面肩肱型肌营养不良症的临床表现与分子遗传学特征分析

1、面肩肱型肌营养不良症的临床表现与分子遗传学特征分析(135个家系研究)FSHD in Chinese population: Advances in Mutation spectrum and phenotypic manifestation20142014年中华医学会神经病学分会神经遗传学组年会年中华医学会神经病学分会神经遗传学组年会Historical development 面肩肱型肌营养不良症-Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy (FSHD)p 1885年, 两位法国医生Louis Landouzy和Joseph Dejerine首先描述，又称

2、 Landouzy-Dejerine肌营养不良症。p 1982年, 荷兰学者Padberg GW系统总结了FSHD的临床症状和体征、实验室检查及疾病预后。p 1991年, 制定了FSHD的临床诊断标准研究开始步入分子生物学时代Landouzy, L.Dejerine, J. Epidemiologyp发病率: 约1/20 000；p继 DMD（Duchenne肌营养不良症）和MD（Myotonic dystrophy）后最常见的遗传性肌病；p常染色体显性遗传, 1/3 新生突变（new mutation）；p外显率: 95%“翼状肩” 肩胛带和上臂肌无力和萎缩全身受累-“鸭步”和“脊柱畸形”口

3、轮匝肌-“鱼嘴”眼轮匝肌-Bells signTypical manifestations面(facio-), 肩胛带(scapulo-)和上臂(humeral) Progression（晚期可能瘫痪）Clinical criteria for the diagnosis p临床表型异质性高家系内和家系间不同患者的起病年龄、临床症状和进展过程差异大；p不典型表现及交叉症状（易误诊为其他神经肌肉病）；p常规实验室检查缺乏特异性.Deficiency of clinical diagnosis推荐：推荐：FSHD确诊需要临床诊断结合分子生物学检测确诊需要临床诊断结合分子生物学检测“Gold sta

4、ndard” for diagnostic proceduresSouthern blot analysis using pulsed field gel electrophoresis (PFGE).正常人正常人EcoRI p13E-11探针区探针区 D4Z4 重复序列（重复序列（3.3kb） EcoRI 4qA/4qBFSHDChromosome 4q35Chromosome 4q354q354q35（110 units） 4qA（ 10 units）（ 38 kb）（ 10-38 kb）“Permissive” background?Genetic backgroundLemmers R

5、J,et al. Neuromuscul Disord. 2012,22(5):463-470.Best practice guideline on genetic diagnostics诊断策略要点：临床典型患者的确定性诊断检测缩短的4q-D4Z4序列是基础；临床不典型患者的排除性诊断甑别出 4qA/4qB位点特异性 SSLP基因型分析；D4Z4的甲基化分析可以辅助诊断.Methods-PFGE & Isotope hybrid system（我们研究所的Gene Navigator 脉冲电泳仪和UVP杂交炉）Complex （复杂、繁琐、技术要求高）Laborious （费力）ti

6、me-consuming （费时）Lemmers RJ,et al. Neuromuscul Disord. 2012,22:463-470.Procedure of molecular analysisEcoRI EcoRI/BlnIXapI放射自显影放射自显影 杂交杂交 p13E-11探针探针32P标记标记 Southern blot10ml 新鲜血样新鲜血样 包埋法提包埋法提DNA 分组限制性酶切分组限制性酶切 PFGE分离分离（40小时）小时）Further analysis DUX4ATTAAApLAMTELDistal D4Z4 repeat4qterAT(AT(T/CT/C)AA

7、A)AAADefine the SSLP & the PLAM SNPMechanism:DUX4 expressionTranscriptionThe genetic report of FSHD patientThe study aims-based on large scale genotype phenotype analysis 典型临床表型 VS. 非典型表型？临床表型 VS. EcoRI fragment ?临床表型 VS. 心肺功能？分子诊断基础之上，分子诊断基础之上，FSHDFSHD临床表型及与分子遗传背景的关系临床表型及与分子遗传背景的关系Patients 2005

8、2014年， 135 unrelated 汉族家系，170 例患者，其中62例家系患病成员 92 男性 & 78 女性 就诊年龄 29.011.5 周岁 (545) 临床表型评估量表Muscle & Nerve August 2010Results-age at onset发病年龄 (years) 平均年龄 18.59.1 ；范围 548 外显率 18 years 70% ；30 years 91% 例数例数14 asymptomatic carriers11 females and 3 males the mean age 40.5410.3(ranging from 21

9、to 56).7.05%(excluded two younger than 30years old) 8.23 %典型典型不典型不典型面肌面肌肩胛带肩胛带/ /上臂肌上臂肌Typital下肢近端下肢近端上肢远端上肢远端下肢远端下肢远端部位部位例数例数 （% %）例数（例数（% %）部位部位18（10.5%）112（65.5%）130（75.5%）其它其它：27 （15.8%）2 （1.2%）10 （5.8%）2 （1.2%）远端受累者：远端受累者：伸肌常见伸肌常见起病方式多为不对称性（占起病方式多为不对称性（占57.5%57.5%）10.5%65.5%15.8%5.8% (62% patie

10、nts)p When the patient was examined in the supine position, there was an upward/downward deflection of the umbilicus on neck flexion.Beevor 征 屈颈时屈颈时平躺时平躺时EcoRI 片段来源分布片段来源分布Familial 62Mosaic 6Sporadic 12Uncertain 55 Results-Eco RI fragment ：平均 18.85.5 kb; 范围 10-36 kbCorrelation of EcoRI fragment with

11、 clinical manifestationsD4Z4D4Z4拷贝数拷贝数(unit)(unit)例数例数发病年龄发病年龄(years)(years)P值值1-34-6 7-1018.24.3648882020.35.6221.53.820.052例例数数Results-EcoRI 片段大小和年龄校正片段大小和年龄校正-CSS评分相关分析评分相关分析男性病人年龄矫正男性病人年龄矫正CS分数与分数与EcoRI片片段大小有统计学意义段大小有统计学意义散发病人相关系数绝对值明显增高，散发病人相关系数绝对值明显增高，提示家系内变异大于家系间变异提示家系内变异大于家系间变异临床严重程度评分与临床严重程

12、度评分与D4Z4拷贝数的关系拷贝数的关系随着拷贝数增加，表型轻的病人比例明显增加，而表型重的病人比例明显下降。随着拷贝数增加，表型轻的病人比例明显增加，而表型重的病人比例明显下降。Results-FSHD病人心电图检测病人心电图检测-心脏评估心脏评估42 例（男28例，女14例）行常规心电图检查，无心血管相关危险因素平均年龄为30.111岁(最小为16岁，最大为 56 岁) 异常心电图：不完全右束支传导阻滞不完全右束支传导阻滞(IRBBB)6例例窦性心律不齐（或并过缓）5例1度房室传导阻滞1例右房增大，右室增大1例早复极心电图2例非特异性室内传导阻滞1例Results-6例不完全性右束传导阻滞

13、例不完全性右束传导阻滞FSHD病人的临床和基因特征病人的临床和基因特征肺功能评估肺功能评估-限制性通气功能障碍限制性通气功能障碍n22 例（男12例，女10例），平均年龄为30.211.2 岁nEcoRI 片段长度均值为19.25.1kb(最小14kb,最大为 28kb). CS评分0.5-2组9例，2例轻度受累CS评分2.5-3.5 组7例， 2例轻度受累CS评分4-4.5组6例, 4 中-重度受累，1例轻度受累Results-肺功能障碍的相关因素分析肺功能障碍的相关因素分析Conclusions90%以上患者发病年龄早于30岁，面肌起病相对早；无症状携带者比率相对低，女性多见；不典型患者比例相对高；患者临床严重程度与EcoRI片段长度（D4Z4缺失程度）等多因素相关；女性患者临床变异性较大，但与EcoRI片段长度无统计学相关，提示女性病人患者表型受到其他表