第04章药物定量分析与分析方法验证

1、第04章药物定量分析与分析方法验证 第一节第一节 样品的前处理方法样品的前处理方法哪些药品需要前处理哪些药品需要前处理何为不经有机破坏处理何为不经有机破坏处理何为有机破坏处理何为有机破坏处理生物样品前处理生物样品前处理一、需要前处理的样品一、需要前处理的样品l含金属药物：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸含金属药物：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。l含卤素药物：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺含卤素药物：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。溴酞钠等。l生物样品：血样、尿液、唾液、头发等生物样品：血样、尿液、唾液、头发等二、二、不经

2、有机破坏处理的分析方法不经有机破坏处理的分析方法l直接测定法直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子相连的或某适用于金属原子不直接与碳原子相连的或某些些CM键结合不牢固的有机金属药物键结合不牢固的有机金属药物l经氧化还原后测定法（经氧化还原后测定法（ZnZn）适合于卤素结合于芳环上的药物适合于卤素结合于芳环上的药物l经水解后测定法经水解后测定法 适合于卤素与脂肪碳链相连的药物适合于卤素与脂肪碳链相连的药物 适用于金属原子或卤素与碳原子适用于金属原子或卤素与碳原子结结合牢固合牢固的有机金属药物。的有机金属药物。湿法破坏湿法破坏干法破坏干法破坏三、三、经有机破坏处理的分析方法经有机破坏处理的分析方

3、法高温炽灼法高温炽灼法氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法1. 湿法破坏湿法破坏 （1 1）硝酸）硝酸- -高氯酸法高氯酸法 （2 2）硝酸）硝酸- -硫酸法硫酸法 （3 3）硫酸）硫酸- -硫酸盐法硫酸盐法 （4 4）其它湿法）其它湿法v注意：湿法破坏的仪器一般为凯氏烧瓶；试剂应不含被测离子或干扰测定的成分；由于矿酸量数倍于样品，须做空白实验校正；操作须在通风橱内进行。2. 高温炽灼法高温炽灼法 适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不能用硫酸进行破坏的有机药物。 经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转

4、化为无机元素测元素转化为无机元素3. 氧瓶燃烧法（氧瓶燃烧法（Oxygen flask combustion method）将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定分析方法进行鉴别、检查或含量测定适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析v仪器装置仪器装置铂金丝铂金丝硬质玻璃燃硬质玻璃燃烧瓶烧瓶样品样品无灰滤纸无灰滤

5、纸透透明明胶胶纸纸燃烧、催化燃烧、催化 v称样称样v燃烧分解操作燃烧分解操作（通（通O O2 2 1-2 min1-2 min，燃烧），燃烧）v吸收液吸收液水水-NaOH-NaOH（含碘、溴、氯药物）（含碘、溴、氯药物） 例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉水水- H- H2 2OO2 2（含硫药物）（含硫药物） 例磺溴酞钠例磺溴酞钠水（含氟药物）水（含氟药物）硝酸溶液（含硒药物）硝酸溶液（含硒药物）四、生物样品分析前处理技术四、生物样品分析前处理技术l 一般考虑一般考虑v根据生物样品种类根据生物样品种类血血-除蛋白质除蛋白质尿尿-缀合物水解缀合物水解唾液唾液-除去粘蛋

6、白除去粘蛋白v根据测定方法根据测定方法 免疫分析免疫分析灵敏、专属灵敏、专属前处理要求简单前处理要求简单 光谱分析光谱分析灵敏、选择性差灵敏、选择性差前处理要求高前处理要求高 色谱分析色谱分析准确、精密，专属准确、精密，专属除蛋白质除蛋白质v根据药物理化性质根据药物理化性质酸碱度，溶解性，挥发性，紫外吸收性质等酸碱度，溶解性，挥发性，紫外吸收性质等药物的浓度如药物的浓度如ng，ug，mg级级测定目的如药代动力学、代谢分型等测定目的如药代动力学、代谢分型等l去除蛋白质去除蛋白质v目的：目的：使药物从结合状态下释放出来使药物从结合状态下释放出来减少提取过程中的乳化减少提取过程中的乳化 消除干扰，保

7、护色谱柱消除干扰，保护色谱柱 v常用去蛋白方法：常用去蛋白方法：加入与水相混溶的有机溶剂加入与水相混溶的有机溶剂使蛋白质分子内及分使蛋白质分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，与蛋白质结合的子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，与蛋白质结合的药物被释放出来（甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、丙醇、四药物被释放出来（甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、丙醇、四氢呋喃）。一般离心速度在氢呋喃）。一般离心速度在10000r/min（用具塞塑料（用具塞塑料离心管）离心管）前处理方法前处理方法加入中性盐加入中性盐，如（，如（NH4)2SO4，Na2SO4等，将与蛋白等，将与蛋白质水合的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。质水合

8、的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。加入强酸加入强酸（10%三氯乙酸、三氯乙酸、6%高氯酸等）高氯酸等） 在低于蛋白质等电点在低于蛋白质等电点pH时，与蛋白质阳离子形成不溶性盐时，与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。而沉淀。 加入加入Zn2+、Cu2+在高于蛋白质等电点在高于蛋白质等电点pH时，与蛋白质时，与蛋白质阴离子形成不溶性盐而沉淀。阴离子形成不溶性盐而沉淀。 酶解法酶解法 （蛋白水解酶（蛋白水解酶枯草菌溶素）枯草菌溶素） 使组织酶解，释放出药物，不会发生乳化，对与蛋白结合使组织酶解，释放出药物，不会发生乳化，对与蛋白结合牢固的药物可显著改善回收率。牢固的药物可显著改善回收率。l缀合物水解缀

9、合物水解v缀合物主要是葡萄糖醛酸苷缀合物、硫酸酯缀合物、谷胱缀合物主要是葡萄糖醛酸苷缀合物、硫酸酯缀合物、谷胱甘肽缀合物等。缀合物极性较大，难被有机溶剂提取，故甘肽缀合物等。缀合物极性较大，难被有机溶剂提取，故需先进行水解。需先进行水解。v常用水解方法有：常用水解方法有：酸水解：如酸水解：如HClHCl，作用强、快、专属性差，作用强、快、专属性差酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或该两酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或该两种酶的混合酶种酶的混合酶。酶水解慢、专属、较温和酶水解慢、专属、较温和溶剂解：较温和溶剂解：较温和前处理方法前处理方法 有机破坏有机破坏 提取纯化提取纯化液液- -液提

10、取液提取液液- -固提取固提取被测组分的浓集被测组分的浓集衍生化反应衍生化反应 液固萃取液液萃取前处理方法前处理方法第二节第二节 定量分析方法定量分析方法化学分析法化学分析法光谱分析法光谱分析法色谱分析法色谱分析法重量分析法重量分析法容量分析法容量分析法紫外分析法紫外分析法UVUV荧光分析法荧光分析法FIAFIA高效液相色谱高效液相色谱HPLCHPLC气相色谱气相色谱GCGC方法方法 应用品种数应用品种数新增新增仪器仪器分析法分析法HPLCHPLC339339282282TLCTLC32321212GCGC23231919分光光度法分光光度法18183 3化学化学分析法分析法滴定法滴定法131

11、33 3重量法重量法5 51 1氮测定法氮测定法5 51 1挥发油测定法挥发油测定法3 30 0浸出物测定法浸出物测定法13132 2总计总计456456327327容量分析法（滴定）容量分析法（滴定）v概念：一定浓度的滴定液由滴定管加到待测药物溶液概念：一定浓度的滴定液由滴定管加到待测药物溶液中，按化学计量反应完全。根据滴定液浓度、体积及中，按化学计量反应完全。根据滴定液浓度、体积及化学计量计算被测药物含量。化学计量计算被测药物含量。v关键问题：等当点的确定。关键问题：等当点的确定。 滴定点滴定点指示剂显示的滴定终点指示剂显示的滴定终点 （指示剂的变色点指示剂的变色点） 等当点等当点反应的化

12、学计量点反应的化学计量点 （消耗的滴定液的摩尔数被测物摩尔数）（消耗的滴定液的摩尔数被测物摩尔数）v特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵敏度低，通常用于高含量和中含量药物灵敏度低，通常用于高含量和中含量药物v滴定方式滴定方式 直接滴定法直接滴定法 剩余滴定法剩余滴定法 置换滴定法置换滴定法 v含量的计算：含量的计算：l定量关系：定量关系： aA bBaA bB 被测药物被测药物 滴定液滴定液化学计量关系化学计量关系 nA/ anB/ b WA/ aMAWB/ bMBl滴定度：滴定度：1mL1mL某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的某物质的量浓

13、度的滴定液相当于被测药物的重量，中国药典用重量，中国药典用mgmg表示。表示。l滴定度的计算：滴定度的计算：T滴定度滴定度(mg/ml) c滴定液浓度滴定液浓度(mol/L)M被测物质分子量被测物质分子量以以I2（0.05mol/l）计，反应摩尔比）计，反应摩尔比 1 1例例n 直接滴定法直接滴定法 含量含量 100100 实际工作中配制的滴定液浓度与药典中的规定浓度不实际工作中配制的滴定液浓度与药典中的规定浓度不一致，须引入滴定液浓度校正因子一致，须引入滴定液浓度校正因子( f ) F 含量含量l基于滴定度的百分含量计算：基于滴定度的百分含量计算：若异戊巴比妥钠的取样量为若异戊巴比妥钠的取样

14、量为0.2052g0.2052g依法用依法用F=1.010F=1.010的硝酸银滴定液的硝酸银滴定液(0.1 mol/L)(0.1 mol/L)滴定，消耗滴定，消耗8.10ml8.10ml，则，则异戊巴比妥钠的含量异戊巴比妥钠的含量已知：每已知：每1 ml 1 ml 硝酸银滴定液（硝酸银滴定液（0.1 mo1/L0.1 mo1/L）相当于）相当于24.83 mg24.83 mg的异戊巴比妥钠的异戊巴比妥钠例n 回滴定法回滴定法 加入滴定液加入滴定液A A 与被测药物完全反应，再以滴定液与被测药物完全反应，再以滴定液B B 回滴回滴剩余的滴定液剩余的滴定液 A A 滴定液滴定液A A 与滴定液与

15、滴定液B B 的浓度是相当的，根据消耗的浓度是相当的，根据消耗回滴的滴定液体积进行计算回滴的滴定液体积进行计算 本法需进行空白试验校正本法需进行空白试验校正 含量含量 100100光谱分析法光谱分析法v利用物质的光谱特性进行定量利用物质的光谱特性进行定量v介绍两种光谱分析方法：介绍两种光谱分析方法：l紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法分子的价电子吸收了光的能量，由低能分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态跃迁到高能量的激发态，在相量的基态跃迁到高能量的激发态，在相应波长位置出现吸收带形成的光谱，称应波长位置出现吸收带形成的光谱，称为紫外为紫外-可见吸收光谱可见吸收光谱紫外吸收光谱图紫外吸

16、收光谱图l紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法n波长范围波长范围200200760nm760nmn定量分析基本原理：朗伯定量分析基本原理：朗伯- -比尔定律比尔定律 A=ECLA=ECLn特点：灵敏度高特点：灵敏度高(10(10-4-41010-7-7 g/mL) g/mL)； 准确度高；准确度高； 仪器便宜；易操作仪器便宜；易操作（一）对溶剂的要求（一）对溶剂的要求 A尽量小尽量小（二）空白对照试验（二）空白对照试验 清零清零（三）测定波长确证（三）测定波长确证 2nm（四）供试液的浓度（四）供试液的浓度 A=0.30.7n吸收度的测定要求吸收度的测定要求n含量测定含量测定吸收系数法（不需要

17、对照品）吸收系数法（不需要对照品） 测定测定 处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算计算 含量含量 100100盐酸氯丙嗪含量测定盐酸氯丙嗪含量测定: :精密称取精密称取0.2368g0.2368g，置，置500ml500ml量量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液量取续滤液1ml1ml，置，置100ml100ml量瓶中，加同一溶剂稀释量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在至刻度，摇匀，在254nm254nm波长处测得吸收度为波长处测得吸收度为0.4350.435，按为按为915915计

18、算，求其百分含量。计算，求其百分含量。例n含量测定含量测定对照品比较法对照品比较法: :配制供试品溶液和对照品溶液，测定配制供试品溶液和对照品溶液，测定 处吸收度处吸收度 C C待测待测C C对照对照 含量含量 100100要求浓度与吸光度成正比，要求浓度与吸光度成正比，因此供试品与对照品溶液中的被测成分应尽可能一致因此供试品与对照品溶液中的被测成分应尽可能一致（实际要求（实际要求 10%10%）WDC n含量测定含量测定标准曲线法（多点对照）标准曲线法（多点对照）绘制对照液浓度吸光度标准曲线（绘制对照液浓度吸光度标准曲线（3-53-5点）点）拟合回归方程，求出供试液浓度拟合回归方程，求出供试

19、液浓度标准曲线标准曲线计算分光光度法计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法多波长校正计算分光光度法双波长分光光度法双波长分光光度法三波长分光光度法三波长分光光度法导数光谱法导数光谱法解联立方程法解联立方程法l荧光分析法荧光分析法荧光荧光 处于第一激发态的分子，处于第一激发态的分子， 跃迁回基态时发射跃迁回基态时发射的光称为荧光，其能量小于激发光，波长长于激发的光称为荧光，其能量小于激发光，波长长于激发光；光； 除去激发光源，荧光立即熄灭除去激发光源，荧光立即熄灭荧光激发光谱（激发光谱）荧光激发光谱（激发光谱）荧光发射光谱（荧光光谱）荧光发射光谱（荧光光谱）荧光为发射光，利用荧光的物理特性进行

20、定性与定荧光为发射光，利用荧光的物理特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法量测定的方法称为荧光分析法（激发光谱）（激发光谱）（发射光谱）（发射光谱）n原理原理 当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件一定时，在一定时，在较稀浓度较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶范围内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比液中该物质的浓度成正比荧光强度荧光强度浓度浓度n特点：特点：灵敏度较紫外高、选择性好灵敏度较紫外高、选择性好 (10(10-10-101010-12 -12 g/mL)g/mL)； 取样少、方法快速；取样少、方法快速； 应在低浓度下进行；应在低浓度下

21、进行； 干扰因素较多，须进行空白校正；干扰因素较多，须进行空白校正； 能产生荧光的物质较少，可采用荧光能产生荧光的物质较少，可采用荧光 衍生化处理衍生化处理n含量测定含量测定 对照品比较法对照品比较法由于绝对荧光强度难以测定，需要在每次测定前用一定浓由于绝对荧光强度难以测定，需要在每次测定前用一定浓度的对照品溶液校正仪器灵敏度，然后读取对照品溶液、度的对照品溶液校正仪器灵敏度，然后读取对照品溶液、供试品溶液及各自溶剂的空白读数。供试品溶液及各自溶剂的空白读数。 C C待测待测C C对照对照由于浓度线性范围较窄，由于浓度线性范围较窄， 应在应在0.50.52.02.0之间之间色谱分析法色谱分析法

22、v是一种分离分析方法是一种分离分析方法 利用各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异得到分利用各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异得到分离，再逐个进行分析离，再逐个进行分析v介绍两种色谱分析方法：介绍两种色谱分析方法：l高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）l气相色谱法（气相色谱法（GCGC）固定相固定相色谱过程色谱过程流动相被分离组分保留时间保留时间定性定性进样点t0死时间tR保留时间tR保留时间峰面积（或峰高）峰面积（或峰高）定量定量色谱的保留行为色谱的保留行为 类类 型型 特特 点点HPLCHPLCGCGC分离效能高分离效能高（理论板数（理论板数 n n）10104 41

23、0105 5填充柱填充柱 10103 3毛细管柱毛细管柱=10=106 6分析速度快分析速度快几分钟几十分钟几分钟几十分钟几分钟几十分钟几分钟几十分钟灵敏度高灵敏度高 （最小检出量）（最小检出量）UVD 10UVD 10-9-9g g FD 10 FD 10-13-13g gTCD 10TCD 10-8-8g gFID 10FID 10-13-13g g适用范围宽适用范围宽80%80%有机化合物有机化合物20%20%有机化合物有机化合物仪器化程度高仪器化程度高智能化智能化智能化智能化l高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）n固定相、流动相及检测器的选择固定相、流动相及检测器的选择常

24、用系统常用系统固定相（色谱柱）：十八烷基键合硅胶固定相（色谱柱）：十八烷基键合硅胶C C1818流动相：甲醇流动相：甲醇- -水、乙腈水、乙腈- -水水检测器：紫外吸收检测器检测器：紫外吸收检测器十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图蒲 公 英 图分析型色谱柱分析型色谱柱各种类型色谱柱各种类型色谱柱色谱柱色谱柱内径：内径：4.6mm4.6mm长度：长度：15mm15mm、25mm25mm柱填料粒度：柱填料粒度：5 510m10m灯灯 室室流通池流通池检测器检测器 紫外检测器（紫外检测器（UVD UVD 最常用）、荧光检测器、示差折最常用）、荧光检测器、示差折光

25、检测器、电化学检测器、二极管阵列检测器（光检测器、电化学检测器、二极管阵列检测器（DVDDVD）、）、蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（ELSDELSD）和质谱检测器（）和质谱检测器（MSMS）等）等紫外检测器外观图紫外检测器外观图l高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）n系统适用性试验系统适用性试验用规定的对照品对仪器进行试验和调整用规定的对照品对仪器进行试验和调整 理论板数（理论板数（n n） 分离度（分离度（R R） 重复性（重复性（RSDRSD） 拖尾因子（拖尾因子（T T） 1 1）色谱柱的理论板数（）色谱柱的理论板数（n n） n n值越大柱效越高，值越大柱效越高，应

26、高于规定的最小理论板数应高于规定的最小理论板数t tR R 保留时间保留时间W Wh/2h/2 半高峰宽半高峰宽 2 2）分离度（）分离度（R R） R R值越大分离效果越好值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定外，应大于待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定外，应大于1.51.5。 3 3）重复性）重复性 考察测量的精密度考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3 35 5次，除另有规定次

27、，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSDRSD）应不大于）应不大于2.02.0。 RSDRSD计算公式计算公式 份号份号12345A20617.25 19663.07 19543.30 20412.41 19254.30 例题例题 取某对照品溶液取某对照品溶液10l，连续进样，连续进样5次，记录各次色谱峰峰面积如下，次，记录各次色谱峰峰面积如下，试判断色谱系统重复性是否符合规定。试判断色谱系统重复性是否符合规定。X=19898.1 S=586.789RSD=2.9%不符合规定不符合规定 4 4）拖尾因子（）拖尾因子（T T） 考察色谱峰的对称性考察

28、色谱峰的对称性 T T 值越接近于值越接近于1.0 1.0 色谱峰的对称性越好，测量的准确度越高。色谱峰的对称性越好，测量的准确度越高。采用峰高法测量时，应检查待测峰的采用峰高法测量时，应检查待测峰的T T是否符合规定。除另是否符合规定。除另有规定外，有规定外，T T应在应在0.950.951.051.05之间。之间。WW0.05h0.05h为为0.050.05峰高处的峰宽峰高处的峰宽d d1 1为峰极大至峰前沿之间的距离为峰极大至峰前沿之间的距离选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标

29、法的关键或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标法的关键是选择合适的内标物。是选择合适的内标物。 校正因子（f f ） 其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/CsAs/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CRAR/CR）的多少倍。f =As/CsAR/CRn含量测定含量测定 内标加校正因子法：内标加校正因子法：对照对照+内标内标样品样品+内标内标样品样品内标内标对照对照内标内标C样样 = = f A A样样/(A/(A内内/C/C内内) )校正因子校正因子f =(A=(A内内/ C/ C内内)/(A)/(A对对/C/C对对) )外标法：外标法：（1 1）外标一点法）外标一点法被测成

30、分与其峰面积成正比关系被测成分与其峰面积成正比关系要求供试液与对照液浓度相近要求供试液与对照液浓度相近=A供供A对对C供供对对样品样品C供供=C对对A供供A对对对照对照外标法：外标法：（2 2）标准曲线法）标准曲线法 绘制浓度峰面积绘制浓度峰面积( (峰高峰高) )标准曲线；标准曲线； 拟合回归方程并计算拟拟合回归方程并计算拟合常数；合常数； 测定供试品峰面积测定供试品峰面积( (峰峰高高) )，带入方程，求出浓，带入方程，求出浓度。度。特点及要求：特点及要求： 外标法不使用校正因子，准确性较高，外标法不使用校正因子，准确性较高， 操作条件变化对结果准确性影响较大。操作条件变化对结果准确性影响

31、较大。 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。样的快速分析。基本原理基本原理 各组分在固定相与载气之间由于分配系数不同而按各组分在固定相与载气之间由于分配系数不同而按不同顺序被带出，分配系数小的组分先流出，分配系数大的不同顺序被带出，分配系数小的组分先流出，分配系数大的后流出后流出以气体为流动相的色谱法以气体为流动相的色谱法l气相色谱法（气相色谱法（GCGC）优点优点 灵敏度高、样品用量少灵敏度高、样品用量少 分离效能高，分离速度快分离效能高，分离速度快缺点缺点 受样品蒸气压的限制受样品蒸气压的限制 不适于难气化和热稳定的药物不适

32、于难气化和热稳定的药物n色谱柱、载气及检测器的选择色谱柱、载气及检测器的选择 气源气源 进样及气化系统进样及气化系统 色谱柱和柱温箱色谱柱和柱温箱 检测器检测器 热导检测器热导检测器 氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 电子捕获检测器电子捕获检测器ChP（2005）对气相色谱仪的一般要求）对气相色谱仪的一般要求 色谱柱色谱柱 填充柱或毛细管柱（空心柱填充柱或毛细管柱（空心柱) 固定液固定液 高沸点液体高沸点液体 载气载气 氮气氮气 检测器检测器 氢火焰离子化检测器（氢火焰离子化检测器（FID） 检测温度高于柱温检测温度高于柱温 一般一般 250 350n系统适用性试验：同系统适用性试验：同H

33、PLCHPLC法法n含量测定：含量测定： 手动进样时，进样口温度高，注射器插入胶垫后针手动进样时，进样口温度高，注射器插入胶垫后针尖部分受热，以致针尖内溶液受热膨胀，部分溶液会尖部分受热，以致针尖内溶液受热膨胀，部分溶液会被挤入进样口，使进样量发生偏差。被挤入进样口，使进样量发生偏差。 以内标法为主，操作及计算方法同以内标法为主，操作及计算方法同HPLCHPLC法法第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证一、目的一、目的 证明所用的分析方法适合相应的检验要求证明所用的分析方法适合相应的检验要求 （一）起草新药质量标准时（一）起草新药质量标准时 （二）改变生产工艺时（二）改

34、变生产工艺时 改变制剂处方改变制剂处方 修订原分析方法时修订原分析方法时二、用途二、用途三、需验证的分析项目三、需验证的分析项目v 鉴别v 检查：杂质定量或限度检查v 含量测定：原料药或制剂中有效成分及制剂中其他成分（如降解产物、防腐剂等）四、验证指标四、验证指标准确度准确度 精密度精密度专属性专属性 检测限检测限定量限定量限 线性线性范围范围 耐用性耐用性重复性重复性中间精密度中间精密度重现性重现性（一）准确度（一）准确度 该法测定结果与真实值或参考值接近程度该法测定结果与真实值或参考值接近程度 用百分回收率用百分回收率%表示表示 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法

35、”和“加样回收试验法”。 l回收率回收率 100100加入量空白值测定平均值 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。l 原料药用已知浓度的对照品测定，或将本法测定结果与另一已建立准确度的方法的测定结果相比。l制剂用已知量的被测物混合物测定，或与另一已建立准确度的方法的测定结果相比。1. 含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度2. 杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方得到杂质或降解产物，可用本法测定结果

36、与另一成熟的方法进行比较。法进行比较。（二）精密度（二）精密度偏差（偏差（d）标准偏差（标准偏差（SD）相对标准偏差（相对标准偏差（RSD）变异系数（变异系数（CV）同一均匀样品，经多次取样测定，所得结果同一均匀样品，经多次取样测定，所得结果之间的接近程度之间的接近程度*重复性重复性 同人、仪器、时间同人、仪器、时间*中间精密度中间精密度 同室，但不同人、仪器、时间同室，但不同人、仪器、时间 *重现性重现性 不同地方协同检验不同地方协同检验（三）专属性（选择性）（三）专属性（选择性） 在有其他成分（杂质、降解产物、辅在有其他成分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在时，该分析方法对待测组料等）可能

37、存在时，该分析方法对待测组分准确而专属的测定能力分准确而专属的测定能力 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察（四）检测限（四）检测限LOD样品中待测组分能被检测出的最低量样品中待测组分能被检测出的最低量是限度试验参数，无需定量测定。常用是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。表示。仪器分析法仪器分析法检测限（检测限（D）灵敏度（灵敏度（S）噪音噪音 （N）SN3D SN2D 或或 把低浓度样品信号与空白样品信号进行比较，把低浓度样品信号与空白样品信号进行比较，按信噪比（按信噪比（S/N）3:1或或2:1时的相应浓度或进样量时的相应浓度或进样量为检测限为检测限非仪器分析法非仪器分析法 能观察到实验现象的最低浓度为检测限能观察到实验现象的最低浓度为检测限（五）定量限（五）定量限 LOQ 样品中被测组分能被定量测定的最低量样品中被测组分能被定量测定的最低量（应达到一定的准确度和精密度）（应达到一定的准确度和精密度）常用常用%、ppm、ppb表示表示 非仪器分析法非仪器分析法 用已知浓度的样品确定定量限，将测定结果计用已知浓度的样品确定定量限，将测定结果计算准确度和精密度算准确度和精密度仪器分析法仪器分析法 按信噪比按信噪比10:1时的相应浓度或进样量为时的相应浓度或