川芎嗪预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤延迟保护作用

1、川芎嗪预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤延迟保护作用 09-02-01 15:33:00 作者：古小明,何明编辑：studa20【摘要】 目的 探讨川芎嗪预处理对心肌缺血/再灌注损伤延迟保护作用。方法 实验用SD新生（13 d）大鼠，雌雄不拘，无菌取出乳鼠心脏，经分离附着组织、胰蛋白酶消化及纯化制成心肌细胞培养，第4 天随机分为4组：正常对照（Control）组、缺氧/复氧（A/R）组、缺氧预处理(APC)组、川芎嗪(TMPZ)组。观察心肌细胞搏动频率、细胞存活率（MTT法）、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 细胞搏动频率：缺氧/复氧组(133 )次/min，与正常对照组相比差异有显著性（

2、P0.05），与缺氧/复氧组比较差异有显著性（P0.05）；细胞存活率： 缺氧/复氧组(36.234.05)%，与正常对照组比较，差异有显著性（P0.05）；APC组(83.766.92)%，TMPZ组(80.564.65)%分别与缺氧/复氧组比较，差异有显著性（P0.05）；LDH活性： 缺氧/复氧组(36.732.35) U/L与正常对照组比较，差异有显著性（P0.05）；APC组（5.700.63 ） U/L、TMPZ组(5.740.34) U/L，分别与缺氧/复氧组比较，差异有显著性（P0.05）。结论 从细胞水平证实TMPZ预处理后24 h心肌细胞对再次缺氧/复氧损伤具有保护作用。

3、【关键词】 缺氧/复氧损伤；缺氧预适应；延迟保护；川芎嗪Abstract:Objective To investigate the delayed myocardioprotection of TMPZ pre- conditioning. Methods Cultured myocardial cells of neonatal SD rats have been randomly divided into 4 groups: Control group; anoxia reoxygenation (A/R)group;anoxia preconditioning group(APC); T

4、MPZ group; In each group, the cardiomyocytes were subjected to anoxia (3 hr) followed by reoxygenation (1 hr) 24 hr after anoxic (or TMPZ) preconditioning on the model of the cultured cardiomyocytes. At the end of experiment, myocardial cells beating rate, cell viability and the activity of LDH in c

5、ulture were measured. Results Beating rate of ventricular myocytes: The beating rate was significantly slow in A/R group(133 beats/min) compared with that of control group（P0.05）,and compared with A/R , the beating rate was significantly increased（P0.05）;the cell viability:The cell viability of A/R(

6、36.234.05)% was significantly decreased when compared with that of control group（P0.05）; the viability of APC (83.766.92)% ,TMPZ (80.564.65)% was significantly increased when compared with A/R respectively，（P0.05）;LDH activity: LDH activity of A/R (36.732.35 ) U/L was significantly increased when co

7、mpared with Control group（P0.05）； LDH activity of APC（5.700.63 ）U/L or TMPZ (5.740.34 ) U/L was significantly decreased when compared with A/R respectively （P0.05）.Conclusion TMPZ preconditioning can mimic the delayed protection on cultured neonatal rat myocardiocytes with hypoxia/reperfusion injury

8、.Key words: anoxia/reoxygenation; anoxia preconditioning; delayed protection; TMPZ心肌缺血预适应（ischemic precoditioning，IPC）指一次或几次短暂反复心肌缺血再灌注可使心肌在此后的持续缺血再灌注损伤中得到保护1。这一概念自1986年Murry等提出后，即为缺血心肌的保护及其机制的探索开辟一个新的领域，成为许多学者专家研究的热点。根据保护效应出现的时间，IPC被分为早期(early phase,EP)和延迟期(delayedphase,DP)2个阶段2。EP发生于缺血后数分钟,持续23 h；

9、DP于缺血1224 h后出现、持续34 d。由于DP的持续时间长便于利用,成了临床和实验研究的重点。研究者们期望发现此类药物或识别DP中合成的内源性保护蛋白，拟在临床有效地应用IPC。川芎嗪是中药川芎的主要生物碱，其化学结构是四甲基吡嗪(trtramethylpyrazine, TMPZ)。本研究在原代培养心肌细胞缺氧/复氧损伤及缺氧预处理模型上,观察缺氧预处理后24 h对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用。1材料与方法1.1实验动物 由江西医学院医学实验动物科学部提供的SD大鼠的乳鼠（13 d），雌雄不限,合格证号0219602。1.2主要试剂 5Br2deoxyuridine (BrdU): S

10、igma公司产品；MEM培养基：GIBCO BRL公司产品；4(2hydroxyethyl)1piperazine ethanesulfonic acid (HEPES): Sigma公司产品；胎牛血清：杭州四季青生物工程材料有限公司产品；川芎嗪粉剂：中国药品生物制品检定所提供，生产批号：001026；青霉素钠盐：江西东风药业有限公司产品；链霉素：华美生物有限公司产品。1.3实验主要仪器和设备 超净工作台：苏州净化设备厂；二氧化碳培养箱:长沙长锦应用技术研究所；全自动生化分析仪:美国Beckman公司。1.4方法 取2025只出生13 d的SD乳鼠的心肌细胞进行无菌分离、纯化、培养，参照Spe

11、ctor3等的方法略加改进。将培养第4 天的原代心肌细胞随机分4组：正常对照（Control）组、缺氧/复氧（A/R）组、缺氧预处理(APC)组、川芎嗪(TMPZ终溶度为100 mol/L)组；每组重复8次进行缺氧预处理、TMPZ预处理和缺氧复氧实验。实验结束后于倒置显微镜观察并计数单位时间内各组心肌细胞搏动的频率；采取MTT比色法检测心肌细胞存活率，美国Beckman生化自动分析仪测定LDH活性。1.5统计分析 采用统计软件SAS8.0进行方差齐性检验、方差分析（ANOVA），以P0.05为差异有显著性。2结 果2.1各处理组心肌细胞缺氧复氧损伤后细胞搏动的变化 正常对照组心肌细胞搏动频率(993)次min-1相对恒定，节律规则；与正常对照组相比，缺氧/复氧组(133)次min-1差异有显著性（P0.05），表现为搏动频率减慢、搏动幅度减弱、节律不齐，有部分停搏，部分细胞搏动幅度强弱不等；而正常对照组与APC组(8