结直肠癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表达

1、结直肠癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表赵勇，高建飞，章必成，杜光祖【关键词】结直肠癌Cksl,P27KiplandSkp2proteinexpressionincolorectalcancerAbstractAIM:ToinvestigatetheexpressionofCkslproteinanditsrelationshipwiththeexpressionsofSkp2,P27Kiplandcolorectaltumorigenesis.METHODS:FlowcytometrywasusedtodetecttheexpressionsofCksl,Skp2andP27Ki

2、plin20normalcolorectalmucosas,20adenomasaswellas54colorectalcancers.RESULTS:TheexpressionsofCkslandSkp2graduallyincreasedintheorderofnormalmucosa,adenomatocolorectalcancer(P<,whiletheexpressionofP27Kiplgraduallydecreasedinthesameorder(P<.AstrongcorrelationwasfoundbetweentheexpressionsofCksland

3、Skp2(r=,P<andasignificantinverserelationwasalsoobservedbetweentheexpressionsofCkslorSkp2andofP27Kipl(r=,P<r=,P<respectively).TheexpressionofCkslwassignificantlyassociatedwiththelossoftumordifferentiation(P<,butnotwithlymphnodemetastasisandDukesstaging(P>.CONCLUSION:Ckslmayplayanimport

4、antroleinhumancolorectaltumorigenesis.CkslmaybeanessentialfactorinproteasomedependentdegradationofP27KiplregulatedbySkp2.Keywordscolorectalneoplasms;cyclinkinasesubunit1;Sphasekinaseprotein2;P27Kiplprotein;ubiquitin【摘要】目的：探讨Cksl在结直肠癌发生及其在Skp2调剂P27Kipl降解进程中的作用.方式：应用流式细胞术测定正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌组织中Cksl,P2

5、7Kipl和SkP2蛋白的表达.结果：由正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤到结直肠癌Cksl,Skp2表达呈上升趋势(P,P27Kipl表达呈下降趋势(P.结直肠癌中Cksl,Skp2表达与P27Kipl表达呈负相关(r=,P;r=,P；Cksl与Skp2呈正相关(r=,P).结论:Cksl可能参与了结直肠癌的发生；结直肠癌中Cksl可能参与了Skp2调剂P27Kipl泛素化降解进程.【关键词】结直肠肿瘤；Cksl蛋白；SkP2蛋白；P27Kipl蛋白；泛素0引言许多恶性肿瘤中细胞周期性蛋白P27K1P1的表达是降低的，Fbox蛋白Sphasekinaseprotein2(Skp2)参与了P27Kip

6、l泛素化降解进程.Cyclinkinasesubunit1(Cksl)是高度保守的细胞周期调剂蛋白Sucl/Cks家族成员之一，只有结合Cksl后，才能识别P27Kipl进行泛素化蛋白降解1.而Cksl在肿瘤组织中尤其在结直肠癌组织中的表达及其与P27Kipl,Skp2间的关联性罕有报导.咱们用流式细胞仪检测了正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌中Cksl,P27Kipl和Skp2的表达.1材料和方式材料手术切除病理证明的结直肠癌标本54例，结直肠腺20例及正常结直肠黏膜20例.术前均未行放化疗或免疫医治.结直肠癌患者男29例，女25例，年龄2476(平均8)岁；DukesA期5例，B期22例

7、,C期18例,D期9例；有淋巴结转移26例,无转移28例.Cksl兔抗人mAb及Skp2鼠抗人mAb购自美国ZYMED公司，P27Kipl鼠抗人mAb购自丹麦DAKO公司.方式新鲜组织块cmXcmXcm,PBS洗净，机械破碎法制成单细胞悬液，mL加入两只小试管，PBS液洗涤1次，离心，弃上清，试管内加入兔抗人Cksl(或P27Kipl,Skp2)荧光mAb10UL,对照管加入PBS,混匀，4c孵育30min,PBS洗涤1次，离心,清除多余未结合抗体后上机检测.每1标本检测1X105个细胞.Cksl(或P27Kipl,Skp2)阳性率=试管中Cksl(或P27Kipl,Skp2)阳性细胞数一阴性

8、对照阳性细胞数/10000X100%.统计学处置：数据用x土s表示，采纳SPSS统计分析软件,3组间样本比较应用方差分析，各组间两两比较采纳SNKq查验，相关性分析采纳Spearman品级相关分析，P<为有显著性不同.2结果从正常肠黏膜、结直肠腺瘤到结直肠癌组织Cksl,Skp2蛋白表达呈上升趋势(P;而P27Kipl呈下降趋势(PV,表1).结直肠癌组织中Cksl表达与癌组织分化程度相关，低分化者Cksl表达率明显高于中、高分化者土)vs()和(土)，P,而与结直肠癌患者年龄、性别，淋巴结转移和Dukes分期无关.结直肠癌组织中Cksl蛋白表达与Skp2蛋白呈正相关（秩相关系数片0.8

9、45,PO；与P27Kipl蛋白负相关（尸，P；结直肠癌组织中Skp2蛋白与P27Kipl蛋白负相关（l,PV.在54例结直肠癌中，21例Cksl,Skp2同时高表达，P27Kipl低表达，14例Cksl,Skp2同时低表达,P27Kipl高表达;但3例Skp2,P27Kipl同时高表达,Cksl低表达；2例Skp2,P27Kipl同时低表达,Cksl高表达.表ICksl,P27Kipl和Skp2在结直肠癌中的表达（略）腺瘤O20OOO土癌O543S3Ovs正常黏膜和腺瘤.3讨论细胞周期调剂失控是肿瘤发生、进展的重要分子事件.作为细胞周期负性调剂因子的P27Kipl,其活性改变阻碍细胞周期进程

10、，进而阻碍细胞增殖，与肿瘤发生、进展紧密相关.泛素蛋白水解酶途径调剂是P27Kipl蛋白降解的要紧机制.一些恶性实体瘤中P27Kipl常呈低表达，而SkP2高表达,P27Kipl的表达与SkP2负相关2-3.本研究显示从正常肠黏膜、结直肠腺瘤到结直肠癌组织Skp2蛋白表达呈上升趋势，P27Kipl呈下降趋势；结直肠癌组织中Skp2蛋白与P27Kipl蛋白负相关.这一结果支持P27Kipl,Skp2参与了结直肠癌的发生及Skp2参与了P27Kipl泛素化降解进程的推论.但本实验还发觉5例Skp2,P27Kipl同时高表达或Skp2,P27Kipl同时低表达.Dowen等4发觉50%的宫颈癌组织中

11、P27Kipl,SkP2同时高表达或低表达.Hara等5发此刻缺乏Skp2的胞质内,仍可检测到P27Kipl的泛素化活动，说明细胞质内可能存在P27Kipl其他泛素化途径.咱们发觉从正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤到结直肠癌组织Cksl蛋白表达呈上升趋势，结直肠癌中Cksl的表达与肿瘤分化程度相关，这说明Cksl可能参与了结直肠癌的发生，Cksl蛋白表达增多，使得结直肠癌细胞离开了原有的正常生长周期调控，细胞呈无控制生长状态，Cksl表达越多，细胞分化程度越低，肿瘤恶性程度越高.同时咱们还发觉3例Skp2,P27Kipl同时高表达,Cksl低表达;2例Skp2,P27Kipl同时低表达，Cksl高表

12、达.尽管没有统计学意义，但这也说明Cksl是P27Kipl降解所必需的.【参考文献】1 SitryD,SeeligerMA,KoK,etal.ThreedifferentbindingsitesofCkslarerequiredforp27ubiquitinligationj.JBiolChem,2002,277(44):42233-42240.2 LimMS,AdamsonA,LinZ,etal.ExpressionofSkp2,ap27(Kipl)ubiquitinligase,inmalignantlymphoma:Correlationwithp27(Kipl)andproliferationindexj.Blood,2002,100(8):2950-2956.3 YokoiS,YasuiK,SaitoOharaF,etal.Anoveltargetgene,SKP2,withinthe5pl3ampliconthatisfrequentlydetectedinsmallcelllungcancersJ.AmJPathol,2002,161(1):207-216.4DowenSE,ScottA,MuknerjeeG,etal.OverexpressionofSkp2incarcinomaofthecervixdoesnotcorrelateinverselyw