酵母与酵母双杂交系统2014图文精

1、第七章酵母与酵母双杂交系统 半子囊菌纲 -内胞霉目或酵母目 第一节 酵母菌特性 一、酵母菌概念及特点1、概念:2、特点: ¾个体一般以单细胞状态存在 ¾形态上:¾大小:宽约 平均直径 45 ¾多数营出芽繁殖¾能发酵糖类产能 ¾细胞壁常含甘露聚糖 ¾常生活在含糖量较高、酸度较大的水生环境中,水果、蔬菜、 蜜饯的表面,果园土壤中。 二、细胞的形态和构造1、细胞结构: 电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图 3、细胞膜固醇类 4、细胞核透性比任何生物膜都大 染色体 液泡:5. 细胞质 三、酵母菌培养的菌落固体培养基:菌落特征 :大,

2、圆形,光滑湿润,粘 性,较厚,外观较稠和较不透明 。颜色单调。常见白色、土 黄色、红色。 液体培养基 ¾¾¾亦可沉淀生长。 四、酵母菌的繁殖方式和生活史 无性繁殖 有性繁殖假酵母:只有无性繁殖过程。真酵母: (一无性繁殖 1、芽殖(budding :子细胞 出芽痕¾¾¾芽簇 假菌丝 芽殖方式 母细胞形成小突起(AD核裂(EG原生质分配(HI新膜形成(JK形成新细胞壁(L 芽殖过程 芽殖 2、裂殖:¾¾ 3、产生无性孢子: 子囊孢子 (三酵母菌的生活史生活史又称生命周期 三种方式:¾营养体既能以单倍体也能以

3、二倍体形式存在 ¾营养体只能以单倍体形式存在 ¾营养体只能以二倍体存在 1、营养体只能以单倍体形式存在 ¾¾¾ 八孢裂殖酵母 S. octosporus的生活史2、营养体只能以二倍体形式存在 ¾¾¾ 路德氏酵母的生活史3、营养体既能以单倍体也能以二倍体形式存在¾¾出芽繁殖 ¾ 酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae 的生活史 The yeast cell's life cycle. 1. Budding 2. Conjugation 3. SporeyBu

4、dding Yeast 五、重要病原酵母菌 有性阶段为子囊菌亚门 六、酵母转化 Yeast TransformationUsing Frozen Competent Cells andSingle-stranded DNA as a Carrier 1、 Stock solutions 2、 1X TE-LiAc10 mMTris-HCl 0.1 M Lithium acetate 3、 PEG-TE-LiAc 1 mM Preparing competent cells(感受态细胞 :1. Inoculate 100 mLyeast synthetic complete medium + 3

5、% glycerol medium from overnight culture. Grow culture to 0.5-1.0 ×107cells/mL. 2. 3. 4. Rotate at 23 for 1.0 -1.5 hr. transformation. Transformation: 4. Add 700 microlitersof PEG-TE-LiAc 第二节 酵母双杂交系统The Yeast Two-Hybrid System 1、基本原理¾调控转录起始 过程 的认识。¾由 Fields 和 Song 等 1989 A. Absence of Regulatory