磺胺类药物检测（液质方法）

1、兽药残留检测兽药残留检测（GB/T 20759-2006GB/T 20759-2006） 原理原理 畜禽肉中磺胺类药物残留用乙腈提取，离心后，上清液用旋转蒸发畜禽肉中磺胺类药物残留用乙腈提取，离心后，上清液用旋转蒸发器浓缩近干，残渣用流动相溶解，并用正己烷脱脂后，样品溶液供液相器浓缩近干，残渣用流动相溶解，并用正己烷脱脂后，样品溶液供液相色谱色谱- -串联质谱仪测定，外标法定量。串联质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682 GB/T6682 规定的一级水规定的一级水（1 1）乙腈：色谱纯。）乙腈：

2、色谱纯。（2 2）异丙醇。）异丙醇。（3 3）正己烷。）正己烷。（4 4）乙酸铵。）乙酸铵。（5 5）无水硫酸钠：经）无水硫酸钠：经650650灼烧灼烧4h4h，置于干燥器中备用。，置于干燥器中备用。（6 6）流动相：乙腈）流动相：乙腈+0.01mol/L+0.01mol/L乙酸铵溶液（乙酸铵溶液（12+1812+18）。）。试剂和材料试剂和材料 （7 7）磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑，磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲异噁）磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑，磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺-6-6-甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、

3、磺胺甲甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑，磺胺噻唑，磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺基异噁唑，磺胺噻唑，磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶，磺胺苯吡唑标准物质：纯度二甲嘧啶，磺胺苯吡唑标准物质：纯度99%99%。（8 8）十六种磺胺标准储备溶液：）十六种磺胺标准储备溶液：0.1mg/ml0.1mg/ml，准确称取适量的每种磺胺标准物质，准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成用甲醇配成0.1mg/mL0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在的标准储备溶液，该溶液在44保存，可使用二个月。保存，可使用二个月。（9 9）基质混合标准工作溶液：

4、根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品）基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度（提取液配成不同浓度（ngng/ml/ml）的基质混合标准工作溶液，基质混合标准溶液在）的基质混合标准工作溶液，基质混合标准溶液在44保存，可使用一周。保存，可使用一周。3.103.10滤膜滤膜0.2m0.2m。仪器仪器 （1 1）液相色谱）液相色谱- -串联质谱仪：配有电喷雾离子源。串联质谱仪：配有电喷雾离子源。（2 2）匀质器。）匀质器。（3 3）旋转蒸发器。）旋转蒸发器。（4 4）液体混匀器。）液体混匀器。（5 5）离心机。）离心机。（6 6）分析天平：感量）

5、分析天平：感量0.1mg0.1mg，0.01g0.01g。（7 7）移液器：）移液器：1ml1ml，2ml2ml。（8 8）鸡心瓶：）鸡心瓶：100ml100ml。（9 9）样品瓶子：）样品瓶子：2ml2ml，带聚四氟乙烯旋盖。，带聚四氟乙烯旋盖。试样的制备与保存试样的制备与保存 （1 1）试样的制备）试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约从全部样品中取出有代表性样品约1kg1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记，在抽样和制样的操作分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记，在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生

6、残留物含量的变化。过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。（2 2）试样保存）试样保存将试样于将试样于-18-18冷冻保存。冷冻保存。测定步骤测定步骤 （1 1）样品前处理）样品前处理称取称取5g5g试样，精确至试样，精确至0.01g0.01g，置于，置于50ml50ml离心管中，加入离心管中，加入20g20g无水硫酸钠和无水硫酸钠和20ml20ml乙腈，均质乙腈，均质2min2min，以，以3000r/min3000r/min离心离心3min3min，上清液倒入，上清液倒入100ml100ml鸡心瓶鸡心瓶中，残渣再加入中，残渣再加入20ml20ml乙腈，重复上述操作一次。合并提取液

7、，向鸡心瓶乙腈，重复上述操作一次。合并提取液，向鸡心瓶中加入中加入10ml10ml异丙醇，用旋转蒸发器于异丙醇，用旋转蒸发器于5050水浴蒸干，准确加入水浴蒸干，准确加入1ml1ml流动流动相和相和1ml1ml正己烷溶解残渣。正己烷溶解残渣。 测定步骤测定步骤 （1 1）样品前处理）样品前处理转移至转移至5ml离心管中，涡旋离心管中，涡旋1min，以，以3000r/min离心离心3min，吸取上层正己，吸取上层正己烷弃去，再加入烷弃去，再加入1ml正己烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液正己烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体。按上输操作步骤制备样品空白提取液。取下层清液，过体。按上

8、输操作步骤制备样品空白提取液。取下层清液，过0.2m滤膜滤膜后，用液相色谱后，用液相色谱-串联质谱仪测定。串联质谱仪测定。测定步骤测定步骤 （1 1）液相色谱条件）液相色谱条件 a a）色谱柱：）色谱柱：LichrospherLichrospher 100RP-18 100RP-18，5m5m，250mm250mm4.6mm4.6mm或相当者。或相当者。b b）流动相：乙腈）流动相：乙腈+0.01mol/L+0.01mol/L乙酸铵溶液（乙酸铵溶液（18+8818+88）。）。c c）流速）流速0.8ml/min0.8ml/min。d d）柱温：）柱温：3535。e e）进样量）进样量40mL

9、40mL。f f）分流比：）分流比：1:31:3。色谱测定色谱测定测定步骤测定步骤 （2 2）质谱条件）质谱条件 a a）离子源：电喷雾离子源。）离子源：电喷雾离子源。b b）扫描方式：正离子扫描。）扫描方式：正离子扫描。a.a. 检测方式：多反应监测。检测方式：多反应监测。b.b. 电喷雾电压：电喷雾电压：5500V5500V。c.c. 气帘气压力：气帘气压力：0.069MPa0.069MPa。色谱测定色谱测定测定步骤测定步骤 （2 2）质谱条件）质谱条件 d. 电喷雾电压：电喷雾电压：5500V。e. 气帘气压力：气帘气压力：0.069MPa。f. 辅助气流速：辅助气流速：6L/min。g

10、. 离子源温度：离子源温度：350。h. 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表1。i. 雾化气压力：雾化气压力：0.076MPa。色谱测定色谱测定中文名称中文名称英文名称英文名称定性离子对（定性离子对（m/zm/z）定量离子对（定量离子对（m/zm/z）碰撞气能量碰撞气能量/V/V去簇电压去簇电压/V/V磺胺醋酰磺胺醋酰SulfacetamideSulfacetamide215/156215/156、215/108215/108215/156215/1561818、28284040、4545磺胺甲噻二唑磺胺甲噻二唑Sulfamethi

11、zoleSulfamethizole271/156271/156、271/107271/107271/156271/1562020、32325050、5050磺胺二甲异噁唑磺胺二甲异噁唑SulfisoxazoleSulfisoxazole268/156268/156、268/113268/113268/156268/1562020、23234545、4545磺胺氯哒嗪磺胺氯哒嗪SulfachloropyridazineSulfachloropyridazine285/156285/156、285/108285/108285/156285/1562323、27275050、5050磺胺嘧啶磺胺嘧

12、啶SulfachloropyridazineSulfachloropyridazine251/156251/156、251/185251/185251/156251/1562323、27275555、4545磺胺甲基异噁唑磺胺甲基异噁唑SulfamethoxazoleSulfamethoxazole254/156254/156、254/147254/147254/156254/1562323、22225050、4545磺胺磺胺-6-6-甲氧嘧啶甲氧嘧啶SulfamonomethoxineSulfamonomethoxine281/156281/156、281/215281/215281/156

13、281/1562525、24246565、5050磺胺噻唑磺胺噻唑SulfamerazineSulfamerazine256/156256/156、256/107256/107256/156256/1562222、32325555、4747磺胺甲基嘧啶磺胺甲基嘧啶SulfamerazineSulfamerazine265/165265/165、265/172265/172265/156265/1562525、24245050、6060磺胺邻二甲氧嘧啶磺胺邻二甲氧嘧啶SulfadoxinSulfadoxin311/156311/156、311/108311/108311/156311/15631

14、31、35357070、5555磺胺吡啶磺胺吡啶SulfapyridineSulfapyridine250/156250/156、250/184250/184250/156250/1562525、25255050、6060磺胺对甲氧嘧啶磺胺对甲氧嘧啶SulfameterSulfameter281/156281/156、281/215281/215281/156281/1562525、25256565、5050磺胺甲氧哒嗪磺胺甲氧哒嗪SulfamethoxypyridazineSulfamethoxypyridazine281/156281/156、281/215281/215281/15628

15、1/1562525、25256565、5050磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶SulfamethazineSulfamethazine279/156279/156、279/204279/204279/156279/1562222、20205555、6060磺胺苯吡唑磺胺苯吡唑SulfaphenazoleSulfaphenazole315/156315/156、315/160315/160315/156315/1563232、35355555、5555磺胺间二甲氧嘧啶磺胺间二甲氧嘧啶SulfadimethoxineSulfadimethoxine311/156311/156、311/218311/218

16、311311、1561563131、27277070、7070表表1 十六种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压十六种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压液相色谱液相色谱- -串联质谱测定串联质谱测定 用混合标准工作溶液分别进样，以工作溶液浓度（用混合标准工作溶液分别进样，以工作溶液浓度（ngng/ml/ml）为）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中十六种磺胺的响应值均应在仪器测定的样品进行定量，样品溶液中十六种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内。线性范围内

17、。 表表2 2 十六种磺胺参考保留时间十六种磺胺参考保留时间药物名称药物名称保留时间保留时间/min/min药物名称药物名称保留时间保留时间/min/min磺胺醋酰磺胺醋酰2.612.61磺胺甲基嘧啶磺胺甲基嘧啶9.939.93磺胺甲噻二唑磺胺甲噻二唑4.544.54磺胺邻二甲氧嘧啶磺胺邻二甲氧嘧啶11.2911.29磺胺二甲异噁唑磺胺二甲异噁唑4.914.91磺胺吡啶磺胺吡啶11.6211.62磺胺氯哒嗪磺胺氯哒嗪6.546.54磺胺对甲氧嘧啶磺胺对甲氧嘧啶12.6612.66磺胺嘧啶磺胺嘧啶5.205.20磺胺甲氧哒嗪磺胺甲氧哒嗪17.2817.28磺胺甲基异噁唑磺胺甲基异噁唑8.418.

18、41磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶17.9517.95磺胺磺胺-6-6-甲氧嘧啶甲氧嘧啶9.489.48磺胺苯吡唑磺胺苯吡唑22.2922.29磺胺噻唑磺胺噻唑9.139.13磺胺间二甲氧嘧啶磺胺间二甲氧嘧啶28.9728.97（六）平行实验（六）平行实验按以上步骤，对同一试样进行平行实验测定。按以上步骤，对同一试样进行平行实验测定。（七）空白实验（七）空白实验除不称取样品外，均按上述步骤进行。除不称取样品外，均按上述步骤进行。（八）结果计算（八）结果计算结果按下式计算：结果按下式计算：测定步骤测定步骤 （六）平行实验（六）平行实验按以上步骤，对同一试样进行平行实验测定。按以上步骤，对同一试样进行平行实验测定。（七）空白实验（七）空白实验除不称取样品外，均按上述步骤进行。除不称取样品外，均按上述步骤进行。（八）结果计算（八）结果计算结果按下式计算：结果按下式计算：测定步骤测定步骤 测定步骤测定步骤 式中：X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（g/kg）。C从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位