高效液相色谱法测定维生素C注射剂的含量(精)

1、·28·Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy 中国民族民间医药药 物 研 究The Medicine Study高效液相色谱法测定维生素C 注射剂的含量赵敏胡付华邵阳市第一人民医院药剂科，湖南邵阳422000【摘要】：目的：建立一种灵敏、准确的高效液相色谱（HPLC）测定维生素C 注射剂的方法，并进行分析方法学验证。方法：采用色谱柱为 Xterra RP C18(4.6 ×150mm，5 m)，柱温为 25，以 0.01mol L·-1 （pH 为 3.5）的磷酸二氢钠为流动相，系统流速为0

2、.6mL·min-1，检测波长为265nm。结果：该方法的线性范围为 50120g·mL-1，其标准曲线的相关系数为0.9992，日内 RSD 为0.87%，其日间 RSD 为 1.03%，加样回收率为 100.36%。结论：此法灵敏、准确、高效，重复性好，可用于注射用维生素C 的含量测定。【关键词】：维生素C；高效液相色谱法；含量测定【中图分类号】 R927【文献标识码】 A【文章编号】 1007-8517(2010) 04-028-2Determination of vitamin C for injection by HPLCZHAO Min ，HU Fu-hua (

3、Department of pharmacy，the First People s Hospital ofShaoYang city， Shaoyang 422000，China)ABSTRACT Objective: To develop asensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography Assay (HPLC) forthe quantitative analysis of vitamin C for injection. Method: HPLC for thedetermination of vitamin C

4、 for injection. was performed, using Waters 600 systems on aXterra RP C18 (4.6 × 150mm,5 m) column, with the mobile phase of 0.01mol-.L dibasic sodium phosphate buffer solution (pH=3.5), at the dectective wavelength of 265nm, with the ? ow rate of 0.6mL -1, column·min temperature at 25 . R

5、esult:According to the chromatographic conditions, sampling the reference mixture, the linear range was 50120g·mL- 1 and correlation coef? cient was 0.9992, RSD% of inter-day and within-day precision was 0.87% and 1.03% respectively, Recovery was 100.36%.Conclusion: This method is sensitive， an

6、d accurate for determination of vitamin C for injection.维生素 C 又名抗坏血酸，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺 )生成的作用，其临床用途广泛。维生素C 还具有重要的生化作用，在医药、日用化工、食品、生物等领域有重要的应用价值。维生素 C 是烯醇化合物，在水中极易氧化，见光加速分解。维生素 C 注射液 pH 值为 5.57.0，具有极强的还原性，在碱性

7、溶液中易氧化失效，氧化剂、光、热及金属离子能加速其失效 1 。因此，温度过高或过低均可加快维生素 C 的分解，抗氧化剂、温度 25、 pH 为 5.66.0 时维生素 C 注射液最为稳定 2 。维生素 C 注射剂含量的测定方法很多，各种方法各有其特点，中国药典2005年版二部采用碘量法测含量 3 ，此法虽然操作简单，但因制剂中常有还原性物质存在，对此法干扰明显，且由于碘具有挥发性，碘离子易被空气所氧化而使滴定产生误差。常见的其他滴定法存在滴定终点难以准确判断，分光光度法操作费时，而高效液相色谱法是目前发展较为迅速的一种方法，灵敏度高，选择性好，本试验的目的在于寻找一个准确高效的测定维生素C 含

8、量的方法。2.1色谱条件：色谱柱： Xterra RP C18(150mm 4×.6mm，5 m)，以 0.01mol L·-1（pH 为 3.5）的磷酸二氢钠水溶液为流动相，柱温为25，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为 265nm。色谱图见图 1。2.2标准曲线的制备：准确称取维生素 C 对照品 10.0mg，0.02mol L·-1 焦亚硫酸钠溶液溶解并定容到 25mL 的容量瓶中 2 ， 2方法与结果1.1仪器：美国 Waters 公司的高效液相色谱仪（包括600 泵、 2996 可变波长紫外检测器），奥立龙868 型 pH 酸碱计上海

9、热电仪器有限公司。1.2试剂：维生素 C 对照品：中国药品生物制品检定所，批号：2139C，规格：100mg/瓶；维生素 C 注射液：山东新华制药股份有限公司，批号：0807122，规格： 5mL(1.0g)/ 支； 5%葡萄糖注射液：上海百特医疗用品有限公司，批号：GS0809048，规格： 250mL/袋；焦亚硫酸钠（ Na2S2O5）：分析纯，上海试四赫维化工有限公司，批号： 060512，含量比重 96.0%；其余试剂均为分析纯。 1 仪器与试剂作者简介：赵敏（ 1972），女，现供职于邵阳市第一人民医院药剂科，研究方向为药品质量控制与标准。药物研究The Medicine Study

10、Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药·29·摇匀，得贮备液，并予避光保存。准确量取维生素 C 贮备液 6mL 和纯水 4mL，得对照品 A 液；取 A 液 5mL 和 1mL 纯水，得对照品 B 液；取 B 液 4mL 和 1mL 纯水，得对照品 C 液；取 A 液 2mL 和 2mL 纯水，得对照品 D 液；取 B 液 1mL 和 1mL 纯水，得对照品 E 液，从而得 5 个高中低不同浓度的对照品溶液。取 20L进样测定。按 “2.1项”下色谱条件进样，测定对照品的峰面积，以浓度（ X ）为

11、横坐标，峰面积（ Y ）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，求得维生素 C 的回归方程为：120 g· mL-1）系列浓度的对照品溶液 0.5mL （每个浓度取 3 份），分别准确加入维生素含量为 100g.mL-1 的样品溶液 0.5mL 中，摇匀，按 “2.1项”下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果，维生素C 的加样回收率为100.36%。2.5稳定性试验：将 “2.2项”下 100g·mL-1 维生素 C 溶液 20L，分别以 0、 1、 2、 4、 6、8h 进样，记录色谱图，峰面积 RSD 为 0.68%，结果表明，供试品溶液在 8h 内稳定。 2.6 重复性

12、试验：取批号为 0807122 的样品，按含量测定方法配制 6 份供试品溶液，按 “2.1项”下色谱条件进样，记录峰面积，其 RSD 为 0.33%。2.7 样品测定：按 “ 2.1项”下色谱条件，进样 3 个不同批次的样品含量，结果以标示量计， 3 批样品批示量含量分别为： 100.67%、 98.37%、101.01%，均在 95%110%之间。3 讨论图 1 维生素 C 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram of vitamin C维生素 C：Y=8.95×103X+7.36×105(r=0.9992，n=5)； 结果，维生素 C 在 5012

13、0 g· mL浓度范围内呈良好的线性关系。2.3 精密度试验：按 “ 2.1项”下色谱条件，取 “ 2.2项”下对照品溶液，低（维生素 C 浓度为 60 g· mL-1）、中（维生素 C 浓度为 80 g· mL-1）、高（维生素 C 浓度为 100g·mL-1）系列浓度分别重复进样 3 次，于第 1d、3d、5d 分别考察其日内及日间精密度，测定峰面积。结果维生素 C 的日内 RSD%为 0.87%，其日间RSD%为 1.03%。2.4 回收率试验：分别取低（维生素 C 浓度为 80 g· mL-1）、中（维生素 C 浓度为 100g

14、3;mL-1）、高（维生素 C 浓度为-1根据维生素 C 的理化性质和特点，本实验考察了不同流动相的组成及不同浓度，不同 PH 值及温度等对分离效果的影响。结果确定柱温为 25，以 0.01mol ·L-1（pH 为 3.5）磷酸二氢钠为为流动相，流速为 0.6mL·min-1。但因维生素 C 极易氧化，故笔者选取 0.02mol ·L-1 的焦亚硫酸钠水溶液稀释配备维生素 C 对照品溶液维持其稳定性。另外，维生素 C 对光不稳定，在储存中应注意避光。该方法具有灵敏，准确，高效的特点，适合维生素 C 注射液的检测。参考文献1 陈新谦，金有豫，汤光 .新编药物学 M

15、. 人民卫生出版社， 2003.(15)：630.2 郝志耘 .维生素 C 稳定性实验研究 J. 牡丹江医学学报， 1997， 18（1）： 13-43 国家药典委员会编 .中国药典 S. 北京：化学工业出版社， 2005JKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJK（上接第 27 页）强体液免疫的作用；白术对免疫系统有较好的免疫增强、免疫调节以及抑菌和强壮作用。玉屏风散把三味中药有机的结合起来，有明显增强实验动物的抗疲劳作用，增强实验动物的耐低温、耐高温和耐缺氧的作用。因此，在积

16、极对证治疗、缓解常见症状的同时，玉屏风散能够增强感冒患者调节机体状态，促进机体抗病免疫机能，抵抗外邪，预防和延缓复感时间，在临床应用方面具有较重要的使用价值，应当引起足够的重视。另外，在运用药物调节感冒患者免疫机能的同时，还要积极培养易感人群的良好生活习惯，正确的疾病观，从而提高抗病能力。由于临床上能够达到观察目的并能够配合的门诊病例有限，影响因素较多，因此，玉屏风散的作用机理仍需进一步研究。参考文献1 陈文，何鸽飞，姜曼花，邱细敏 .近 10 年白术的研究进展 J. 时珍国医国药，2007， (02).2 孙燕妮 .白术的药理实验及临床研究进展 J. 中国中医药科技， 1999，(04).3 李燕玉，徐丽梅，刘又宁 .黄芪的药理作用