液相色谱工作原理及简单操作

1、Agilent 1260 HPLC 结构及简结构及简单操作单操作 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作工作原理及简单操作 内容： 一、 HPLC各模块的原理； 二、开机/关机操作； 三、软件；一一 、 HPLC各模块工作原理及维护各模块工作原理及维护 HPLC： 高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatography）。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。 关于溶剂关于溶剂HPLC各模块的工作原理及维护所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用一次性水相/有机相滤膜。所有溶剂应经

2、过超声脱气；水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天；注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。泵的注意事项泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。四元泵： 缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道： 有机溶剂；D通道： 缓冲溶液。HPLC各模块的工作原理及维护自动进样器自动进样器样品要干净、经过过滤。样品要干净、经过过滤。l洗针：

3、把样品残留降低到最洗针：把样品残留降低到最小限度小限度HPLC各模块的工作原理及维护关于恒温柱箱关于恒温柱箱控制范围：最高80C，低温低于室温10C。左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。HPLC各模块的工作原理及维护检测器检测器DAD在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关,这样也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min 左右HPLC各模块的工作原理及维护检测器检测器FLDHPLC各模块的工作原理及维护FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。开机操作：1，打开计算机。2，打开LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-

4、2min。3，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。4，打开Seal Wash清洗液开关，清洗10min。5，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多30min.6, 拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即可以打样。关机操作：1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。3，在工作站上关闭各个模块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭LC各个模块的电源。二、二、 开机开机/关机操作关机操作指示灯状态指示灯状态每个部件接通电源后LED灯显示绿色关机 power off准备进样 pow

5、er on没准备好Not Ready运行Run故障Error驻留ResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示黑Black黑Black黄Yellow绿Green红Red黄闪烁Yellow blinking6种LED仪器状态：开机/关机操作每次用过仪器后必须做每次用过仪器后必须做! !整台液相色谱仪的维护整台液相色谱仪的维护1. 在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时 必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。2. 关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲洗整个系 统，时间为1520分钟，流量1ml/min。本步骤主要是冲 洗干净系统内其他含盐的部位。3. 用纯的强溶剂冲洗整

6、个系统，时间为1小时，流量为 1ml/min。本步骤主要是保护色谱柱。4. 如果未使用缓冲液，上面1、2两步骤可免去，直接用 纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为1ml/min。开/关机操作 三、实验操作及软件三、实验操作及软件 1、开机、开软件、开机、开软件 2、冲柱子：、冲柱子：95%甲醇（排气泡）甲醇（排气泡）-5%甲醇（排甲醇（排气泡）气泡） -流动相（排气泡）。流动相（排气泡）。 3、编辑数据采集方法、编辑数据采集方法 4、单针及序列、单针及序列 5、样品采集、样品采集 6、图谱优化、图谱优化 7、报告、报告 样品前处理一、提取一、提取1、称样：、称样：5.0g2、提取：高氯酸，超声波，水浴，离心，调、提取：高氯酸，超声波，水浴，离心，调pH。3、萃取：异丙醇、萃取：异丙醇-乙酸乙酯乙酸乙酯4、浓缩：旋转蒸发仪、浓缩：旋转蒸发仪二、净化二、净化1、活化：、活化：10ml甲醇、甲醇、3ml水、水、3ml磷酸二氢钠、磷酸二氢钠、3ml水水2、上样：提取液加入柱中，弃去流出液。、上样：提取液加入柱中，弃去流出液。3、淋洗