布洛芬赖氨酸有关物质高效液相分析方法

1、第15卷第9期2008年9月现代农业科学Modern Agricultural Sciences Vol .15No .9Sep.2008布洛芬赖氨酸有关物质高效液相分析方法胡士凤,姚勃,曹晓燕(湖北天茂实业股份有限公司,湖北荆门448000摘要:采用Agilent C18柱,以水(调节pH 至2.5乙腈(640:360,为流动相,检测波长214n m,流速为2.0mL /m in,柱温为30。结果表明样品浓度在2.0140.14ug/mL 相当于布洛芬样品溶液0.05%(定量检测限1.0%的溶液的峰面积与浓度成线性关系,相关系数R >0.99,表明线性关系较好;定量限和检测限试验中,信

2、噪比符合规定,能够达到定量检测及检出的要求;0.05%、0.10%、0.15%的回收率均在90%110%的范围内,符合要求。该方法专属性好,精密度、准确度都符合要求,方法可靠,可用于原料药布洛芬赖氨酸盐有关物质的控制。关键词:布洛芬赖氨酸;有关物质;高效液相色谱中图分类号:R971+.1文献标识码:A 文章编号:100524650(20080920018202D eterm i n a ti on of the Rel a ted Subst ance i n I buprofen L ysi n e by RP 2HPLCCAO X i a o 2yan,YAO Bo,HU Sh i 2fe

3、ng(Hubei Tianmaoshiye I ncor porated Company,J ing men,Hubei 448000,China Abstract:Chr omat ographic experi m ents were perfor med on Agilent C18colu mn (15c m ×4.6mm ×5.0m ,the mobile phase was water (PH 2.5and acet onitrile (640:360;the detecti on wavelength was 214n m,the fl ow rate was

4、 2.0m l/m in,colu mn te mperature was 30.The results showed that the concentrati on of samp le s oluti on was linear with its peak area in the range of 2.0140.14ug/m l (equivalent t o 0.05%1.0%ibup r ofen sa mp le s oluti on ,the correlati on coefficients were higher than 0.99,and linear correlati o

5、n was better;the signal t o noise rati o accorded with regulati on in the test of the li m it of quantificati on and detecti on,and may meet the require ment of quantitative detecti on .The method has str ong s pecificity and reliability,its p recisi on and accuracy fulfilled the requirements,and ca

6、n be used t o the contr ol of the related substance in ibup r ofen lysine .Key words:ibup r ofen lysine;related substance;RP -HP LC 收稿日期:2008-18-20布洛芬(1bup r ofen 是一种高效低毒的非甾体解热镇痛药物,临床上除用于风湿性和类风湿性关节炎的长期治疗外,也用于神经痛、牙痛、头痛、感冒综合症等的急性治疗。由于该药水溶性小,临床上只有片剂和胶囊剂,无注射剂1。布洛芬赖氨酸盐(I bup r ofen Lysine 系一种布洛芬水溶性盐,它为制备

7、布洛芬注射剂,增加给药途径奠定了基础2。由于布洛芬赖氨酸盐在各国药典中均没有收载,其有关物质分析方法也只有一些研究单位具有其有关物质的分析方法,为保证产品的质量与用药安全,我们采用高效液相法控制布洛芬赖氨酸盐的有关物质,分析方法灵敏、准确、可靠。1所需仪器校验及对照品、样品、试剂的情况所需仪器:Agilent 1100型高效液相色谱仪,包括四元梯度洗脱泵(在线自动脱气、UV 多波长检测器和Che m stati on 色谱工作站。所用对照品、样品及试剂:布洛芬标准品(湖北天茂实业股份有限公司内部精制、布洛芬赖氨酸盐(湖北天茂实业股份有限公司生产、各杂质对照:2-(4-methyl phenyl

8、 p r opanoic acid 、2-(4-ethyl phenyl p r opanoic acid 、2-(4-p r opyl phenyl p r opanoicacid 、2-(4-butyl phenyl p r opanoic acid 、4-Is obutylacet ophenone 以上均为湖北天茂实业股份有限公司合成2、乙腈、赖氨酸。2验证方法及结果2.1色谱条件及溶液配制3检测波长:214n m 进样量:10u L,色谱柱:C18;规格:15c m ×4.6mm ×5.0u m 。柱温:室温;fl ow rate:2.0m l/m in 。流动相

9、:水(用磷酸调节pH 至2.5的配制:加1.0mL 氨水于1000mL 超纯水中,用磷酸调节PH 值为2.5。水(用磷酸调节pH 至2.5-乙腈(640:360,如有必要,可适当放大或缩小。杂质溶液:取0.00504g2-4-正丁基苯丙酸至100mL 量瓶,用乙腈溶解并稀释至刻度。则C 2-4-正丁基苯丙酸=50.4ug/mL;系统适用性溶液:准确称取布洛芬对照品0.10061g,置25mL 量瓶,加2m l 杂质溶液,用流动相稀释至刻度。则C 2-4-正丁基苯丙酸为4.032ug/m l,C 布洛芬为4.0244mg/mL 。对照贮备溶液1:准确称取布洛芬对照品0.20043g,置50mL

10、量瓶,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。C 1=4.0086mg/mL对照溶液:取对照贮备溶液11mL 置100mL 的量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀即得.则C对=40.086ug/mL计算公式:杂质%=(A杂/A I B Ux(C I B U x(352/206/ C样x100%2.2系统适用性及专属性进流动相3针,均未有干扰峰。从系统适用性溶液中得布洛芬与正丁基苯丙酸的分离度:R=3.18>2.0。6针布洛芬对照溶液峰面积RS D=1. 07%<2.0%,在整个系统中每隔约10针的对照溶液的峰面积RS D<2.0%,证明整个系统是稳定的,其结果是可信的,分别用流动相配制赖

11、氨酸、2-(4-methyl phenylp r opanoic acid、2-(4-ethyl phenylp r opanoic acid、2-(4-p r opyl phenylp r opanoic acid、2-(4-butyl phenylp r opanoic acid,4-Is obutylacet ophenone、ibup r ofen定位溶液。根据流动相、分离度溶液、赖氨酸溶液、对照品溶液的图谱确定各峰保留时间和出峰位置。空白溶液对检测无干扰,相邻峰间的分离度均大于2.0。此项试验符合要求。布洛芬中可能存在的杂质和降解杂质在此试验条件下,得到了很好的分离,专属性好。2.3

12、重复性准确称取布洛芬赖氨酸盐20060101样品6份约0.18 g,分别置6个25mL量瓶中,用流动相制成浓度为7.2mg/m l的溶液。计算6份样品中的最大单杂质分别为0.027%、0.025%、0.024%、0.026%、0.023%、0.025%RS D为5. 65%;杂质总和分别为0.027%、0.025%、0.024%、0.026%、0.023%、0.025%的RS D为5.65%。RS D小于15.0%重复性试验符合要求。2.4检测限及定量限布洛芬的浓度稀释至信号与噪音的比为10:1时,为布洛芬赖氨酸盐的定量限浓度为2.004ug/m l。且定量限溶液峰面积RS D为6.31%小于

13、10.0%(n=6。布洛芬峰的信噪比为3:1的浓度为0.641ug/m l,即为布洛芬赖氨酸盐检测限,符合验证方案的要求。2.5线性范围准确称取布洛芬对照品配制成浓度分别为2.01、4.01、6.02、20.07、40.14ug/mL的线性溶液。用浓度与峰面积作回归,线性方程为y=10.166x+4.6694,相关系数r=0.9999,表明2.0140.14ug/mL(相当于布洛芬样品溶液的0.05%(定量检测限1.0%的溶液的峰面积与浓度成线性关系。2.6准确度试验准确称取布洛芬对照品用流动相配制成2.19ug/mL、4.38ug/mL、6.56ug/mL的溶液(分别为0.05%、0.10%

14、、0.15%。分析结果见表1。表1不同浓度下布洛芬的回收率样品编号进样次数布洛芬测得值/(ug/mL样品中布洛芬/(ug/mL回收率/%各浓度平均回收率/%回收率RS D/%回收率溶液112.3822.3532.292.19108.70107.30104.60106.90回收率溶液214.4224.4334.284.38100.90101.1097.70回收率溶液316.4426.2436.326.5698.2095.1096.3096.50各浓度下的回收率均在90%110%范围内,9个回收率数据的相对标准差小于10.0%。回收率符合要求。2.7耐用性表2改变条件后布洛芬的回收率流动相比例(p

15、H2.5水-乙腈66:34.62:38按下表改变条件后,各进分离度溶液1针与对照溶液6针,分别计算RS D均小于2%及布洛芬峰和正丁基苯丙酸峰之间的分离度均小于2.0。3讨论3.1流动相的选择布洛芬赖氨酸盐的有关物质包括布洛芬的有关物质和和赖氨酸的有关物质,对赖氨酸有关物质我们参照赖氨酸的有关物质方法控制,而布洛芬的有关物质我们参照USP中布洛芬有关物质分析方法,先采用直接用磷酸调PH值,发现做样的过程中不稳定,重复性不好,分析原因是赖氨酸有影响,为了消除这种影响,先加一定的氨水再用磷酸调PH 值,经试验,重复性很好,就选用以上流动相。3.2验证结果的评价和建议根据验证结果可知,此方法系统适用性试验、重复性、分离度均符合规定,浓度在2.0140.14ug/mL(相当于布洛芬样品溶液的0.05%(定量检测限1.0%的溶液的峰面积与浓度线性关系很好;定量限和检测限能够达到