安图TORCH抗体亲和力检测

1、TORCH-IgG抗体抗体亲和力检测亲和力检测郑州安图生物工程股份有限公司郑州安图生物工程股份有限公司提纲提纲n抗体亲和力定义抗体亲和力定义nTORCH抗体亲和力检测的意义抗体亲和力检测的意义nTORCH抗体亲和力检测的现状抗体亲和力检测的现状n安图安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒抗体亲和力检测试剂盒 抗体亲和力是抗体亲和力是整个抗体分子与抗原表位之间结合整个抗体分子与抗原表位之间结合强度，即强度，即抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间的非共价引力与斥力之和的非共价引力与斥力之和。抗体亲和力（抗体亲和力（Avidity）的定义）的定义抗体亲和力成熟理论抗体亲和

2、力成熟理论初次感染产生的抗体为低亲和力抗体，随着时间的推移，体内初次感染产生的抗体为低亲和力抗体，随着时间的推移，体内抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体，一般需要抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体，一般需要3-6个月时间。个月时间。 模板学说模板学说 （Template theory） 克隆选择学说克隆选择学说 （Clonal selection theory）模板学说模板学说 （Template theory）免疫系统在按照抗原（模版）来制造更高亲和力的抗体免疫系统在按照抗原（模版）来制造更高亲和力的抗体B体细胞高体细胞高频突变频突变BBBBYYYYYYYYYYBYYYYYYYYYY原发原发感染感染36

3、个月个月克隆选择学说克隆选择学说 （Clonal selection theory）免疫系统对高亲和力抗体的筛选过程免疫系统对高亲和力抗体的筛选过程TORCH抗体亲和力检测的意义抗体亲和力检测的意义n 胎儿出生缺陷的风险与原发感染胎儿出生缺陷的风险与原发感染/复发感染、感染发复发感染、感染发生的时间、孕周密切相关生的时间、孕周密切相关n 判断原发感染或复发感染判断原发感染或复发感染n 判断原发感染发生的时间判断原发感染发生的时间n TORCH规范化检测流程的重要环节规范化检测流程的重要环节对于巨细胞病毒对于巨细胞病毒IgM抗体阳性的样本，需要结合抗体阳性的样本，需要结合IgG抗体抗体亲和力的结

4、果进行分析。亲和力的结果进行分析。IgM抗体阳性，同时抗体阳性，同时IgG抗体低抗体低亲和力，有较高风险。亲和力，有较高风险。美国帕洛艾尔托医疗基金会弓形美国帕洛艾尔托医疗基金会弓形虫确认实验室，将弓形虫虫确认实验室，将弓形虫IgG亲和亲和力抗体检测列为确认方法之一，力抗体检测列为确认方法之一，用于排除假阳性及非急性感染。用于排除假阳性及非急性感染。对对IgM抗体阳性或可疑的样本，进行抗体阳性或可疑的样本，进行IgG抗体亲和力检测很有抗体亲和力检测很有价值，如果价值，如果IgG抗体为低亲和力，再进行羊水穿刺抗体为低亲和力，再进行羊水穿刺PCR检测是检测是合适的选择。合适的选择。对生殖器疱疹患者

5、的单纯疱疹病毒对生殖器疱疹患者的单纯疱疹病毒IgG抗体亲和力检测可以区抗体亲和力检测可以区分原发和复发感染。分原发和复发感染。使用敏感方法检测使用敏感方法检测TORCH IgG/IgMIgG- IgM-IgG+ IgM-IgG+ IgM+IgG- IgM+孕期卫生教育无需进一步检测让患者3周后再检测孕期20周孕期20周IgG亲和力检测IgG亲和力检测高亲和力低亲和力高亲和力无需进一步检测高度传染性回顾性检测前三个月样本IgG-IgM- 和IgG-IgM+IgG+ IgM-IgG+ IgM+低亲和力IgGIgG+ IgM+高亲和力IgG高度传染性复发 低传染性高度传染性无需进一步检测可进一步检测

6、母体病毒血症评估：尿液PCR、血液PCR胎儿健康度评估：超声、MRI侵入性检测：羊膜穿刺、定量PCR超声、MRI案例分析案例分析1Munro SC, et al. J Clin microbiol,2005,43:4713-4718使用敏感方法检测使用敏感方法检测TORCH IgG/IgMIgG- IgM-IgG+ IgM-IgG+ IgM+IgG- IgM+孕期卫生教育无需进一步检测让患者3周后再检测孕期20周孕期20周IgG亲和力检测IgG亲和力检测高亲和力低亲和力高亲和力无需进一步检测高度传染性回顾性检测前三个月样本IgG-IgM- 和IgG-IgM+IgG+ IgM-IgG+ IgM+

7、低亲和力IgGIgG+ IgM+高亲和力IgG高度传染性复发 低传染性高度传染性无需进一步检测可进一步检测母体病毒血症评估：尿液PCR、血液PCR胎儿健康度评估：超声、MRI侵入性检测：羊膜穿刺、定量PCR超声、MRI案例分析案例分析 2Munro SC, et al. J Clin microbiol,2005,43:4713-4718TORCH抗体亲和力检测现状抗体亲和力检测现状n 试剂盒检测原理：解离剂法和抗原中和法，解离剂法是主流方法。试剂盒检测原理：解离剂法和抗原中和法，解离剂法是主流方法。n 试剂盒检测方法：酶联免疫法、自动化化学发光法，酶联免疫法较多。试剂盒检测方法：酶联免疫法、

8、自动化化学发光法，酶联免疫法较多。n 国内，对国内，对TORCH亲和力研究较少，仅有少量的文献报道了亲和力研究较少，仅有少量的文献报道了IgG亲和力亲和力检测的临床意义，在临床上还没有得以真正运用。检测的临床意义，在临床上还没有得以真正运用。n 国外国外，对对TORCH IgG亲和力强弱与感染时间的关系做了许多研究工作，亲和力强弱与感染时间的关系做了许多研究工作，雅培，索林和梅里埃等很多厂家的抗体亲和力试剂盒都获得了雅培，索林和梅里埃等很多厂家的抗体亲和力试剂盒都获得了FDA或或CE认证，用于认证，用于TORCH感染的辅助诊断感染的辅助诊断。n 巨细胞病毒和弓形虫抗体亲和力检测应用普遍。巨细胞

9、病毒和弓形虫抗体亲和力检测应用普遍。n 各厂家试剂盒的检测结果存在差异。各厂家试剂盒的检测结果存在差异。抗体亲和力检测方法抗体亲和力检测方法通过解离剂将低亲和通过解离剂将低亲和力抗体解离掉。力抗体解离掉。通过中和抗原将高亲通过中和抗原将高亲和力抗体中和掉。和力抗体中和掉。国内获得批准文号的产品及方法国内获得批准文号的产品及方法厂家及项目名称厂家及项目名称安图安图DiaSorinRocheAbbottBiomerieuxCMV-IgG AVIELISA化学发光化学发光电化学发光电化学发光化学发光化学发光ELISA荧光荧光RV-IgG AVIELISA/TOX-IgG AVIELISA化学发光化学

10、发光电化学发光电化学发光化学发光化学发光ELISA荧光荧光HSV-1IgGELISA/HSV-2IgGELISA/2012年以后批准上市年以后批准上市国外批准上市的主要厂家及方法国外批准上市的主要厂家及方法巨细胞病毒亲和力试剂盒检测结果比较巨细胞病毒亲和力试剂盒检测结果比较安安图图标标杆杆Radim、Euroimmun与临床的符合率优于其他厂家，安图产品与临床的符合率优于其他厂家，安图产品研发以研发以Radim为参比试剂盒。为参比试剂盒。弓形虫亲和力试剂盒检测结果比较弓形虫亲和力试剂盒检测结果比较各厂家检测结果差异不大各厂家检测结果差异不大低亲和力结果可能不是急性感染低亲和力结果可能不是急性感

11、染高亲和力结果可以排除急性感染高亲和力结果可以排除急性感染 第一个国产第一个国产TORCH五项抗体亲和力检测试剂盒（五项抗体亲和力检测试剂盒（2013年获得批准文号）年获得批准文号） 国家十二五规划国家十二五规划 863课题项目之一课题项目之一 产品设计兼顾产品设计兼顾IgG检测灵敏度和高值样本检测灵敏度和高值样本OD值不超限值不超限 产品原理：解离剂法产品原理：解离剂法 产品方法：产品方法：ELISA 样本稀释：样本稀释： 1/100孔外稀释孔外稀释 反应模式：反应模式：30分钟分钟-10分钟分钟-30分钟分钟-10分钟分钟 加样量：加样量： 稀释后样本、对照缓冲液、解离缓冲液、酶结合物均稀

12、释后样本、对照缓冲液、解离缓冲液、酶结合物均100ul/孔。孔。 波长设置：波长设置： 450/620nm双波长读数，如果样本双波长读数，如果样本OD值值3.0，用，用405/620nm双双 波长读数。波长读数。 结果计算：亲和力指数结果计算：亲和力指数=解离缓冲液孔解离缓冲液孔OD值值/对照缓冲液孔对照缓冲液孔 OD值值100%安图安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒抗体亲和力检测试剂盒123456789101112 AQLS3S7 ABQLS3S7 BCQHS4 CDQHS4 DES1S5 EFS1S5 FGS2S6 GHS2S6 H加样模式加样模式BIOMEX血清转化盘血清转化盘48份样本

13、的亲和力与份样本的亲和力与 感染时间的关系感染时间的关系BIOMEX 48份血清转化盘的感染时间小于份血清转化盘的感染时间小于80天，其中天，其中33份样份样本为本为IgG阳性，均为低亲和力，灵敏度为阳性，均为低亲和力，灵敏度为100%。R RV V血血清清转转化化盘盘图图1：安图试剂盒：安图试剂盒CMV-IgG抗体亲和力水平随感染时间的变化抗体亲和力水平随感染时间的变化图图2：Abbott ATCHIT试剂盒试剂盒CMV-IgG抗体亲和力水平随感染时间的变化抗体亲和力水平随感染时间的变化CMVCMV血血清清转转化化盘盘安图试剂安图试剂盒在感染盒在感染100天后检天后检测基本为测基本为高亲和力高亲和力Abbott ATCHIT试试剂盒在感剂盒在感染后染后120天天仍为低亲仍为低亲和