食品中对位红的检测——高效液相色谱法初步方案

1、如有帮助，欢迎下载支持附件 1: 食品中对位红的检测一一高效液相色谱法（初步方案）（北京出入境检验检疫局食品安全检测中心提供）1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要或配料成分的食品和以番茄原料为基质的食品中违禁着色剂对位红的检测。2 定义对位红又称对硝基苯胺红， 是一种工业用偶氮染料， 不溶于水易溶于有机溶剂， 不允许在食 品中使用。3 方法要点对位红染料经乙腈超声提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。以波长可变的紫外一可见检测器定性和定量。4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为超纯水。试剂与标准品名称规格级别乙腈4L/瓶HPLC 级二氯甲烷4L/瓶

2、HPLC 级冰醋酸500ml/瓶分析纯对位红5 标准溶液5. 1标准贮备液称取20 Omg对位红（按产品标明的纯度折算成纯着成剂），用乙腈溶解并定容至100ml容量瓶。5.2 标准工作液分别取上述标准贮备液 50 卩 l 、100 卩乙腈定容，此时溶液中对位红的浓度分别为l 、 200卩l、500 卩 l 和0 1,0 2,0 4,1 01000 卩和l 溶液移入2 0 卩 g/ml100ml 。容量瓶中以6 仪器与设备前处理仪器与设备万分之一天平电子天平打浆机超声波震荡提取仪25ml 具塞比色管250ml 烧杯100ml 容量瓶0. 45 m 滤膜分析仪器与设备配有紫外一可见检测器及自动进样

3、器的反向HPLCCLOVERSIL C18 色谱柱4. 6x250mm5卩m5ml一次性注射器漩涡振荡器7 样品处理方法7. 1 甜椒或红辣椒粉称取 10g（准确至 0 01g ）样品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7. 2 粉状调味品称取 5g（准确至 001g）样品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7.3 调味辣椒酱、原味辣椒酱、辣椒油等称取 5g（准确至 001g）样品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7. 4 以番茄原料为基质的番茄酱和番茄沙司称取 10g （准确至 0 01g ）样品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容

4、至25ml 并摇匀。7. 5 提取将称量好的样品在超声波提取仪中充分超声提取60 分钟，并不时摇匀。如有帮助，欢迎下载支持7.6上样用 5ml 一次性注射器抽取一定体积的提取液，将提取液过0 45拧紧瓶盖，在漩涡振荡器上振荡30 秒，使溶液充分混匀，待测。卩 m有机系滤膜至进样瓶中,8 色谱分析8. 1 高效液相色谱测定8. 1.1流动相流动相 A : 10% 乙酸溶液流动相 B: 乙腈8. 1.2 梯度洗脱程序时间（ Min）流动相 A%流动相 B%梯度曲线02080线性52080线性70100线性250100线性262080线性8.1.3流速： 1 0ml/min8. 1.4进样量： 20

5、 卩 l8. 1. 5 检测波长紫外一可见检测器或二极管阵列检测器，485nm检测。8. 1.6 色谱柱CLOVERSIL C18 色谱柱 46 X 250mm5 m8. 1. 7 柱温：室温注：待基线稳定后开始进样，两次进样间隙时间为10 分钟9 结果计算9. 1 标准曲线用 5 点标准工作溶液的测定值绘制标准曲线，标准溶液浓度在0 12 0 卩 g/ml 范围内呈良好线性。（R 0 995）9.2 样品结果计算对位红含量按以下公式计算：R=CXV XD/M单位：mg/kgC样品中待测组分的浓度，单位：卩g/mlM 检测样品取样量（g）V 样品溶液体积（ml）D样品溶液的稀释倍数10 注意事项10. 1 对位红与苏丹