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文档简介
1、霉菌、酵母菌检验(一)实验原理霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后,所得1g或1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数(粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数)。(二)实验器材1.培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯(去皮切块) 300 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1000 mL制法:将马铃薯去皮切块,加1000mL蒸馏水,煮沸10 min20 min。用纱布过滤,补加蒸馏水至 1000 mL。加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装后,121 灭菌 20 min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。2.器皿:已灭菌的平皿(9套
2、/组),1mL吸管(6支/组),试管(15×150)(6/组),三角锥瓶500mL、三角锥瓶500mL(内装蒸馏水250mL),10mL吸管。3.其他:牛皮纸或报纸,酒精灯,棉花,高压蒸汽菌锅,电烘箱,线绳,毛刷等。(三)操作步骤1.检验程序2.操作要点1)采样 选取有代表性的样品并避免采样时的污染。2)样品处理(1)以无菌操作称取检样25mL,放入含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中,振摇30 min,即为1:10稀释液。(2)用灭菌吸量管吸取1:10稀释液10mL,注入试管中,另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸量管反复吹吸50次,使霉菌孢子充分散开。(3)取1mL 1:10稀释液注入含有
3、9mL灭菌水的试管中,另换一支1mL灭菌吸量管吹吸5次,此液为1:100稀释液。(4)按上述操作顺序做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1mL灭菌吸量管。3)接种培养 根据对样品污染情况的估计,选择3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿,然后将凉至45 左右的培养基注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于2528温箱中,3d后开始观察,共培养观察5d。4)计算方法 通常选择菌落数在10150之间的平皿进行计数,一个稀释度使用两个平板,采用两个平板的平均数;选择稀释度也选择平均菌落数在10150之间的稀释度,菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。(四)实验报告平皿菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板的平均菌落总数。(1)将各稀释平板上的菌落数填入下表霉菌测定报告:表1 霉菌检测结果稀释度平板号123平均123平均123平均菌落个数根据试验结果,报告检测结果:每1mL(g)食品中的霉菌数是_。酵母菌测定报告:表2 酵母菌检测结
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