血液生理(家兔)

1、.实验三实验三 血液生理血液生理.血沉的测定血沉的测定红细胞比容测定红细胞比容测定血红蛋白含量的测定血红蛋白含量的测定血细胞计数血细胞计数基本内容基本内容.一一. .血沉的测定血沉的测定目的：目的：学习测定红细胞沉降率的方法，了解测定其学习测定红细胞沉降率的方法，了解测定其数值的意义。数值的意义。 .原原 理理 红细胞沉降率（血沉）是指血沉管内的抗凝红细胞沉降率（血沉）是指血沉管内的抗凝血被静置一段时间（血被静置一段时间（1h1h）后，红细胞因重力）后，红细胞因重力而下沉的毫米数。它是以血浆层的高度来计而下沉的毫米数。它是以血浆层的高度来计算的，血浆层越高，则血沉越快。家畜有的算的，血浆层越高

2、，则血沉越快。家畜有的疾病可以引起红细胞血沉的显著加速，故测疾病可以引起红细胞血沉的显著加速，故测定红细胞血沉具有临床诊断价值。定红细胞血沉具有临床诊断价值。.方法与步骤1.1.采血：采血：5%5%的柠檬酸钠作为抗凝剂，抗凝剂与的柠檬酸钠作为抗凝剂，抗凝剂与血液之间的容积比例为血液之间的容积比例为1 1：4 4。 2.2.吸血：吸血：吸血前要混匀抗凝血，加入血沉管吸血前要混匀抗凝血，加入血沉管（清洁）的血不能带有气泡，血沉管垂直放（清洁）的血不能带有气泡，血沉管垂直放置于血沉管架上。置于血沉管架上。3.3.检查：检查：分钟、小时和小时检查血沉分钟、小时和小时检查血沉管上部血浆的高度。管上部血浆

3、的高度。.讨论：影响血沉的因素是什么？什么情况下血沉将升高？.二.红细胞比容的测定实验目的：实验目的：学习测定红细胞比容的方法学习测定红细胞比容的方法.u将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管( (温氏分血温氏分血管管) )中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。此中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。此时管中的血液分为三层：上层为淡黄色的透明液时管中的血液分为三层：上层为淡黄色的透明液体即血浆；中层为很薄的一层呈灰白色的白细胞体即血浆；中层为很薄的一层呈灰白色的白细胞和血小板；下层为挤压很紧的暗红色的红细胞。和血小板；下层为挤压很紧的暗红色的红细胞。u红细胞下沉，彼此压紧

4、而又不改变每个血细胞红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，测出红细的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，测出红细胞占全血的容积百分比即红细胞比容。胞占全血的容积百分比即红细胞比容。实验原理：实验原理：.方法与步骤方法与步骤1.1.抗凝剂处理温氏分血管：抗凝剂处理温氏分血管：草酸盐抗凝剂的配制：草酸钾草酸盐抗凝剂的配制：草酸钾0.80.8克，草克，草酸铵酸铵1.21.2克，再加蒸馏水至克，再加蒸馏水至100100毫升。每毫升。每1 1毫升血液可用毫升血液可用0.10.1毫升上述溶液。毫升上述溶液。吸取混合草酸盐抗凝剂溶液，置于温氏分吸取混合草酸盐抗凝剂溶液，置于温

5、氏分血管内，并使该抗凝剂均匀分布于小试管血管内，并使该抗凝剂均匀分布于小试管内壁上，内壁上，60608080烘箱内烘干备用。烘箱内烘干备用。 .2. 2. 采血：采血：将血液缓缓注射于有抗凝剂的试管中，用将血液缓缓注射于有抗凝剂的试管中，用拇指堵住管口，倒转试管两、三次，使拇指堵住管口，倒转试管两、三次，使血液与抗凝剂混合。血液与抗凝剂混合。.3.3.离心：离心：用长颈滴管吸取试管内的抗凝血，将用长颈滴管吸取试管内的抗凝血，将滴管插入温氏分管的底部，沿管壁将抗凝血滴管插入温氏分管的底部，沿管壁将抗凝血准确加到分血管刻度准确加到分血管刻度1010厘米处。注意不要有厘米处。注意不要有气泡。将温氏分

6、血管配平后放入离心机中，气泡。将温氏分血管配平后放入离心机中，30003000转转/ /分钟离心分钟离心3030分钟。分钟。4.4.读数：读数：取出分血管，直接读数。取出分血管，直接读数。.讨论：影响比容测定的因素是什么？在那些影响比容测定的因素是什么？在那些情况下红细胞的比容明显增加？情况下红细胞的比容明显增加？.三.血红蛋白含量的测定目的：了解和掌握比色法测定家兔血目的：了解和掌握比色法测定家兔血 红蛋白的含量红蛋白的含量.原理：u在一定量的血液中加入少许盐酸，酸不在一定量的血液中加入少许盐酸，酸不仅破坏红细胞膜，且将红细胞内的亚铁血仅破坏红细胞膜，且将红细胞内的亚铁血红素转变成高铁血红素

7、，后者呈较稳定的红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色。棕色。u将其用蒸馏水稀释后与血红蛋白计的标将其用蒸馏水稀释后与血红蛋白计的标准比色板进行目测比色，即得每准比色板进行目测比色，即得每100ml100ml血液血液所含的血红蛋白的克数。所含的血红蛋白的克数。.方法与步骤：方法与步骤：1.1.加盐酸：加盐酸：滴加滴加0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液至测定管刻度盐酸溶液至测定管刻度“2”2”或或“10%”10%”处。处。 2.2.采血与滴加血液：采血与滴加血液：用吸血管吸血至刻度用吸血管吸血至刻度2020立方毫立方毫米处；不能有气泡，反复吹洗几次。玻棒将血液米处；不能有气泡，反复吹洗几

8、次。玻棒将血液和盐酸混匀，放置分钟。和盐酸混匀，放置分钟。3.3.滴加蒸馏水：滴加蒸馏水：逐滴滴加，然后摇匀，观察颜色，逐滴滴加，然后摇匀，观察颜色，直至比色箱中液体颜色与标准比色板的颜色相同。直至比色箱中液体颜色与标准比色板的颜色相同。4.4.读数：读数：读取测定管上液面的读数即为读取测定管上液面的读数即为100ml100ml血液血液中血红蛋白的克数。中血红蛋白的克数。.注意事项：注意事项：血液与盐酸作用时间：血液与盐酸作用时间：10min10min蒸馏水逐滴滴加蒸馏水逐滴滴加做三次，取平均值做三次，取平均值及时清洗吸血管：吸取蒸馏水冲洗几次，及时清洗吸血管：吸取蒸馏水冲洗几次，吸取酒精冲洗

9、几次。吸取酒精冲洗几次。.讨论：讨论：影响血红蛋白含量的主要因素是什么？影响血红蛋白含量的主要因素是什么？.四.血红蛋白含量的测定目的：目的：了解红细胞、白细胞计数的原理，学了解红细胞、白细胞计数的原理，学习人工计数红白细胞的方法。习人工计数红白细胞的方法。.实验原理：实验原理：一定量的血液稀释后，置于血细胞计数室内，一定量的血液稀释后，置于血细胞计数室内，计算一定体积的血细胞数，然后在换算成计算一定体积的血细胞数，然后在换算成每立方毫米或血液中的血细胞数。每立方毫米或血液中的血细胞数。.血球记数板构造：血球记数板构造：两个计数室，每室分为两个计数室，每室分为9 9个大格。格与盖玻片的个大格。

10、格与盖玻片的距离为距离为0.1mm0.1mm，每大格边长为，每大格边长为1mm1mm，面积为，面积为1mm1mm2 2，体积为体积为0.1mm0.1mm3 3。四角的。四角的4 4个大方格分为个大方格分为1616个中方个中方格，用作白细胞计数。格，用作白细胞计数。中央大方格被分为中央大方格被分为2525个中方格，每个中方格边长个中方格，每个中方格边长为为0.2mm0.2mm，面积为，面积为0.04 mm0.04 mm2 2，体积为，体积为0.004mm0.004mm3 3。每。每个中方格又分为个中方格又分为1616个小方格，中央大方格四角的个小方格，中央大方格四角的中方格和中央的中方格用作红细

11、胞计数。中方格和中央的中方格用作红细胞计数。.方法与步骤方法与步骤血细胞计数板的准备：血细胞计数板的准备：计数室只能用自计数室只能用自来水和蒸馏水冲洗，然后以丝巾轻轻擦干，来水和蒸馏水冲洗，然后以丝巾轻轻擦干，切不可用酒精和乙醚洗涤。洗涤完毕后，切不可用酒精和乙醚洗涤。洗涤完毕后，放入低倍显微镜下观察其构造。放入低倍显微镜下观察其构造。.采血及稀释：采血及稀释：（1 1）配制稀释液：用移液管吸取）配制稀释液：用移液管吸取1.99ml1.99ml红细胞稀释液（生红细胞稀释液（生理盐水）放入理盐水）放入1 1号试管，用移液管吸取号试管，用移液管吸取0.38ml0.38ml白细胞稀释白细胞稀释液（液

12、（2%2%醋酸加少量龙胆紫）放入醋酸加少量龙胆紫）放入2 2号试管。号试管。（2 2）采血：用吸血管吸取血液）采血：用吸血管吸取血液1010ll放入放入1 1试管，用吸血管试管，用吸血管吸取血液吸取血液2020l l放入放入2 2号试管，摇匀试管，使血液与稀释号试管，摇匀试管，使血液与稀释液充分混匀。液充分混匀。计数：盖玻片放好后，滴半滴于计数室与盖玻片交界处，计数：盖玻片放好后，滴半滴于计数室与盖玻片交界处，稀释血液可自动均匀渗入计数室。放置稀释血液可自动均匀渗入计数室。放置1-21-2分钟，待细胞分钟，待细胞下沉后进行计数。下沉后进行计数。.记数原则记数原则计数红细胞：将计数室中央的大方格

13、置于视野计数红细胞：将计数室中央的大方格置于视野内，转用内，转用1010倍物镜下计数倍物镜下计数5 5个中方格（四角和中个中方格（四角和中央）内的红细胞总数。央）内的红细胞总数。计数时必须遵循一定方向逐格进行，如将上侧计数时必须遵循一定方向逐格进行，如将上侧和左侧线上的红细胞数入，则勿将下侧和右侧和左侧线上的红细胞数入，则勿将下侧和右侧线上的数入。线上的数入。计数白细胞：计数白细胞：1010倍物镜下计数四角四个大方格倍物镜下计数四角四个大方格中所有的白细胞总数。中所有的白细胞总数。 .红细胞数换算红细胞数换算红细胞数红细胞数/ L/ L =N=N200200101010106 625255 5

14、-1-1=N=N10101010其中：其中：N N：5 5个中方格数的红细胞总数个中方格数的红细胞总数25255 5-1-1：5 5个中方格换算为个中方格换算为1 1个大方格内红细胞数个大方格内红细胞数1010：1 1个大方格换算为个大方格换算为1 1微升血液的红细胞数微升血液的红细胞数10106 6： 1 1微升换算为微升换算为1 1升升200200：血液稀释倍数：血液稀释倍数.白细胞数换算白细胞数换算白细胞数白细胞数/ L/ L =N=N4 4-1-12020101010106 6=N=N5 510107 7其中：其中：N N：4 4个大方格数的白细胞总数个大方格数的白细胞总数N N4 4

15、-1-1：1 1个大方格数的白细胞总数个大方格数的白细胞总数1010：1 1个大方格换算为个大方格换算为1 1微升血液内的白细胞数微升血液内的白细胞数10106 6： 1 1微升换算为微升换算为1 1升升2020：血液稀释倍数：血液稀释倍数.注意事项注意事项1 1 计数室内细胞分布要均匀。计数红细胞时如果计数室内细胞分布要均匀。计数红细胞时如果发现各中方格的红细胞数目相差发现各中方格的红细胞数目相差2020个以上，或计个以上，或计数白细胞时发现白细胞数目相差数白细胞时发现白细胞数目相差1010个以上，表示个以上，表示血细胞分布不均匀，必须将稀释液摇匀后重新计血细胞分布不均匀，必须将稀释液摇匀后重新计数。数。2 2 混悬液滴入计数室时，液量要适当。过多会溢混悬液滴入计数室时，液量要适当。过多会溢出并流入两侧深槽内，使盖玻片浮起。