生化检验 第五章 酶

1、第第 五五 章章 诊断酶学诊断酶学 第一节第一节 概述概述 第二节第二节 酶测定技术酶测定技术 第三节第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用常用酶及同工酶测定的临床应用 教学目的教学目的 掌握掌握临床诊断中常用的血清酶及其同工酶临床诊断中常用的血清酶及其同工酶 掌握掌握酶、工具酶、同工酶等定义；酶、工具酶、同工酶等定义； 酶活性测定方法及注意事项。酶活性测定方法及注意事项。熟悉熟悉血清酶基本知识血清酶基本知识 掌握掌握急性心肌梗塞、肝胆疾病的酶的种类、急性心肌梗塞、肝胆疾病的酶的种类、酶学诊断标准、及其评价酶学诊断标准、及其评价了解了解 酶的概念、特征等。酶的概念、特征等。一、酶的概念与特征一、

2、酶的概念与特征（一）酶的组成、结构和功能（一）酶的组成、结构和功能1.1.酶的本质和特性酶的本质和特性 酶是由活细胞产生的，具有催化功能的生物大分子物质，其酶是由活细胞产生的，具有催化功能的生物大分子物质，其化学本质绝大部分为化学本质绝大部分为蛋白质蛋白质，少数为，少数为核酸（核酶、脱氧核酶）核酸（核酶、脱氧核酶） 酶的催化特性：酶的催化特性：极高的催化效率极高的催化效率; ;高度的特异性高度的特异性; ;催化作用催化作用的可调节性。的可调节性。 酶促反应：酶催化的反应；酶促反应：酶催化的反应； 酶活性酶活性(activity)(activity)： 酶催化反应的能力；酶催化反应的能力； 底物

3、底物(substrate(substrate，S)S)：酶所作用的物质；：酶所作用的物质； 产物产物(product(product，P)P)： 酶促反应的生成物；酶促反应的生成物； 酶的激活剂酶的激活剂(activator(activator）：加速酶促反应的物质；）：加速酶促反应的物质； 酶的抑制剂酶的抑制剂(inhibitor (inhibitor ）：减慢或终止酶促反应的物质）：减慢或终止酶促反应的物质本质：绝大部分是本质：绝大部分是蛋白质蛋白质，少部分酶，少部分酶蛋白复合物与核酶蛋白复合物与核酶. . 决定反应的性决定反应的性质和反应类型质和反应类型决定反应的特异性及其催化机制决定反

4、应的特异性及其催化机制蛋白质部分：酶蛋白蛋白质部分：酶蛋白 ( (apoenzyme) 辅助因子辅助因子 (cofactor) 金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物结合酶（全酶结合酶（全酶) )(holoenzyme) 2. 酶的结构与功能酶的结构与功能(simple enzyme) 辅助因子分类辅助因子分类（按其与酶蛋白结合的紧密程度与作用特点）（按其与酶蛋白结合的紧密程度与作用特点） 辅酶辅酶 (coenzyme):与酶蛋白结合与酶蛋白结合疏松，可用疏松，可用透析或超滤的透析或超滤的方法除去。方法除去。 （小分子有机化合物小分子有机化合物） 辅基辅基 (prosthetic g

5、roup):与酶蛋白结合与酶蛋白结合紧密，不能用紧密，不能用透析或超透析或超滤的方法除去滤的方法除去。（。（金属离子金属离子） 概念：酶的活性中心是指酶分子结构中，能与底概念：酶的活性中心是指酶分子结构中，能与底物结合，并使底物转化为产物的具有特定空间结物结合，并使底物转化为产物的具有特定空间结构的区域。构的区域。 酶活性中心酶活性中心是酶分子中具有三维结构的区域，或是酶分子中具有三维结构的区域，或为裂缝，或为凹陷，深入到酶分子内部，常为氨为裂缝，或为凹陷，深入到酶分子内部，常为氨基酸残基的疏水基团组成的。基酸残基的疏水基团组成的。（二）（二） 酶的催化作用机制酶的催化作用机制1.酶的活性中心

6、酶的活性中心:能能 量量 改改 变变活活 化化 过过 程程过渡态过渡态酶促反应总结：1、为何具有高度催化效率降低反应活化能2、如何降低活化能形成中间产物3、如何形成中间产物诱导契合作用1. 习惯命名法习惯命名法推荐名称，推荐名称，由发现者命名，常以底物由发现者命名，常以底物 名、反应性质以及酶的来源命名；名、反应性质以及酶的来源命名； 2. 系统命名法系统命名法系统名称，系统名称，（1961年国际酶学委员会年国际酶学委员会确确 定）每一个酶由下列三种表示：定）每一个酶由下列三种表示： 1）、系统名称：底物名）、系统名称：底物名+反应性质反应性质 2）、分类编号：）、分类编号：E.C.+四个数字

7、四个数字 3）、推荐名：选一个习惯名（实用、简单）、推荐名：选一个习惯名（实用、简单）（三）（三） 酶的命名酶的命名1、氧化还原酶（、氧化还原酶（1）AH2BABH22、转移酶、转移酶 （2）ABCABC3、水解酶、水解酶 （3）ABH2OAOHBH4、裂合酶（、裂合酶（4）ABAB 5、异构酶、异构酶 （5）AB 6、连接酶或合成酶（、连接酶或合成酶（6）ABATPABADPPi 或或 ABATPABAMPPPi六大类编号依次为六大类编号依次为 1. 2. 3. 4. 5. 6亚类编号依次为亚类编号依次为 1. 2. 3. 4. 5. 6.亚亚类编号依次为亚亚类编号依次为 1. 2. 3.

8、4. 5. 6.酶的分类酶的分类（四）（四） 酶的分类与编号酶的分类与编号 同工酶同工酶 是同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链是同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化功能，但其分子组成、单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化功能，但其分子组成、空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类酶。同的一类酶。 二、同工酶的概念与特征二、同工酶的概念与特征 心肌梗死和肝病病人心肌梗死和肝病病人 血清血清LDHLDH同工酶谱的变化同工酶谱的变化酶酶活活性性心肌梗死酶谱心肌梗死酶谱

9、正常酶谱正常酶谱肝病酶谱肝病酶谱* *生理及临床意义生理及临床意义在代谢调节上起着在代谢调节上起着重要的作用；重要的作用；用于解释发育过程用于解释发育过程中阶段特有的代谢中阶段特有的代谢特征；特征；同工酶谱的改变有同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断；助于对疾病的诊断；同工酶可以作为遗同工酶可以作为遗传标志，用于遗传传标志，用于遗传分析研究。分析研究。 肌酸激酶肌酸激酶 乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶碱性磷酸酶 酸性磷酸酶酸性磷酸酶 -谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶 -淀粉酶淀粉酶 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转

10、移酶果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶-N-乙酰乙酰(基基)-D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶概念：概念：在酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或在酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶。酶活性的酶称为工具酶。三、工具酶三、工具酶 缩写符号缩写符号名称名称缩写符缩写符号号名称名称HDLHDL乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶HKHK已糖激酶已糖激酶MDHMDH苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶CKCK肌酸激酶肌酸激酶G-6-PDG-6-PD6-6-磷酸葡萄糖脱氢磷酸葡萄糖脱氢酶酶PKPK丙酮酸激酶丙酮酸激酶GLDHGLDH谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GKGK甘油激酶甘油激酶GODGOD葡萄糖氧化酶葡萄糖氧

11、化酶LPLLPL脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶CODCOD胆固醇氧化酶胆固醇氧化酶CECE胆固醇酯酶胆固醇酯酶GPDGPD磷酸甘油氧化酶磷酸甘油氧化酶PODPOD过氧化物酶过氧化物酶 常用工具酶的名称及其缩写符号常用工具酶的名称及其缩写符号（一）工具酶参与的指示反应（一）工具酶参与的指示反应（共通反应途径）（共通反应途径）葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法： 准确度和精密度都能达到临床要求，操作简便，适准确度和精密度都能达到临床要求，操作简便，适用于常规检验。此反应称用于常规检验。此反应称TrinderTrinder反应，本法为国内推荐反应，本法为国内推荐方法。方法。葡萄糖葡萄糖+2H2O+O2葡糖酸内

12、酯葡糖酸内酯+2H2O24-AA+ 酚酚 + H2O2红色醌类化合物红色醌类化合物+ H2OPODGOD常见的脱氢酶指示反应Lactate + NAD Pyr + NADHLDHL-glutamate + NAD 2-oxoglutarate + NADHGLDHD-glucose 6-phosphate + NADP D-glucono-1,5-lactone 6-phosphate + NADPHG6PD 由于酶作用的特异性，成分复杂的血清等体液由于酶作用的特异性，成分复杂的血清等体液样品往往不需要进行预处理，通过温和的酶促反样品往往不需要进行预处理，通过温和的酶促反应条件，简单的实验程序

13、，即可对各种代谢物浓应条件，简单的实验程序，即可对各种代谢物浓度进行定量分析。度进行定量分析。终点法终点法动力学法动力学法Km值大表值大表示亲和程度小，酶的催化活性低示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表值小表示亲和程度大示亲和程度大,酶的催化活性高酶的催化活性高一、酶活性测定一、酶活性测定( (一一) )定时法定时法（fixed time assay） （两点法）（两点法） 测定酶与底物作用反测定酶与底物作用反应一定时间后底物或应一定时间后底物或产物变化的总量，计产物变化的总量，计算酶促反应平均速度算酶促反应平均速度。优点：比较简单，优点：比较简单，所用仪器无需恒所用仪器无需恒温装置，显

14、色剂温装置，显色剂的选择也可不考的选择也可不考虑对酶活性的影虑对酶活性的影响。响。缺点：无法知道缺点：无法知道是否处于线性期。是否处于线性期。 (二二)连续监测法连续监测法continuous monitoring assay连续监测法的时间连续监测法的时间进程曲线进程曲线连续监测法的种类连续监测法的种类 直接法直接法 是指待测酶酶促反应的底物或产物有特征性的理化是指待测酶酶促反应的底物或产物有特征性的理化性质，然后通过特殊的仪器直接检测。性质，然后通过特殊的仪器直接检测。 间接法间接法 是指酶促反应底物和产物之间没有特征性的理化性是指酶促反应底物和产物之间没有特征性的理化性质，需通过另一个化

15、学反应或生化反应，将底物或产物质，需通过另一个化学反应或生化反应，将底物或产物转化为有明显特征理化性质的另一个化合物。转化为有明显特征理化性质的另一个化合物。 L-乳酸乳酸 +NAD+ 丙酮酸丙酮酸+ NADH+H+LD 在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使NAD+还还原为原为NADH，NADH 在在340nm 处有吸收峰，因此反应会处有吸收峰，因此反应会引起引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中活性呈正比关系。中活性呈正比关系。直接法测定乳酸脱氢酶的活性直接法测定乳酸脱氢酶的活性 丁酰硫代胆

16、碱 + H20 硫代胆碱 + 丁酸硫代胆碱 + 5,5-巯代-2-硝基苯甲酸 5-巯基-2-硝基苯甲酸(405nm)ChE Ex Ex 为待测酶为待测酶，A A为底物，为底物，B B为中间产物。为中间产物。 A A、B B二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二个酶二个酶EiEi( (为指示酶为指示酶) )，其底物为，其底物为B B，反应产物，反应产物为为C C可直接测定。可直接测定。 酶偶联反应酶偶联反应 最简单的模式为：最简单的模式为：CBAEiEx 辅助反应辅助反应 如果一些酶促反应找不到合适的指如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时还

17、可在始发反应和指示示酶与其直接偶联，此时还可在始发反应和指示反应之间加入另一种酶，将二者连在一起，此反反应之间加入另一种酶，将二者连在一起，此反应称为辅助反应。模式为：应称为辅助反应。模式为： 其中，其中，B B、C C均为中间产物，均为中间产物，EaEa、EiEi都为都为工工具酶具酶。最后一个酶称。最后一个酶称指示酶指示酶EiEi，其他外加，其他外加的酶都为辅助酶（的酶都为辅助酶（EaEa）。）。DCBAEiEaEx酶偶联反应原理酶偶联反应原理对酶偶联反应的要求对酶偶联反应的要求 方法条件的选择方法条件的选择 尽可能采用连续监测法；减尽可能采用连续监测法；减少步骤少步骤, ,化学试剂有一定纯

18、度化学试剂有一定纯度, ,双蒸水双蒸水, ,使用双试剂。使用双试剂。 测定参数的设置测定参数的设置 方法类型、波长、样品量与方法类型、波长、样品量与试剂量、稀释水量、试剂吸光度上下限、空白速率、试剂量、稀释水量、试剂吸光度上下限、空白速率、反应孵育时间、延迟反应孵育时间、延迟, ,监测时间、底物耗尽限额、监测时间、底物耗尽限额、线性范围及计算因子线性范围及计算因子F F值。值。 标本的采集、运输与保存标本的采集、运输与保存 影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。 干扰因素的控制干扰因素的控制 反应干扰；污染；底物自行反应干扰；污染；底物自行发生反应。发生反应。(四四)

19、血清酶活性浓度测定条件的选择血清酶活性浓度测定条件的选择 标本的采集、运输与保存标本的采集、运输与保存溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以应及时进行分离，应及时进行分离，静脉采血后应在静脉采血后应在1 12h2h内分离血清内分离血清。抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、EDTAEDTA抗凝的血浆抗凝的血浆一般不用作酶活性测定；肝素对一般不用作酶活性测定；肝素对ALTALT、ASTAST、CKCK、LDLD、ACPACP检测均无影响，可用于急诊；临床多用检测均无影响，可用于急诊；临床多用血清血清为首为首选测定标本。选测定

20、标本。温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离当天测定，否则应放冰箱冷藏；当天测定，否则应放冰箱冷藏；通常在通常在0 04 4 C C下使下使用、处理及保存用、处理及保存，除了一些冷变性的酶；液氮可作为，除了一些冷变性的酶；液氮可作为酶学测定时血清标本及质控长期保存的方法。酶学测定时血清标本及质控长期保存的方法。 惯用单位惯用单位 惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，难以进行比较。难以进行比较。国际单位（国际单位（I

21、UIU） 在特定的条件下，每分钟转化在特定的条件下，每分钟转化1 1 molmol底物的酶量为一个国际单位。底物的酶量为一个国际单位。 以以IUIU表示，表示，1IU=11IU=1 mol/minmol/min。 KatalKatal单位单位 在规定条件下，每秒钟转化在规定条件下，每秒钟转化1mol1mol底物的酶底物的酶量为量为1kat1kat， 1kat=1mol/s1kat=1mol/s。常用单位为。常用单位为 katalkatal或或 nkatalnkatal。 KatKat与与IUIU的换算关系为：的换算关系为： 1IU=11IU=1 mol/min=16.67nmol/s= 16.

22、67nkatalmol/min=16.67nmol/s= 16.67nkatal（六）酶活性浓度的单位（六）酶活性浓度的单位 1.1.酶活性单位酶活性单位2.2.酶活性浓度单位酶活性浓度单位 临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶活性单位数表示。活性单位数表示。U/LU/L 酶活性浓度单位的计算酶活性浓度单位的计算 连续监测法根据摩尔吸光系数进行酶活性浓度的计连续监测法根据摩尔吸光系数进行酶活性浓度的计算。算。公式如下：公式如下：LvVALU610min/LvVALU610min/FALUmin/LvVF610(七)、系数K值的计算及应用系数系

23、数K K值的种类值的种类LvVF610LvVF610二、酶的质量测定二、酶的质量测定 利用酶蛋白分子具有抗原性的特点，可以利用酶蛋白分子具有抗原性的特点，可以通过抗原抗体反应的原理直接测定酶的质通过抗原抗体反应的原理直接测定酶的质量，报告方式用质量浓度单位。量，报告方式用质量浓度单位。 如用免疫学方法测定如用免疫学方法测定CK-MBCK-MB质量质量，结果用，结果用ngng/ml /ml 或或 ugug/L/L报告。报告。方法方法同工酶同工酶( (或亚型或亚型) )的性质的性质差异差异同工酶、亚型同工酶、亚型电泳法电泳法电荷不同电荷不同所有同工酶、亚型所有同工酶、亚型层析法层析法( (离子交换

24、层析、亲和离子交换层析、亲和层析层析) )电荷不同电荷不同CKCK，LDLD，ALPALP免疫分析法免疫分析法免疫抑制法免疫抑制法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CKCK、LDLD、ACPACP免疫化学测定免疫化学测定法法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CKCK、LDLD、ACPACP、ALPALP、AMYAMY动力学分析法动力学分析法 底物特异性分析法底物特异性分析法底物底物KmKm、亲和力不同、亲和力不同ACP ACP 、CKCK、LDLD（ - -羟丁酸）羟丁酸）抑制剂分析法抑制剂分析法对小分子量的抑制剂的对小分子量的抑制剂的特异性抑制不同特异性抑制不同LDLD（草酸）、

25、（草酸）、ACPACP（L-L-酒酒石酸）、石酸）、ALPALP（L-L-苯丙氨苯丙氨酸）酸） pHpH分析法分析法最适最适pHpH不同不同ASTAST热失活分析法热失活分析法热稳定性不同热稳定性不同ALPALP蛋白酶水解法蛋白酶水解法对蛋白水解酶敏感度不对蛋白水解酶敏感度不同同LDLD、ASTAST三、同工酶检测三、同工酶检测 （一）（一） 电电 泳泳 法法 （二）层析法（二）层析法 （三）免疫分析法（三）免疫分析法 （四）同工酶的其他分析方法（四）同工酶的其他分析方法 “血清酶血清酶”是指存在于血清中的酶，是指存在于血清中的酶， 而非血清特定产生的。而非血清特定产生的。一、血清酶一、血清酶

26、（一）血清酶的来源和去路（一）血清酶的来源和去路 名称名称 血浆特异酶血浆特异酶 非血浆特异酶非血浆特异酶 外分泌酶外分泌酶细胞酶细胞酶一般代谢酶一般代谢酶组织专一酶组织专一酶来源来源肝肝消化腺或其它消化腺或其它外分泌腺外分泌腺 各组织器官各组织器官 （无器官专（无器官专一性）一性） 肝肝 （有器官（有器官专一性）专一性） 种类种类凝血酶原、凝血酶原、因因子、子、因子、纤因子、纤溶酶原、溶酶原、ChEChE、CERCER、LCATLCAT、脂蛋、脂蛋白脂肪酶等白脂肪酶等 胰淀粉酶、胰胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋脂肪酶、胰蛋白酶、白酶、ACPACP、ALPALP等等LDHLDH、ASTAST、ALT

27、ALT、CKCK等等 OCTOCT等等 1.1.血清酶的来源血清酶的来源 2.2.血清酶的去路血清酶的去路 (1(1）血清酶的半寿期）血清酶的半寿期 酶失活至原来活性一半时所需时间称为酶失活至原来活性一半时所需时间称为酶的半寿期酶的半寿期。一般。一般以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。 血清酶甚至同工酶之间半寿期差别很大。这些有助于了解同血清酶甚至同工酶之间半寿期差别很大。这些有助于了解同一疾病不同酶升高持续时间的差异，半寿期长的酶，在血清中一疾病不同酶升高持续时间的差异，半寿期长的酶，在血清中持续时间长。持续时间长。1 1性别性别: :多数血清酶的男女性别差异

28、不大，但少数酶如多数血清酶的男女性别差异不大，但少数酶如CK、 ALP及及-GT等有性别差异，男性高于女性。等有性别差异，男性高于女性。 2 2年龄年龄: :血清中有些酶的活性常随年龄而变化。最明显的一个血清中有些酶的活性常随年龄而变化。最明显的一个 例子是例子是ALP 3 3进食进食: :血清中大多数酶不受进食的影响，故测定酶活性不一血清中大多数酶不受进食的影响，故测定酶活性不一 定需要空腹采血。高脂、高糖饮食后血清定需要空腹采血。高脂、高糖饮食后血清ALP活性升高。活性升高。 4 4运动运动: :激烈的肌肉运动可使血清中多种酶，如激烈的肌肉运动可使血清中多种酶，如CK等活性升高。等活性升高

29、。 5 5妊娠妊娠: :妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、 LD等，引起血清中这些酶升高等，引起血清中这些酶升高。 6 6其他其他: :血清中有些酶与同工酶有种族差异血清中有些酶与同工酶有种族差异. ( (二二) )、血清酶的生理差异、血清酶的生理差异 血清酶的失活和排泄血清酶的失活和排泄 研究表明酶主要是在血管内失活或分解的，酶的清研究表明酶主要是在血管内失活或分解的，酶的清除与血浆蛋白的清除途径并不完全相同。血清酶经除与血浆蛋白的清除途径并不完全相同。血清酶经蛋白蛋白酶酶水解而产生的低分子多肽或氨基酸可经水解而产生的低分子多肽或

30、氨基酸可经小肠粘膜小肠粘膜排至排至肠腔肠腔，再彻底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基，再彻底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基酸可被组织利用，不能利用的氨基酸可经尿排出体外。酸可被组织利用，不能利用的氨基酸可经尿排出体外。 ( (三三) )、血清酶变化的病理机制、血清酶变化的病理机制 正常情况下血清酶活性相对恒定。但在一些正常情况下血清酶活性相对恒定。但在一些病理情况下，如病理情况下，如细胞膜通透性增加或细胞坏死；细胞膜通透性增加或细胞坏死；细胞内酶合成增加；酶排泄障碍；恶性肿瘤异位细胞内酶合成增加；酶排泄障碍；恶性肿瘤异位分泌；酶合成障碍；中毒及遗传缺陷等，常导致分泌；酶合成障碍；中毒及

31、遗传缺陷等，常导致血清中酶活性的改变。血清中酶活性的改变。 (1)(1)酶合成异常酶合成异常 1 1合成减少合成减少 肝损害时肝损害时合成酶的能力受损合成酶的能力受损，血清中相应酶减少，慢性，血清中相应酶减少，慢性肝病时更为显著。肝病时更为显著。 如肝病时因如肝病时因ChEChE、LCATLCAT合成的减少而使血合成的减少而使血清中酶活性浓度降低；清中酶活性浓度降低； 酶基因变异酶基因变异，也可引起酶合成减少，如肝豆状核变性，也可引起酶合成减少，如肝豆状核变性 (Wilson(Wilson病病) ) 患者，血中铜氧化酶可明显下降。患者，血中铜氧化酶可明显下降。 2. 合成增多合成增多 细胞对血

32、清酶的合成增加或酶的诱导作用是血清酶细胞对血清酶的合成增加或酶的诱导作用是血清酶活性升高的重要原因。活性升高的重要原因。 增生性疾病如增生性疾病如骨骼疾病骨骼疾病时，可因成骨细胞增生，合成时，可因成骨细胞增生，合成分泌更多的分泌更多的ALPALP而使血清中此酶升高。一部分恶性肿瘤患而使血清中此酶升高。一部分恶性肿瘤患者血中酶升高有可能与肿瘤细胞中酶的合成增加有关，者血中酶升高有可能与肿瘤细胞中酶的合成增加有关，如如前列腺癌细胞前列腺癌细胞可产生大量可产生大量ACPACP。(2)(2)酶释放增加酶释放增加 酶从病变酶从病变( (或损伤或损伤) )细胞中释放增加是疾病时大多数血清酶增细胞中释放增加

33、是疾病时大多数血清酶增高的主要机制高的主要机制。研究表明，炎症、缺血缺氧、能源供应缺乏、。研究表明，炎症、缺血缺氧、能源供应缺乏、坏死和创伤等是细胞释放大分子酶蛋白的重要原因。细胞酶的释坏死和创伤等是细胞释放大分子酶蛋白的重要原因。细胞酶的释放量还受下述一些因素影响：放量还受下述一些因素影响： 1 1细胞内外酶浓度的差异细胞内外酶浓度的差异 2 2酶的相对分子量酶的相对分子量 3 3酶的组织分布酶的组织分布 4 4酶在细胞内的定位和存在形式酶在细胞内的定位和存在形式(3)(3)酶排出异常酶排出异常 约有约有2424的血清的血清AMYAMY由由肾脏肾脏排出，肾功能减退时，血清排出，肾功能减退时，

34、血清AMYAMY活性升高，可能因酶排泄障碍而在血液中滞留所致。活性升高，可能因酶排泄障碍而在血液中滞留所致。 胆道胆道梗阻时，血清梗阻时，血清ALPALP升高的原因是梗阻区升高的原因是梗阻区ALPALP合成加强，合成加强，ALPALP排泄受阻而逆流人血。排泄受阻而逆流人血。（三）血清酶的临床应用（三）血清酶的临床应用五、同工酶的诊断价值五、同工酶的诊断价值 ( (一一) )转氨酶及其同工酶转氨酶及其同工酶 生化特性生化特性 丙氨酸氨基转移酶（谷丙）：丙氨酸氨基转移酶（谷丙）：ALT(GPT) ALT(GPT) （天）门冬氨酸氨基转移酶（谷草）：（天）门冬氨酸氨基转移酶（谷草）：AST(GOT)

35、AST(GOT) 组织分布组织分布ASTAST: :主要分布于主要分布于心心、肝、肝、 骨胳肌、肾。骨胳肌、肾。同工酶：同工酶：ASTsASTs；ASTmASTm正常血清主要为正常血清主要为ASTsASTs，当细胞受到轻度损伤时，当细胞受到轻度损伤时ASTsASTs 显著升高。显著升高。若血清中出现大量的若血清中出现大量的ASTmASTm，则表示细胞严重受损。，则表示细胞严重受损。ALTALT：主要分布于：主要分布于肝肝、肾、心、骨胳肌。、肾、心、骨胳肌。有两种同工酶：有两种同工酶：ALTsALTs、ALTmALTm，反映肝损伤灵敏指标反映肝损伤灵敏指标. .转氨酶的测定方法转氨酶的测定方法

36、目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。定。丙酮酮L谷氨氨L酮戊二酸ALT 丙氨酸LNADLHNADHLLD乳酸丙酮酸草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸门冬氨酸 LLLAST NADLHNADHLMD苹果酸草酰乙酸ALTALT速率法测定中酶偶联反应式为：速率法测定中酶偶联反应式为：ASTAST速率法测定中酶偶联反应式速率法测定中酶偶联反应式为：为： 转氨酶测定的临床意义转氨酶测定的临床意义急性肝损害急性肝损害: :ALTALT的升高常与病情轻重相平行，为判断急性肝的升高常与病情轻重相平行，为判断急性肝炎恢复的指标。是肝坏死的前兆。炎恢复的指标。是肝坏死的前兆。心

37、脏、骨骼肌等组织受损、肝胆疾病时心脏、骨骼肌等组织受损、肝胆疾病时血清血清ALTALT水平也可出现不同程度的升高。水平也可出现不同程度的升高。心肌、肝脏损伤血清心肌、肝脏损伤血清ASTAST会升高。肾脏或胰腺细胞损伤，血会升高。肾脏或胰腺细胞损伤，血清清ASTAST也会升高。也会升高。在在AMIAMI患者胸前区疼痛发作后患者胸前区疼痛发作后6 68h8h，血清，血清ASTAST可明显升可明显升高，发病后高，发病后484860h60h达峰值，达峰值，4 45 5天可降至正常。天可降至正常。转氨酶转氨酶轻度增加轻度增加(1(13ULN) 3ULN) ：胰腺炎、酒精性脂肪肝、肝硬化、肉芽：胰腺炎、酒

38、精性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤等。肿、肿瘤等。中度增加中度增加(3(310ULN)10ULN)的疾病：传染性淋巴增多症、慢性活动性的疾病：传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死等。肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死等。重度增加重度增加(20ULN)(20ULN)的疾病：病毒性肝炎、中毒性肝炎。的疾病：病毒性肝炎、中毒性肝炎。 ( (二）肌酸激酶及其同工酶二）肌酸激酶及其同工酶 生化特性生化特性由两种不同亚基（由两种不同亚基（M M和和B B亚基）组成的二聚体。亚基）组成的二聚体。同工酶分：同工酶分：CK-BBCK-BB（CKCK1 1）、）、CK-MBCK-MB（CKCK2 2）

39、、）、CK-CK-MMMM（CKCK3 3）和）和CKCKMt(CKMt(CK4 4) )。组织分布组织分布 广泛分布于全身，广泛分布于全身，骨骼肌骨骼肌含量最高，其次含量最高，其次是心肌和脑组织。是心肌和脑组织。p CK-BBCK-BB在脑和脊髓内含量最高称为脑型同工在脑和脊髓内含量最高称为脑型同工酶。酶。 p 主要存在于心肌细胞内称为主要存在于心肌细胞内称为心型心型同工同工酶。酶。 分为分为CK-MB1CK-MB2CK-MB1CK-MB2亚型。亚型。p 骨骼肌中几乎全部为骨骼肌中几乎全部为CK-MMCK-MM，称为肌型同工，称为肌型同工酶。分为酶。分为CK-MM1CK-MM2CK-MM3C

40、K-MM1CK-MM2CK-MM3亚型。亚型。CKCK的测定方法的测定方法 酶偶联法酶偶联法 HNADPHPDGNADPADPHKATPATPCKADP磷酸葡萄糖内酯葡萄糖磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖肌酸磷酸肌酸6666CKCK及其同工酶测定的临床意义及其同工酶测定的临床意义主要用于主要用于早期诊断早期诊断AMIAMI（1 1） 血清血清CKCK总活力总活力 AMIAMI后后2 24h4h开始升高，开始升高，101024h24h达峰值，达峰值，3 34 4天恢复正常。天恢复正常。（2 2）CKCK同工酶及亚型同工酶及亚型 AMIAMI胸痛发作后，血清胸痛发作后，血清CK-MBCK-MB的上升先于其的上

41、升先于其CKCK总活性，总活性，CK- CK- MB/CKMB/CK0.030.03可诊断为可诊断为AMIAMI。 CK-MMCK-MM亚型的测定：以亚型的测定：以CK-MMCK-MM3 3/CK-MM/CK-MM1 11.01.0作为诊断作为诊断AMIAMI的的标准。标准。 CK-MBCK-MB2 2亚型：在亚型：在AMIAMI早期诊断和判断有无再灌注上同样有很早期诊断和判断有无再灌注上同样有很高的灵敏度和特异性。一般以高的灵敏度和特异性。一般以CK-MBCK-MB2 21.9U/L1.9U/L或或CK-MBCK-MB2 2/CK-MB/CK-MB1 11.51.5作为作为AMIAMI的诊断

42、标准。的诊断标准。 （三）乳酸脱氢酶及其同工酶（三）乳酸脱氢酶及其同工酶 生化特性生化特性 乳酸脱氢酶是糖酵解途径中的一种重要酶。乳酸脱氢酶是糖酵解途径中的一种重要酶。LDLD除催化除催化L-L-乳酸外还可催化乳酸外还可催化-羟丁酸羟丁酸、-酮丁酸进行脱氢反应。酮丁酸进行脱氢反应。 组织分布组织分布 LDLD位于细胞质中，是一种糖酵解酶。位于细胞质中，是一种糖酵解酶。LDLD是是由由H H（心型）和（心型）和M M型（肌型）两种不同亚基组成的四聚体。型（肌型）两种不同亚基组成的四聚体。5 5种同工酶种同工酶(LD1,LD2,LD3,LD4,LD5)(LD1,LD2,LD3,LD4,LD5)。

43、LDLD的测定方法的测定方法目前多用连续监测法。目前多用连续监测法。 以乳酸为底物（反应方向以乳酸为底物（反应方向L LP P）的顺向反应（称）的顺向反应（称LD-LLD-L法）。为法）。为IFCCIFCC参考方法（参考方法（pHpH为为9.49.4）。通过在）。通过在340nm340nm波波长处监测长处监测NADNAD+ + 还原成还原成NADHNADH吸光度的增加速率而计算吸光度的增加速率而计算LDLD活性。活性。 HNADHNADLLD丙酮酸乳酸)(LDLD同工酶的测定方法同工酶的测定方法 常用电泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目常用电泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以琼脂糖凝胶电泳

44、法更多用。一般成年人存在如前以琼脂糖凝胶电泳法更多用。一般成年人存在如下规律：下规律：LDLD2 2LDLD1 1LDLD3 3LDLD4 4LDLD5 5，部分正常儿童血，部分正常儿童血中可见中可见LDLD1 1LDLD2 2。LDLD及其同工酶测定的临床意义及其同工酶测定的临床意义心肌梗死心肌梗死 LDLD心肌酶中升高最晚，持续时间长。心肌酶中升高最晚，持续时间长。急性肝炎、慢性活动性肝炎和肝癌时，急性肝炎、慢性活动性肝炎和肝癌时，LDLD明显明显升高。升高。LDLD同工酶主要用于同工酶主要用于AMIAMI和肝病的诊断和肝病的诊断AMI: LDAMI: LD1 1升高最为显著，升高最为显著

45、，LDLD1 1/LD/LD2 21 1，视为诊断，视为诊断AMIAMI的一个特异指标。的一个特异指标。肝胆疾病肝胆疾病: LD: LD5 5升高常表示有肝细胞坏死。肝细胞升高常表示有肝细胞坏死。肝细胞性黄疸时性黄疸时LDLD5 5LDLD4 4，阻塞性黄疽时，阻塞性黄疽时LDLD4 4LDLD5 5。肿瘤肿瘤: : 肝癌时可伴有肝癌时可伴有LDLD4 4和和LDLD5 5明显增高；白血病、明显增高；白血病、胶原病时以胶原病时以LDLD3 3、LDLD4 4增高为主。增高为主。恶性贫血恶性贫血: : AMI时血清酶学变化时血清酶学变化 酶酶 开始升高时开始升高时间（间（h） 达峰值时间达峰值时

46、间（h） 恢复正常时恢复正常时间（间（h） CK 38 1036 7296 CK-MB 36 1224 4872 AST 612 2448 35天天 LD 1224 4872 1012天天 LD1 1012 4872 1012天天 （四）（四） - -谷氨酰转移酶及其同工酶谷氨酰转移酶及其同工酶 生化特性生化特性 -GT-GT或或GGT GGT 是一种含巯基的线粒体酶。是一种含巯基的线粒体酶。组织分布组织分布 分布于肾、胰、肺、肝、肠和前列腺等多种组分布于肾、胰、肺、肝、肠和前列腺等多种组织中，其中以织中，其中以肾脏肾脏含量最多。含量最多。 血清中血清中GGTGGT主要来源于肝胆系统。主要来源

47、于肝胆系统。GGTGGT测定的临床意义测定的临床意义( (1)1)胆道疾病胆道疾病 胆石症、胆道炎症、肝外梗阻等升高明显。胆石症、胆道炎症、肝外梗阻等升高明显。(2)(2)肝实质疾病肝实质疾病 肝炎、脂肪肝、肝硬化时中度升高。肝炎、脂肪肝、肝硬化时中度升高。 慢性肝炎活动期慢性肝炎活动期GGTGGT多增高，非活动期则多正常。多增高，非活动期则多正常。 原发性或转移性肝癌时不同程度的增高。原发性或转移性肝癌时不同程度的增高。(3)(3)诱导作用诱导作用 对乙醇性中毒的判断有一定的价值。对乙醇性中毒的判断有一定的价值。 长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者升长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕

48、药者升高。高。 酶学指酶学指标标 肝脏疾病肝脏疾病ALTASTGGTALP急性病毒性肝炎急性病毒性肝炎 （轻（轻-中）中） （重）（重）酒精性或药物性肝炎酒精性或药物性肝炎- N或或慢性肝细胞性疾病慢性肝细胞性疾病N或或N或或肝硬化肝硬化N或或N或或N或或N或或胆汁淤积性疾病胆汁淤积性疾病 各型肝胆疾病时常用酶学指标的变化概况各型肝胆疾病时常用酶学指标的变化概况检测项目检测项目应应 用用肝病有关酶肝病有关酶ALTALT与与ASTAST肝细胞损害肝细胞损害 轻、中度损伤轻、中度损伤ALTALT升高为主，重度损伤以升高为主，重度损伤以ASTAST升高明显。升高明显。ALPALP与与GGTGGT胆汁淤滞，在胆汁排泄受阻的肝胆疾病时升高。骨疾病胆汁淤滞，在胆汁排泄受阻的肝胆疾病时升高。骨疾病时升高。时升高。 MAO MAO 肝脏纤维化，肝纤维化病变及肝硬化时可升高。肝脏纤维化，肝纤维化病变及肝硬化时可升高。 ChEChE 肝实质细胞功能，肝实质损害致肝功能不全时，肝实