激光扫描共聚焦显微..GHX

1、 杲海霞河北医科大学药理教研室Hippocampus neurons expressing GFP荧光显微镜LSCM激光扫描共聚焦显微镜荧光显微镜激光扫描共聚焦显微镜中常见的激光器Leica DM IRBE 倒置荧光显微镜LSCM物镜的重要参数 NA 4x 20 x 10 x 40 x 60 x 100 x 分析软件控制软件+图1. 共聚焦显微镜简化原理图 用于激发荧光的激光束用于激发荧光的激光束(Laser)透过入射小孔透过入射小孔(light source pinhole)被二向色镜被二向色镜(Dichroic mirror)反射，通过显微物镜反射，通过显微物镜(Objective len

2、s)汇聚后入射于待观察的标本汇聚后入射于待观察的标本(specimen)内部焦点内部焦点(focal point)处。激光照射所产生的荧光处。激光照射所产生的荧光(fluorescence light)和少和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔(Detection pinhole)到达光电探测到达光电探测器器(Detector)（通常是光电倍增管（通常是光电倍增管（PMT）或是雪崩光电二极管（）或是雪崩

3、光电二极管（APD），变成），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。不会被探测到。共轭ZXYXY平面Optical sections collected simultaneously at three different excitation wavelengths (488, 568, and 647 nanometers). The specimen is the fruit fly third instar wing imaginal disk. XYXY平面X

4、YXY平面timeTime-lapse imaging of a living fruit fly embryo injected with calcium green is presented in Figure 2. The series of images shows the change in distribution of the fluorescent probe over time. 0 s10 s20 s30 sPeripheral nervous system of a fruit fly embryo ZXYXY平面Xenopus oocytesCalcium green用细胞内液稀释Calcium green导入微注射器以20nL/oocyte注射卵母细胞18C避光放置40分钟共聚焦显微镜观察HEK293 cells expressing PLC-PH-GFPPLC-PH-GFP + H1 receptor LipofactAMINE2000 混合20分钟混合物孵育细胞 4-6小时洗掉转染液，加入正常培