异位宁对实验性大鼠子宫内膜异位症表皮生长因子受体的影响(一)

1、异位宁对实验性大鼠子宫内膜异位症表皮生长因子受体的影响(一)【摘要】目的：探讨异位宁对实验性大鼠子宫内膜异位症表皮生长因 子受体表达水平的影响。方法：以免疫组化法定性检测各组子宫内膜 异位大鼠的表皮生长因子受体(EGFR的表达水平。结果：模型对照组 EGFR勺阳性表达率偏高，与正常对照组比拟有显著差异，异位宁高剂 量组中EGFR的阳性表达率明显偏低，与模型对照组相比有显著差异 (P0.01)。结论：异位宁可以抑制异位内膜血管的形成，从而抑制异位 子宫内膜增生,为研究子宫内膜异位症的发病机制开拓了新途径。【关键词】子宫内膜异位症异位宁表皮生长因子受体大鼠子宫内膜异位症(endometriosis

2、,EM)是指具有生长功能的子宫内膜组织 出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位。由于现代诊疗技术的不 断提高，EM的诊断率不断上升。而在内异症中，异位内膜病灶的生长 需要新的血管供给，EGF是血管生长因子家族中的一员，可以刺激血管 内皮细胞生长和体内新生血管形成。而 EGF受体 (epidermalgrowthfactorreceptor, EGFF是表皮生长因子(EGF及转化生长 因子的共同受体1 5。本研究采用免疫组化法定性检测各组子宫内 膜异位大鼠的表皮生长因子受体(EGFR的表达水平，探讨异位宁对EGFF表达的影响。1材料与方法1.1材料实验动物选用 Wistar雌性未孕大鼠，体重(2

3、00+20)g,鼠龄812 周，购自黑龙江中医药大学实验动物中心，微生物控制等级为壹级。1.1.2 实验药物异位宁 :由赤芍、柴胡、蓬莪术、延胡索、蜈蚣、黄芩、 金银花、薏苡仁、秦艽、牡蛎等中药组成，购自黑龙江中医药大学附 属医院，上药共计200g,加水700mL,浸泡30min,头煎武火40min, 取汁200mL,二煎文火30min，取汁200min,二煎共得药液400mL,文 火浓缩至100mL，加95%乙醇200mL，置冰箱静止24h离心(1600转/ min)，取上清液250mL,置水浴锅提取乙醇，取药液40min，相当于每 毫升含生药5g，置于4C冰箱内备用。达那唑：100mg/粒

4、，上海华联 制药生产，生产批号：20040902。EGFF免疫组化染色试剂盒 免疫组化常用辅助试剂：武汉博士德生物工程。1.2 方法造模方法雌性未孕 Wistar大鼠，体重(200 士 20)g皮下注射乙烯雌 酚0.2mg/只促情，以20%乌拉坦1.5g/kg注射麻醉，待麻醉生效后， 将大鼠固定操作台上,腹部剪毛,碘伏消毒,在无菌条件下开腹,约 1.5cm 长,右侧离卵巢 0.5cm 处别离子宫,结扎后在中间剪取约 2cm 一段子宫,剖开子宫剥离子宫内膜,将内膜剪成 3 块,分别缝于子宫 分叉处、左侧卵巢附近、左侧腹膜壁层,关腹缝合。每鼠注射庆大霉 素0.1mL,连用3d,正常清洁饲养。分组观

5、察正常饲养 1 个月后,随机抽取 10只造模大鼠 2次开腹。 可见移植宫内膜体积增大,局部增大物内含液体物质,局部增大物表 面被结缔组织包裹, 大网、肠管、腹壁广泛粘连。 此后开始灌胃给药。正常对照组：每日灌服等容量蒸馏水。模型组：模型动物术后1月开始，每日灌胃等容量的生理盐水。异位宁高剂量组：模型动物术后1月开始，每日以5.4g/100g异位宁药液灌胃。异位宁低剂量组：模型动 物术后1月开始，每日以1.8g/100g异位宁药液给大鼠灌胃。西药对照 组：模型动物术后1月开始，每日以3.6mg/100g达那唑混悬液给大鼠 灌胃。均给药4周后断头处死，剖取大鼠在位及异位子宫内膜组织， 分为3局部分

6、别放入10%畐尔马林中供做免疫组化的石蜡切片。实验方法EGFR用免疫组织化学方法检测：1石蜡切片厚度5 am, 裱于Poly L lysine处理过的载玻片上，置45c温箱拷片24h。切 片常规加水。33%H2O2室温10min，灭活内源性酶，蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5min。4热修复抗原：将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液，微波 炉加热，温度保持在95C,持续10min。取出容器，室温冷却20min, PBS洗涤。5滴加复合消化液，室温510min, PBS洗涤2min/次， 共3次。6滴加正常山羊血清封闭，室温孵育 10min。7倾去血清， 滴加适当比例稀释的一抗，置于湿盒内37C温箱孵育60min ,PBS洗涤， 5min/次，共3次。8滴加生物素二抗，37C温箱孵育20min, PBS 洗涤，5min/次，共3次。9滴加链霉亲和素过氧化物酶，置于湿盒内37 C温箱孵育20min, PBS洗