足细胞损伤标志Desmin蛋白在甲状腺功能减退症模型大鼠肾脏中的表达及与甲状腺功能的关系

1、足细胞损伤标志Desmin蛋白在甲状腺功能减退症模型大鼠肾脏中的表达及与甲状腺功能的关系         11-01-11 11:20:00     编辑：studa20                  作者：王瑞英 常湛 李娟 王倩 张松筠【摘要】  目的观察甲状腺功能减退症(甲减)大鼠肾脏损伤

2、时足细胞损伤标志Desmin蛋白在肾组织中的表达，探讨甲减肾脏损伤的发生机制以及与甲状腺功能的关系。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)连续灌胃制作甲减大鼠模型。分别动态观察对照组、甲减组和干预组给予左甲状腺素钠(L-T4)和停止给予PTU进行干预治疗大鼠的肾脏病理改变及损伤情况，并同时应用免疫组化技术检测Desmin在肾组织中的表达情况。结果甲减大鼠出现肾脏损伤，并且随着病程进展逐渐加重，并与甲状腺功能密切相关。干预组肾组织损伤均较甲减组减轻。结论甲减时肾脏损伤与足细胞相关，甲状腺激素参与足细胞损伤。 【关键词】  甲状腺功能减退症;肾脏损伤;Desmin;足细胞【Abstract】Obj

3、ectiveTo study the expression of the Desmin albumen in hypothyroidism rats, reveal the pathology of occurrence and development of the renal injury in hypothyroidism and explore the relationship in the renal injury and the thyroid function.MethodsModel of hypothyroidism rats was made by giving them p

4、ropylthiouracil (PTU). The pathology condition of the control group and hypothyroidism group was examined by dynamic viewing. The immunohistochemistry was used todetermine the expression of Desmin albumen in the renal of the control, hypothyroidism and intervention groups (giving the levothyroxine s

5、odium and stopping PTU).ResultsThe renal injury appeared in hypothyroidism rats. With the development of the disease, the renal injury was aggravated progressively, which was related with the thyroid function. The renal injury had reduced after intervention.ConclusionsThe renal injury is related wit

6、h the podocytein hypothyroidism rats and thyroid hormone participates in regulating the injury of podocyte.【Key words】Hypothyroidism; Renal injury; Desmin albumen; Levothyroxine Sodium甲状腺功能减退症(简称甲减)时体内甲状腺激素缺乏，可从多方面造成肾脏的损害，导致了肾脏结构和功能的改变，并随着甲减程度的加重而加重，最终导致肾脏纤维化、肾衰竭13。足细胞损伤标志Desmin蛋白作为肌源性细胞的标志，正常情况下肾小球

7、系膜细胞可偶见少量表达，而足细胞无明显表达。当足细胞因各种原因发生损伤时，可大量表达Desmin而发生表型转化。损伤的足细胞一方面可因为结构异常而导致肾功能改变，加重肾损害进程;另一方面其自身也可表型转化为纤维样细胞，直接或通过产生某些促细胞外基质(ECM)生成因子，促使ECM积聚，从而最终导致肾组织硬化和纤维化。本实验通过口服丙基硫氧嘧啶(PTU)制作甲减大鼠模型，通过免疫组织化学方法检测大鼠肾脏Desmin蛋白的表达，同时监测血脂、肾功能及大鼠肾组织在电镜下病理情况，进一步了解甲减性肾脏损伤的特点及产生机制;同时部分给予单纯停止PTU，部分给予停止PTU加服甲状腺激素-左甲状腺素钠(L-T

8、4)干预治疗，探讨甲状腺功能恢复快慢及恢复程度对甲减性肾脏损伤的影响，以及对肾脏损伤恢复的影响。1材料与方法1.1动物分组及模型建立健康SD雄性大鼠84只，体重180200 g，动物合格证编号是DK0503-0062，由河北医科大学动物中心提供。所有动物购回后适应性喂养1 w，无不良反应，饮食、水正常者，即纳入实验。将84只SD大鼠随机分为A、B两组，室温2025，光照与黑暗每日12 h更替，普通饲料和三蒸水喂养。A组(正常对照组，30只)：给予同甲减组大鼠等剂量的三蒸水灌胃，每日1次。随机分为5组，每组6只，分别于3、6、8、10、12 w经心脏取血，宰杀，取肾脏。B组(甲减组，54只)：给

9、予PTU连续灌胃制备甲减动物模型，将PTU溶于三蒸水中，按大鼠每天每100 g体重给予20 mg PTU，计算相应的剂量(每周称量体重1次，根据体重改变药物量)。分别于3、6、8 w各取6只经心脏取血，宰杀，取肾脏。于8 w时起将剩余36只动物随机分为三组，B1组12只：继续给予原量PTU灌胃;B2组12只：停止给予PTU改为等量三蒸水灌胃;B3组12只：给予L-T4，将L-T4溶于三蒸水中，每只大鼠每天每100 g体重给予6g L-T4灌胃治疗，以上三组同期分别于10、12 w取血，宰杀，取肾脏。1.2试剂兔抗大鼠Desmin蛋白多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒，DAB显色剂及山羊血清均购于武

10、汉博士德生物科技有限公司;血清促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)试剂盒由中国原子能研究所提供;血脂、肾功能试剂购自河北博海生物工程开发有限公司;PTU购自上海复星朝辉药厂，规格：50 mg×100片/盒;L-T4(商品名为优甲乐)，德国默克公司产品。1.3方法所有标本均在MoticMed 6.0数码医学图像分析系统内在放大400倍数下，Desmin结果进行半定量分析，每份标本测10个肾小球，用积分光密度(IOD)表示阳性物质的相对含量。1.4统计学处理所有处理数据均采用x±s表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用q检验。变量之

11、间采用直线相关分析方法。2结果2.1血清TSH、FT3、FT4水平与A组相比，B组大鼠从灌胃大约3 w起开始出现饮食水减少，活动减少，对外界环境刺激反应淡漠。部分甲减大鼠出现后颈部毛发脱落，稀疏。血清FT3，FT4降低及TSH升高。B2组及B3组大鼠较B1组大鼠有所增加，活动及对外界刺激均好于B1组大鼠。见表1、表2。2.2透射电镜A组大鼠肾小球足细胞结构完整，足突排列整齐清晰。甲减组大鼠肾小球基底膜不规则旋绕卷曲;足细胞足突局灶性融合;毛细血管内皮窗孔径增大;足细胞线粒体嵴部分或大部分融合或消失，部分膜融合、消失;粗面内质网有脱颗粒现象，并且这些病变随着甲减病情的加重而加重。B2组和B3组与B1组相比病变明显减轻。见图1。2.3肾组织Desmin表达变化正常大鼠肾小球内偶见散在Desmin表达;而甲减大鼠肾小球内Desmin表达显著增多，随着甲减病程的进展，Desmin表达呈递增趋势，B组比同期A组相比，在3 w时表达率增加(P<0.05)，在6、8、10、12 w时表达明显增加(P<0.01)。