微生物实验考核内容及汇总

1、精选优质文档-倾情为你奉上微生物实验考核内容及汇总考核一1.1 大体观1.1.1葡萄球菌鉴别  （ 白色 金黄色 柠檬黄）1.1.2血琼脂平板1.1.3 SS琼脂平板1.1.4 生化管试验（1）糖发酵试验原理:多糖单糖丙酮酸酸性产物(或产酸产气)pH 指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管（我们实验一般只用糖发酵管，不区分产气与否）试剂：酚红、溴甲酚紫等结果：若糖发酵管颜色呈 紫色，则为阴性；呈 黄色，则为阳性应用：观察细菌对糖度的 分解情况，

2、常用于肠道杆菌的鉴定注：钟老师在课上，还提到一种双糖试验。如果现象为培养基为黄色，则为肠道非致病菌，上红下黄色，则为肠道致病菌，其他的记不得。（2）硫化氢试验：原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基结果：培养基  变黑 为阳性；不变黑 为阴应用：常用于肠道杆菌的鉴定（3）靛基质试验（吲哚试验）：原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：

3、加入试剂后，培养基交界面出现玫瑰红色，为阳性培养基交界面为黄色或浅红色：为阴性 （注：如果要鉴别，要自己动手加试剂哦）应用：用于肠道杆菌的鉴定（4）尿素酶试验原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指示剂结果：培养基变红：阳性培养基不变色 阴性应用：肠杆菌科属间鉴定总结阳性现象：糖发酵 黄色；硫化氢 黑色；靛基质加试剂变玫瑰红 ； 尿素酶 红色1.1.5 动力实验动力阳性  穿刺线清晰周围培养基澄清动力阴性  穿刺线模糊细菌向周围扩散生长，培养基浑浊1.1.

4、6 真菌菌落真菌能分泌酶使有机物降解成可溶性营养成分，吸收至细胞内进行新陈代谢。大多数真菌营养要求不高，在沙保氏培养基(Sabouraud's smedium 含4%葡萄糖 1.0%蛋白胨 pH4.06.0 )，2228生长良好。大多于12周出现典型菌落。真菌菌落一般有三种类型。1酵母型菌落，为单细胞真菌的菌落，形态与一般细菌菌落相似，以出芽形式繁殖，如新型隐珠菌。2类酵母型菌落，外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，它是由伸长的芽生孢子形成，如白色念珠菌。3丝状菌落，为多细胞真菌的菌落，由许多菌丝体组成。菌丝多数有隔分

5、成多个细胞称有隔菌丝，有的菌丝无隔，称无隔菌丝。部分菌丝伸入培养基中吸收营养和水分，称营养菌丝；另一部分菌丝向空间生长称气中菌丝，能产生孢子的气中菌丝称生殖菌丝。有些真菌的气中菌丝形状特殊，呈球拍状、螺旋状、鹿角状等是各种皮肤丝状菌鉴别的依据之一。丝状菌落呈棉絮状、绒球状、粉末状或石膏粉样，在下面和背面可显示各称不同色素。（找不到类酵母型的图，若某看客找到，希望与空间主人联系，先行谢过！）1.1.7亚碲酸钾血琼脂平板含有0.033%亚碲酸钾血清培养基上，白喉棒状杆菌 在生长繁殖能吸收碲盐，并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点。且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，

6、故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。1.2镜下观鞭毛 荚膜  异染颗粒（不算细菌的特殊结构，但是考试有要求）蓝色（下图为葡萄球菌）红色考核二：油镜使用（1）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。（2）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上垂直滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。（3）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。（4）观察，分辨视野中的为革兰阳性菌（蓝色），还是阴性菌（红色），并填在卷子上（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标

7、本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。考核三3.1接种细菌（详情可见实验指导P6365，以下内容较繁琐）（一）平板分区划线分离培养法【材料】1大肠埃希菌和葡萄球菌混合液2琼脂平板【方法】        琼脂平板培养的方法很多，现以分区划线接种法为例。此方法可通过划线分离，充分利用培养基表面，分离出单个生长的菌落。1.在平板的底部用记号笔写上组别、标本名称或编号、日期等记号。（实验考忽略本步骤）2.右手握持接种环 (执笔式)通过火焰灭菌，冷却后，取一接种环上述细菌混合液。3.再以左手握持平板培养基，使平板略呈垂直

8、方向，并靠近火焰周围，以免空气中杂菌落入。然后将蘸有菌液的接种环，先在培养基一角涂成薄膜，即1区。4.烧灼接种环，以杀死环上剩余的细菌，冷却后，将接种环再通过区薄膜处作连续划线（使环面与平板表面成45度角，以腕力在平板表面进行划线，注意勿使培养基划破），划出约占总表面积五分之一的区，同法，再分别划出区及区、区(见图3-1)。注意区勿与区接触。(考试中可一般划4个区，除非前4区忘记灼烧，在第4区划好后，进行一次灼烧，划第5区)5.将划好的平板倒置(于37培养箱，培养1824h后观察菌落的形状、大小、边缘、颜色、湿润度、透明度等，比较两种菌落的差异)。（二）纯种细菌接种法  &

9、#160;     细菌经分离培养出单个菌落后，常需再移种至其他培养基中，以进一步鉴定或保存菌种。根据接种培养基之物理性状，纯种细菌接种法可分为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种法三类。1、斜面培养基接种法        斜面培养基接种法一般用于纯培养。从平板上挑取单个菌落接种至斜面培养基上，培养后获得大量纯种细菌（有菌苔生长），可进一步对细菌进行鉴定或作为菌种保存。【材料】1大肠埃希菌斜面菌种2琼脂斜面培养基【方法】1左手持菌种管与待接种的培养管，将两管并列，略倾斜

10、，琼脂的斜面部均向上。2右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌，待冷。3以右手掌与小指、小指与无名指分别拨取并挟持两管盖塞，将两管口迅速通过火焰灭菌。4用无菌冷却了的接种环伸入菌种管，从斜面上刮取菌苔少许，立即移入待接种的培养基管，自斜面底部向上划一直线，然后再由底部向上蜿蜒划线 (见图3-2)。取出接种环，管口通过火焰灭菌，塞回盖塞。作好标记后培养。次日观察细菌菌苔生长情况。 2、液体培养基接种法液体培养基接种法，主要用于增菌培养或细菌鉴定。若接种于肉汤培养基，经37培养1824h后，可观察细菌的不同生长现象。其他的液体培养基，如葡萄糖蛋白胨水、各种单糖发酵管等，接种后大多供测定

11、细菌生化反应之用。【材料】1大肠埃希菌斜面菌种2肉汤培养基【方法】1取接种环火焰烧灼灭菌，冷却。2按照上述“双管接种法”一样的操作手法，左手持细菌斜面菌种和肉汤培养基两支试管，右手持接种环，按无菌操作取少量细菌，按图3-3所示在倾斜的管壁与液面交界处轻轻地研匀，试管直立时粘附管壁上的细菌浸入液体中，管口火焰灭菌，塞瓶塞，接种后放于37温箱中培养1824h后取出。3、半固体穿刺接种法半固体穿刺接种法，主要用于保存菌种或检查细菌有无动力，无动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线生长，有动力的细菌在半固体培养中呈扩散生长，甚至使培养基变得混浊。另外，此法也可用于细菌生化反应的检测，如接种于醋酸铅培养基，

12、明胶培养基等。【材料】半固体培养基，痢疾志贺菌斜面培养物、大肠埃希菌斜面培养物。【方法】1.将接种针经火焰烧灼灭菌冷却后，从斜面培养物上沾取细菌。2.用无菌操作穿刺接种，将接种针刺入半固体培养基的正中央，深度达距管底0.5厘米处为止，然后顺原路退出，穿刺时要直进直出（图3-4）。接种针经火焰灭菌后放回原处。3.管口经火焰灭菌后，塞回盖塞，培养于371824h后观察结果。注：平板分区划线要记得在划好2区后灼烧一次接种环；除了半固体的动力实验用的是接种针其他时候用的均为接种环；操作要在酒精灯旁；用右手的小指持培养基管的胶塞，不能置于桌面上，且管口要记得过火焰三次左右的灭菌。3.2染色3.2.1革兰

13、染色步骤一、制片（1）涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。 拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。（2）干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。（3）固定：常用高温进行固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动34次，共约34秒。要求玻片温度不超过60，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。二、染色（1）初染： 加结晶紫液34滴（其实覆盖满细菌圈即可），染1min，细水冲洗，甩去积水。（2）媒染： 滴加卢戈碘液，染1min，细水冲洗，甩去积水。（3）脱色： 滴加95%酒精，轻晃玻片，再冲洗，反复滴加冲洗2次，共30S，甩去积水。（4）复染： 滴加稀释石炭酸复红溶液，染色30s，细水冲洗，甩去积水,滤纸吸干。三、油镜观察3.2.2抗酸染色步骤一、制片：同上二、染色：（1）初染：滴