选择性垂体甲状腺激素抵抗综合征患者的临床特点与THRβ基因突变的研究

1、选择性垂体甲状腺激素抵抗综合征患者的临床特点与THR基因突变的研究         11-01-09 14:03:00     作者：施秉银，梁静    编辑：studa20【摘要】  目的 研究2例选择性垂体甲状腺激素抵抗综合征患者的临床特点及甲状腺激素受体(THR)基因突变，探索该病的发病机制。方法 收集2例患者及其父母的临床资料并留取外周血标本，提取基因组DNA，应用PCRDNA直接测序的方法研究患者及父母的THR基因有

2、无突变。结果 2例患者及父母的THR基因第1-10外显子未发现突变。结论 散发性垂体甲状腺激素抵抗综合征患者发病可能与THR基因突变无关。 【关键词】  激素抵抗；甲状腺激素受体；基因；突变ABSTRACT: Objective  To study the clinical and THRgene mutation of two cases of pituitary thyroid hormone resistance. Methods  The clinical data and peripheral blood samples of the patients

3、and their family members were collected, and then DNA was isolated. PCR and direct sequencing techniques were performed to determine if there were mutations in their THRgene. Results  No mutation was found in exon 1-10. Conclusion  Pathogenesis of sporadic pituitary resistance to thyroid h

4、ormone usually has no relation with mutation of THRgene.KEY WORDS: hormone resistance; thyroid hormone receptor; gene; mutation甲状腺激素抵抗综合征(thyroid hormone resistance syndrome, THRS)是由于甲状腺作用的靶器官对甲状腺激素的反应性降低而引起的一种常染色体显性遗传性疾病，血清游离T3(FT3)和/或游离T4(FT4)升高，同时伴有不适当正常或升高的血清促甲状腺激素(TSH)水平是该病的典型生化特征1。以家族性发病多见，有大约

5、15%的散发病例。自1967年Refetoff等2报道第一例患者以来，目前已经发现了250多个家系，700多例患者34。国内近年来也有病例报道5。国内外的研究者从分子遗传学、分子生物学和内分泌学等多侧面对这些病例进行了研究。1988年Usala等6通过限制性片段长度多态性分析证实该病与甲状腺激素受体(THR)基因突变有关。截止目前仅有几例散发的THRS病例报道。本研究采用聚合酶链反应(PCR)DNA直接测序的方法，检测我院门诊2例选择性垂体甲状腺激素抵抗综合征(pituitary resistance to thyroid hormone, PRTH)患者及其父母的THR基因突变率最高的1-1

6、0外显子，并结合临床特点，从分子水平探讨该病的发病机制。1  资料与方法1.1  临床资料 患者1，女性，29岁，因“听力下降27年，怕热、多汗、心悸3年”就诊。患者于2岁时因“发热、咳嗽”诊断为肺炎，经治疗后上述症状缓解。但逐渐出现双耳听力下降，以左侧为著，伴有语言障碍，发音不清，电测听检查提示“感音神经性耳聋”，治疗后无好转。    3年前体检时发现甲状腺肿大，伴有轻微怕热、多汗、心悸，大便次数增多，每日2-3次，无多食、消瘦，外院化验血清TT3 473ng/dL(参考值65-240ng/dL)，TT4 27.5g/dL(参考值5

7、.5-13g/dL)，FT3 14.5pmol/L(参考值2.8-8.5pmol/L)，FT4 50.3pmol/L(参考值9.5-26.5pmol/L)，TSH 10.4IU/mL(参考值<10IU/mL)诊断为“甲状腺功能亢进症”，服用他巴唑30mg/d治疗，半年后上述症状仍无缓解，TSH一直高于正常。以后曾在多家医院就诊，反复调整他巴唑的剂量(10-15mg/d)，甲状腺功能检查一直未能恢复正常，为进一步诊治，于2004年6月来我院就诊。家族中无类似病史。    发病以来，生长发育及智力正常。11岁月经初潮，经期不规律。体格检查：体温36.5，呼吸20

8、次/min，脉搏100次/min，血压120/75mmHg(1mmHg=0.133kPa)，身高163cm，体重56kg，发育正常，营养中等，查体合作，发音不清。左耳听力丧失，右耳听力严重下降，无Graves病眼征，甲状腺度肿大，质软，无结节，无压痛，无震颤及血管杂音。其他检查无异常发现。    辅助检查：血、尿、粪常规正常，血糖、肝肾功、血浆蛋白均正常，甲状腺球蛋白抗体TGAb 1.9%(正常<30%)，甲状腺微粒体抗体TMAb 1.0%(正常<20%)，HCG<1mIU/mL(正常值<5mIU/mL)，FSH、LH、E、P均正常。头颅及

9、蝶鞍MRI正常。甲状腺扫描示甲状腺弥漫性肿大。患者来我院后停用他巴唑1月，然后行T3抑制试验7(自实验第1天起每天给予患者LT3口服，并逐渐增加LT3的剂量，由50g/d增至100g/d和200g/d，每一剂量持续3d，在实验前及每一剂量应用3d后，分别测定甲状腺功能、血清胆固醇、甘油三酯、铁蛋白、肌酸磷酸激酶、泌乳素、24h尿氮、心率和基础代谢率(BMR)(表1)。其父母甲状腺功能测定正常。表1  T3抑制试验的结果（略）    之后试用三碘甲状腺乙酸(TRIAC)治疗半年后，月经逐渐恢复正常，甲功结果检测：FT4：54.9pmol/L；FT3：25.

10、3pmol/L；hTSH：5.26IU/mL，第6个月FT4：54.9pmol/L；FT3：15.9pmol/L；hTSH：6.59IU/mL。    患者2，女性，18岁，因“多汗心悸2年”就诊，两年前无明显诱因出现发热，体温波动于38-39，自觉心悸，在包头医学院第三附属医院住院，经治疗后，发热消失，但心悸无明显缓解同时伴有多汗。后转至该院儿科继续治疗，查心肌酶谱正常，ECG示窦性心动过速，甲功提示FT3：8.8pmol/L(参考值：3.2-9.6pmol/L)，FT4：16pmol/L(参考值：8.6-25.8pmol/L)，hTSH：1.93(参考值：0.

11、35-5.5pmol/L)，未给特殊治疗。两月后，再次复查甲功，FT3、FT4均升高，hTSH正常(FT3：16pmol/L，FT4：>200pmol/L，hTSH：2.1)，诊断为“甲亢”服用他巴唑30mg/d治疗，半年后自行减至25mg/d，后逐步减量，四个月后减为5mg，并加用甲状腺素片20mg/d，甲状腺素片服用两月后停用，以后一直服用他巴唑5mg/d治疗，一年后改服“富马酸比索络尔”5mg/d至今。期间症状时好时坏，曾在多家医院就诊，甲状腺功能检查一直未能恢复正常，为进一步诊治，于2005年6月来我院就诊。家族中无类似疾病史。    自发病以来，生

12、长发育及智力正常。11岁月经初潮，经期不规律。体格检查：体温36.5，呼吸20次/min，脉搏92次/min，血压120/80mmHg，身高164cm，体重57.5kg，发育正常，营养中等，查体合作，发音不清。无Graves病眼征，甲状腺度肿大，质软，无结节，无压痛，无震颤及血管杂音。其他检查无异常发现。    辅助检查：血、尿、粪常规正常，血糖、肝肾功、血浆蛋白均正常。甲功结果检测：FT3：11.28pmol/L；FT4：22.01pmol/L；hTSH：8.43IU/mL，甲状腺B超：甲状腺轻度肿大，实质回声均匀；甲状腺ECT示：甲状腺显影清晰，位置正常，形态增大，甲状腺影像放射性分布均匀，对称。垂体MRI检查正常。其父母甲状腺功能测定正常。1.2  方法抽取2例患者及其父母、5名健康对照的静脉血各5mL，以复方枸橼酸钠(ACD)抗凝，盐析法提取外周血白细胞基因组DNA，用TE缓冲液溶解，以紫外分光光度仪测定各DNA样品的纯度和浓度。PCR以各DNA样品为模板，用Primer 5.0软件对THR基因的10个外显子分别设计引物，由上海生工公司合成(表2)，并用双蒸水溶解，各引物浓度为10pmol/L，PCR反应体系如下