制：精密量取50 ml醇沉液放入蒸发皿中，水浴蒸干，加30 ml水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，30 ml

6、/次，合并萃取液，再用氨试液(氨水水=11.5)洗两次，40 ml/次，蒸干正丁醇，加适量甲醇溶解，将甲醇液移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。取部分溶液离心20 min（12 000 r/min），即得。    测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪测定其峰面积，计算人参皂苷Rg1含量。2.3  正交实验法优选提取工艺选择对提取效果有重要影响的3个因素（加水量、提取时间、提取次数）作为考察因素，每个因素选取3个水平，编制4因素3水平表。见表1。表1  水提工艺因素水平（略）河南学术科研网按处方的一定比例称取

7、药材，根据L9(34)正交表安排，分别以干膏率、人参皂苷Rg1含量为考察指标进行试验。结果见表24。液相图见图12。表2  L9(34)正交实验安排和结果，表3  方差分析（以干膏率为考核指标），表4  方差分析（以人参皂苷Rg1为考核指标）（略）。    从以上方差分析结果可以看出：以干膏率为评价指标时，A，B因素有显著性影响，影响因素顺序为：B> A > C，且A2，B2，C3最佳，所以最佳工艺为A2B2C3；以人参皂苷Rg1为评价指标时，B因素有显著性影响，影响因素顺序为：B>A>C；且A2，B2，C3最

8、佳，所以最佳工艺为A2B2C3。综合比较上述结果，由于C因素各水平间的差异不显著，从实际生产节约时间和节约能源考虑，B因素选第2水平，A因素选第2水平， C因素选第2水平，即A2B2C2。即加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先将药材浸泡1 h。2.4   最佳提取工艺验证为了进一步验证正交试验结果的准确性，以确保提取工艺合理可行，按上述工艺条件A2B2C2，重复安排3批试验。结果见表5。表5  水提工艺验证结果（略）3  讨论    采用正交设计，确定了水提工艺的最佳条件，即：即称取水提取部分药材，加入药材量10

9、倍体积的水，加热提取两次，1 h/次。其中第1次提取前先将药材浸泡1 h。验证试验结果表明提取工艺稳定。【参考文献】  1崔玉, 詹林盛. 乙型肝炎病毒动物模型研究进展J. 生物技术通讯, 2007, 18(2):307.2中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案J. 中华传染病杂志,2001,9(1):56.3邓家刚, 覃文慧, 涂燕云，等. “达肝清”抗乙肝病毒、降酶及调节免疫功能临床观察J. 广西中医药, 2007, 30(1):13.4邓家刚, 郑作文, 王勤，等. 达肝清对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的保护作用J.中药药理与临床, 2007, 23(2):54.河南学术科研网    QQ空间    新浪微博