高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量(精)

1、2009 年第 3 期9 月出版摘要运用磷酸、甲醇溶液作为流动相，采用高效液相色谱法测定了葡萄酒中柠檬酸含量，实验结果表明，该方法有很好的线性关系，相关系数为 0.9998，最低检出浓度为 0.03mg/L，加标回收率在 93.8 106.2，相对标准偏差 RSD<3%，该方法简便快捷、准确度高、重现性好。关键词柠檬酸；高效液相色谱；葡萄酒Abstract A reversed-phase high performance liquid chromatographic method wasintroduced for determining the content of citric a

2、cids in wine with phosphate andmethanol solution as mobile phase.The result shows that this method takes on good linearrelation ，its correlative connection is 0.9998， the lowest detection concentration is0.03mg/L， the average recoveries ranged from 93.8%to 106.2%with the relativestandard deviation i

3、s less than 3%.This method is simpleness, speediness and highveracity and good fidelity. keywordscitric acid ； high performance liquid chro-matography ；wine柠檬酸作为一种食品添加剂广泛应用于食品加工领域，但其使用范围是受到严格限制的，在葡萄酒标准中有限量要求，即干、半干、半甜葡萄酒中要求柠檬酸含量 1.0g/L，甜葡萄酒中要求柠檬酸含量 2.0g/L。柠檬酸的测定方法有电位滴定法、离子色谱法、阻抑动力学荧光法和高效毛细管电泳法等。本文采用高

4、效液相色谱反相 C 18 柱，磷酸二氢钾溶液作流动相，测定葡萄酒中的柠檬酸，并对测试条件进行了研究，建立了一种简便、准确的分析方法。1 材料与方法1.1 仪器LC-10ATvp 高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-10Avp 紫外检测器（日本岛津）； KQ5200DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；PHS-3C 型数字酸度计（雷磁仪器厂）；AP-9925 型真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）； AB104-S 型分析天平梅特勒 -托利多仪器（上海）有限公司。1.2 试剂无水柠檬酸、磷酸、氢氧化钠、甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾、实验用水为超纯水。除另有规定外，试剂均为分析纯。 1

5、.3 溶液的配制流动相的配制体积浓度1%磷酸溶液的配制：准确量取磷酸10mL ，用超纯水定容至1000mL 。张素娟 *（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西省食品质量监督检验中心，太原 030012）高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量Determination of citric acids content in wine byhigh performance liquid chromatography* 张素娟，女 1975 年出生， 2003年毕业于吉林大学分析化学专业，硕士，工程师。收稿日期： 2009-07-20ZHANG Su-juan *(NationalFarm Pr

6、oducts and Liquor Quality Supervision and Inspection Center, Shanxi Province Foodstuff Quality Supervision andInspection Center，Taiyuan 030012， China 食·品分析 ·食品工程FOOD ENGINEERING482009 年第 3 期 9 月出版样品本底值g/LRSD 1.000g/L 柠檬酸加入量 mL 测得值 g/L 回收率 10.9681.551.374101.5磷酸甲醇溶液的配制：量取甲醇50mL ，用体积浓度 1%磷酸溶

7、液定容至1000mL ，混匀，再经 0.45 m滤膜过滤、超声波脱气后备用。0.02mol/L 磷酸二氢钾溶液（ pH2.9）：准确称量 2.72g 磷酸二氢钾，用超纯水定容至 1000mL ，用磷酸调 pH 值到 2.9，再经 0.45 m滤膜过滤、超声波脱气后备用。标准溶液的配制柠檬酸储备液：称取无水柠檬酸 0.10g ，精确至 0.0001g ，用 0.01mol/L 氧化钠溶液溶解并定容至 100mL ，此溶液含柠檬酸 1.000g/L。1.4 试样的制备吸取 10.00mL 样品（液温 20）于 100mL 容量瓶中，加超纯水定容，经0.45 m微孔滤膜过滤后，备用。1.5 色谱条件

8、色谱分离柱：反相C 18（ 150mm×4.6mm i.d ， 5 m）；流动相：磷酸甲醇溶液；柱温： 25；流速： 1.0mL/min ；检测波长： 214nm ；进样量： 10L。2 结果与讨论2.1 标准曲线的绘制将 0.01mol/L 柠檬酸储备液配制成一系列浓度为0.05mol/L ，0.10mol/L ，0.20mol/L ，0.40mol/L ，0.80g/L 的标准系列溶液。样品测定液和标准溶液经0.45 m水系滤膜过滤，分别进样，估算出样品溶液的浓度范围；根据检测到的样品浓度作适当的稀释，使其浓度在标准曲线的范围内；从标准曲线中求出样品的柠檬酸含量。 2.2 流动相

9、的选择柠檬酸为弱酸，在水系流动相中易解离，需在流动相中加入一些添加剂，以改善其在非极性固定相上的分离选择性、色谱峰的峰形和色谱峰的重复性。故本实验选用磷酸甲醇溶液和0.02mol/L 的磷酸二氢钾溶液（ pH=2.9）作流动相，测定同一标准溶液和样品溶液进行比较，两种流动相具有很好的分离效果，并能避免样品中的杂质干扰。但0.02mol/L 的磷酸二氢钾溶液（ pH=2.9）作为流动相不仅配制时操作繁琐、 pH 稍有变化对数据的影响也很大，而且容易滋生细菌，必须每天现用现配，否则造成赌塞色谱柱，缩短柱子的寿命。而磷酸甲醇溶液作为流动相由于有甲醇的存在可抑制细菌的繁殖，能用一定的时间。因此本实验最

10、终选用磷酸甲醇溶液作为流动相。2.3 标准色谱图在最佳色谱条件下，分析柠檬酸标准溶液的保留时间为8.78min 。见图 1。图 1 柠檬酸标准色谱图2.4 回归方程和线性范围的测定用 6 次测定的平均值计算回归方程得到Y =541498x，柠檬酸含量在0.05g/L1.00g/L 范围内呈线性关系，标准曲线的线性相关系数r 2=0.99979。2.5 方法的精密度与回收率将 5 种柠檬酸含量不同的葡萄酒样品分别取 6 份平行样，按所选色谱条件下进行测定，测得 5 种样品的相对标准偏差（ RSD ）；同时在分析样品时， 5 种样品平行取样，各取 10.0mL 样品于 25mL 容量瓶中，分别加入

11、 1.000g/L 的标准溶液2.0mL 、10mL ，以超纯水定容至刻度。超出线性以外的加标溶液进行适当稀释，再进行测定。测得5 种样品加标的回收率结果见表1。表 1 试样测定的精密度与回收率实验结果（n 6）由表 1 可看出，该法的相对标准偏差（RSD ）<3.0，回收率为 93.8%106.2。 2.6 干扰试验和最低检出限选线性范围中段质量浓度123456789101112t/minA /m A U（下转第 54 页）张素娟，等：高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量492009 年第 3 期9 月出版收购的区域进行实地调查，了解果树农用化学品使用情况，收集农用化学品的种类、使用剂

12、量、作业方法等相关信息，同时对种植区域内农用化学品的销售流通环节进行调查，了解农药化学品销售的种类、数量、来源、流向，核查销售和使用的农用化学品在种类、数量等方面是否吻合，必要时可采集原料样品进行检测验证。采集种植区域的土壤样品进行检测，了解土壤中重金属污染以及农药残留情况。将调查的结果按区域、时间进行分类管理，并以此作为判断原料是否安全的主要依据，对原料种植区域进行分类，确定原料的合格采购区域。 2.3 加强原料的入厂验收作好原料入厂验收工作，逐车查验原料的来源地，坚决杜绝非合格种植区域内的原料进入生产线。对来自合格种植区域的原料检测其包装、运输的卫生条件以及其腐烂情况，对不符合要求的予以绝

13、收。对合格的原料按区域分类存放，并按时间顺序进入生产线进行加工，保证产品的可追溯性。 2.4 积极配合监管企业积极配合中央、地方各级政府及主管部门，切实加强监管力度，认真贯彻落实国家新的食品安全法各项条款，建立起统一的、明确的、行之有效的、与国际接轨的安全质量规则标准体系和产品安全质量预警制度。做到企业在为客户和消费者负责的同时，也要为国家更要为企业自己的信誉负责。各级政府监管部门在处理质量事故时找出问题和差距的同时，寻求解决的办法，帮助企业提早预防和克服不安全隐患。作为企业，要理性看待和接受政府监管部门的检查、批评、指导，一旦发现问题，要自觉地及早的克服，以防影响企业长远发展。2.5 规范农

14、用化学品的生产及销售农用化学品的生产、销售企业也应建立健全农产品的档案管理制度，利用现代科学技术力量大力发展低浓度、低残留的农用化学品，始终保持与国际农用化学品接轨。总之，果汁产品的安全，关系到果汁加工企业的长足发展，关系到众多消费者的身体健康。企业要花大力气，把好每个质量关，真正从源头上消除不安全隐患的发生。要做到这些，要有长远打算，不能急功近利，务必以一流的管理和技术水准作为实施产品安全质量强有力的后盾。参考文献1大陶 . 有机果汁 安全级别最高的饮品 J . 食品与健康，2005（2）： 16-18.2陈敏 . 梨浓缩清汁生产工艺研究J . 食品工程， 2008（2）：40-41.（0.

15、40mg/mL）进行干扰实验，选常见的食品添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、双乙酸钠、丙酸钙等物质在 10 倍浓度范围内，在确定的色谱条件下进行标样的测定。试验结果表明在本实验条件下不产生干扰（测定值相对偏差小于5%，即认为无干扰）。本方法按仪器的 3 倍噪声计算，柠檬酸的最低检出质量浓度为 0.03mg/L。以仪器的 10 倍噪音计算，柠檬酸的最低定量检出浓度为0.10mg/L。3 结论本文采用高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量，该方法有很好的线性关系，相关系数为0.9998，其最低检出浓度为0.03mg/L，回收率为 93.8%106.2，具有简便灵敏、准确、干扰少等优点，可适用于葡萄酒样品中柠檬酸的检测分析。参考文献1陈雪湘 . 电位滴定法测定柠檬酸钠含量J