山东栽培黄芩的指纹图谱研究

1、山东栽培黄芩的指纹图谱研究         【摘要】 目的采用高效液相色谱（HPLC）对山东栽培黄芩药材进行指纹图谱的研究，为黄芩药材质量控制提供实验依据。方法采用kromasil C18，5m，150 mm×4.6 mm色谱柱，以乙腈0.3%磷酸为流动相进行梯度洗脱，流速1 ml/min，柱温30，检测波长280 nm。结果以10个共有        【摘要】  目的采用高效液相色谱（HPLC）对山东栽培黄芩药材进

2、行指纹图谱的研究，为黄芩药材质量控制提供实验依据。方法采用kromasil C18，5m，150 mm×4.6 mm色谱柱，以乙腈0.3%磷酸为流动相进行梯度洗脱，流速1 ml/min，柱温30，检测波长280 nm。结果以10个共有峰为评价指标，精密度和重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，符合有关规定要求。结论该方法操作简单，精密度、稳定性和重复性良好，可作为栽培黄芩药材的质量控制的新方法。 【关键词】  黄芩 指纹图谱 高效液相色谱法色谱指纹图谱分析技术是当前进行复杂物质体系质量控制及研究的重要手段。以中药色谱指纹图谱为代表的一类狭义的化学指

3、纹图谱，着眼于生物代谢产物化学特征的分析与质控模式研究，所形成的理论和技术涉及多个前沿研究领域与交叉学科，有力促进了中药质量控制模式的发展，同时也符合中药现代化发展的必然趋势和要求。因此色谱指纹图谱分析技术目前已逐步成为中药质量评价的关键技术1。     黄芩为唇形科植物黄芩Sutellatia baicalensis Georgi.的干燥根。黄芩最早收载于神农本草经，为传统常用中药，具有清热燥湿解毒，止血安胎的功效。随着中药野生资源的逐渐减少和自然环境保护的需要，以人工栽培品入药已成为主流，人工种植具有产量大、价格低、环境条件稳定可控等优点，近些年国家也在逐步推

4、行GAP规范化种植基地的建设。黄芩作为山东道地药材目前种植面积非常大，全省种植在6 667 ha以上，且在全国普遍被认为是优质产品，以青岛和文登所产的最著名，有“条芩”“文芩”之称2。本文利用HPLC法建立山东栽培黄芩的指纹图谱，利用软件生成对照指纹图谱，为更有效控制栽培黄芩质量，从而为建立符合规模化生产的黄芩基地提供更科学的数据。1  仪器与试药1.1   仪器与试剂Waters-600高效液相色谱仪，Waters960二极管阵列检测器，Empower工作站;甲醇，乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。 1.2   对照品与样品黄芩苷对照

5、品（批号 110715200514）、黄芩素对照品（批号 111595200604 ）均由中国药品生物制品检定所提供；黄芩药材采集了山东10个不同产地的药材（均由山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定，并按中国药典2005年版部“黄芩”项下标准检验，均为合格正品药材），粉碎过20目筛3，备用。2  方法2.1  流动相的选择 流动相采用梯度洗脱，对流动相组成进行考察，采用乙腈0.3磷酸按不同梯度进行洗脱。色谱柱kromasil C18，5 m，150 mm×4.6 mm，检测波长280 nm，流速1 ml/min。结果选定以0 min比例1387，25min比例为20

6、80，45 min比例为3070，55 min比例为4060，65 min回到原始比例的梯度洗脱，分离效果最好。2.2  检测波长的选择 中国药典明确黄芩苷在280 nm处有最大吸收，因此选择250，260，270，280，290，300，310，320 nm波长进行考察。最后结果显示在280nm波长下各特征峰吸收度差别较小，整个图谱中各峰之间的比例较协调，直观效果较好，提供信息量较大。2.3  流速和柱温的考察 取同一批样品，按上述测定方法，对流速0.8 ml/min，1.0 ml/min，1.2 ml/min分别进行考察。结果表明，不同流速，除了保留时间有所改变外，峰形

7、及分离情况均不受影响，按常规，选择流速1.0 ml/min。柱温选择30，35，40进行考察。结果表明，30柱温时色谱峰分离最好。2.4   样品提取溶剂的选择取同一批样品，精密称取0.1 g 3份，分别加醋酸乙酯甲醇（31），氯仿甲醇（11），70%乙醇各20 ml，加热回流2 h，放冷，滤过，滤液蒸干，用色谱甲醇转移并定容至10 ml容量瓶，过0.45 m的滤膜，即得供试品溶液。测得指纹图谱。结果显示，用醋酸乙酯甲醇（31）作溶剂时图谱信息量最大且各峰比例协调。2.5  参照峰的选择用上述色谱条件，分别注入液相色谱仪黄芩苷和黄芩素对照品溶液10 l，进行测定。结果黄芩素在整个色谱图的最后位置出峰，而黄芩苷出峰时间