如何避免核酸假阳性结果判断

1、如何避免核酸假阳性结果判断概述新冠肺炎疫情爆发以来，核酸检测成为诊断新型冠状病毒肺炎 的主要依据，如何保证检测结果的准确性，需要从标本采集到检测的 每一个环节，需要按照流程进行严格的操作，保证检验结果的准确性, 避免假阳性的出现。原因分析核酸检测是病原学检测的一个金标准，影响检测结果影响因素 很多，检验前，检验中，检验后质量控制很关键。如何把控每一 个环节，需要每一个参与核酸检测医务人员都需要按照操作规范 完成。核酸检测假阳性可以将原因分以下几种情况：检测前：主要包括采样环境的准备、采集人员防护要求、标本 采集留取，转运等，每一个环节出问题都会影响检验结果的质量。检验中：实验室环清洁消毒、检验

2、人员操作规程、试剂的准确 性等都需要按照规范进行操作。检验后：从事核酸检测人员资质、核酸报告的研判以及核酸报 告的审核、以及标本的无害化处理、实验室的终末消毒等。应对措施01采集环境要求采样点应当为独立空间，具备通风条件，内部划分相应的清洁区和污 染区，配备手卫生设施或装置。采样点需设立清晰的指引标识，并明 确采样流程和注意事项。设立独立的等候区域，尽可能保证人员单向 流动，落实米线间隔要求，严控人员密度。02采样防护要求采样人员防护装备要求：N95及以上防护口罩、护目镜、防护服、 乳胶手套、防水靴套；如果接触患者血液、体液、分泌物或排泄物， 戴双层乳胶手套；手套被污染时，及时更换外层乳胶手套

3、。每采一个 人应当进行严格手消毒或更换手套。03标本采集肛拭子就是进入菊花的拭子，需插入肛门35cm后旋转、涂擦 来收集直肠内样本。04标本转运1、标本包装。所有标本应当放在大小适合的带螺旋盖内有垫圈、耐 冷冻的标本采集管里，拧紧。容器外注明标本编号、种类、姓名及采 样日期。将密闭后的标本放入大小合适的塑料袋内密封，每袋装一份 标本。2、标本送检。标本采集后室温放置不超过4小时，应在24h内送 到实睑室。如果需要长途运输标本，应采用干冰等制冷方式进行保存, 严格按照相关规定包装运输。3、标本接收。标本接收人员的个人防护按采样人员防护装备执行。 标本运送人员和接收人员对标本进行双签收。4、标本保

4、存。用于病毒分离和核酸检测的标本应当尽快进行检测， 能在24小时内检测的标本可置于4P保存;24小时内无法检测的标 本则应置于-70P或以下保存（如无70P保存条件，则于-20P冰箱 暂存）。应当设立专库或专柜单独保存标本。标本运送期间避免反复 冻融。05实验室清洁消毒使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒。消毒 液需每天新鲜配制，不超过24小时。06实验室人员要求实验室检测技术人员应当具备相关专业的大专以上学历或具有 中级及以上专业技术职务任职资格，并有2年以上的实验室工作经历 和基因检验相关培训合格证书。实验室配备的工作人员应当与所开展 检测项目及标本量相适宜，以保证及

5、时、熟练地进行实验和报告结果, 保证结果的准确性。07试剂的准确性所有市面上使用的检测试剂必须由国家食品药品监督管理局审 批，才能用于临床诊断使用，截止2021年2月5日国家药品监督管 理局网站显示关于核酸检测试剂盒和相关设备。id好新市的蜀椅4试剂应为申IL抵期中央必对疸情工作婀小组和国W院期既控机制郃奢.磔SJ3奇勒怆测M剂等位储济拄产品总悬率就作为用爱任务.1月20 日同工口皿念审批.1月220遮京8个产&R人应急审批.4无后即发席4个新点痘君核修检测产肝上市.石力支痔了疫侬5控初田工作需要.20204共世;登54个新无会5 松冽期y （25个核国胶测试剂，加个抗体吩褥忒剂，3个

6、抗瓜嗡Ig剂）,R中包括$个核酸供逆松测F品,形成了完期松嚼技术体系,产能达到2401.8万人份，天,为 常有化夜情防按工作提供了百力伊阳.学克现的理在比京国次新双膝炎药品天疗需WV给平台引比精刘14用在这次©情防技中切呈了十分关粒）作用.胡卜，国或对m 向正it推了起因滤停发.核惚怆泄0呼&丽蹄净牝芸*2。个仅需&各、1个以件和3个敷用产品.为JJ融相慎防控显休战.阻击赞奏于力,陶关时港产品打表Q 应当选择国家药品监督管理部门批准的试剂，并在选择标本采样 管和核酸提取试剂时，使用试剂盒说明书上建议的配套标本采样 管和提取试剂。常规核酸检测与基因测序对比常规核酸检测试

7、法基因测序法普及度（较高一c较低适用情形特殊技能大范围快速检测小范围验证确认全序列测定，与数据库进行比对，监测病毒是否变异08辅助性材料PCR实验室的辅料指的是PCR实验中常用的一些辅助试剂和耗 材，比如采样管、拭子、离心管、PCR管、吸头、移液器、无核 酸酶水和试管架等。1）表面核酸污染：用沾湿的拭子擦拭上述物品的外表面，然后浸泡到纯水中10mi” 吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无寸增为合格.（2）移液器内腔核酷污染：对于常用的移液器的内部.可使用无滤芯的吸头在阴性纯水中吹吸10次后，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格（3）表明细菌污染：用沾湿的无菌拭子攥扫:上述物品的外表面

8、，划琼脂平板，每个平板 的菌落数不应超过一定案量我也不英定多少合适，由于不要求元茵操作一定会有线 E,但是也不应该太多）.09实验室分区原则上开展新冠病毒核酸检测的实验室应当设置以下区域：试剂 储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区。这3个区域在物理 空间上应当是完全柜互独立的，不能有空气的直接相通。各区的功能 是1 .试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合 液的制备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。2 .标本制备区：转运桶的开启、标本的灭活，核酸提取及其加入 至扩增反应管等。10检测报告的出具和审核核酸检测结果需要有检验者和审核者双人进行审核，并对检验结果进行综

9、合判断，避免出现错误结果，只有双人核验才能保证检验结果的准确性，同时上传相应的网络信息平台（检测机构查询结果或者属地指定的核酸查询机构）。11实验室终末消毒处理1.实验室空气清洁。实验室每次检测完毕后，可采用房间定和/或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。2、工作台面清洁。每天实验后，使用0.2%含氯消毒剂或 75%酒精进行台面、地面清洁。3.生物安全柜消毒。实验使用后的耗材废弃物放入医疗废 物垃圾袋中，包扎后使用02%含有效氯消毒液或75%酒精喷洒 消毒其外表面。手消毒后将垃圾袋带出生物安全柜放入实验室废 弃物转运袋中。试管架、实验台面、移液器

10、等使用75%酒精进行 擦拭。随后关闭生物安全柜，紫外灯照射30分钟。4、转运容器消毒。转运及存放标本的容器使用前后需使用 0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行擦拭或喷洒消毒。5.塑料或有机玻璃材质物品清洁：使用0.2%含氯消毒剂或过氧 乙酸或过氧化氢擦拭或喷洒。12标本无害化处理标本进行检验后需要按照规定进行无害化处理，避免因操作不当，导 致标本的泄露，导致疫情发生或者感染病例出现。PCR污染的主要原因中南大学湘雅二医院检验医学科龙泽（化名）博士告诉丁香园，在新冠病毒核酸检测中，不合格样本通常是由于采样问题和采样用具问题导致的。工外源核酸污染:由于PCR的灵敏度非常高,理论上一个核酸分子的污染都

11、有可能引起结果的假阳性，因此PCR标本采集最好使用无菌、无核酶的一次性器材,取材必须严格执行无菌操作,并小心防止混入操作者或受检者的毛发、皮屑等。密封运输和保存，不能在扩增区域进行标本的采集和处理，防止PCR产物的污染。Z靶基因的降解:情况下，无菌采集的DNA样本稳定性较好,在室温下放置8h仍不影晌检验，但如果操作不当、抽血容器不 清洁、放置时间过长或有污染,DNA链有可能发生断裂,使长 片段的扩增变得困难。靶基因降解对于RNA样品影响更为严 重，由于环境中大量RNA酶的存在,若样品保存、运输条件不 佳或存放时间过长，模板RNA非常容易降解，造成假阴性。3. PCR抑制物:反转录反应和PCR反

12、应均为酶促反应,任何可能抑制这些反应的物质都会影响检验的结果。PCR污染的处理 1、标本污染生物安全柜的操作台造成局限污染时：立即用吸水纸 覆盖，并使用0.55%含氯消毒剂进行喷洒消毒。消毒液需要现用 现配，24小时内使用。2、标本倾覆造成实验室污染时：保持实验室空间密闭，避免污染 物扩散。立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。 必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为 2g/m3,熏蒸过夜；或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾, 用量8ml/m3,作用12小时；必要时或用高锦酸钾-甲醛熏蒸： 高镒酸钾8g/m3,放入耐热耐腐蚀容器（陶罐或玻璃容器），后 加入甲醛（40%） 10ml/m3,熏蒸4小时以上。熏蒸时室内湿度 60% 80%。3、清理污染物时严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸 汽