液相色谱日常维护

1、液相色谱知识 1、基础知识 2、 LC10AVPLC10AVP液相色谱仪键盘操作液相色谱仪键盘操作 3 3、液相色谱日常维护 4、液相色谱故障的诊断与维护 （色谱柱部分） 5、液相色谱日常维护一、色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱二、定义 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同 而进行分离的技术 移动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱液相色谱流程图溶剂输液泵进样器柱温箱检测器数据处理流动相流动相选择注意事项：纯度：采用“ HPLC ”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配溶剂前处理过滤：0.45m或更小孔径滤膜

2、目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。溶剂前处理脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的 气泡 气泡对测定的影响： 1）柱流量不准 2）检测器基线波动 脱气注意点： 1）每天脱气(无在线脱气器时） 2）混合溶剂脱气时间不能过长返回输液泵控制方式： 恒流控制 恒压控制VP系列输液泵：D泵和T泵 D泵：并联式往复泵 T泵：串联式往复泵岛津VP系列输液泵目的 单元 流速范围特性和应用 分析 LC-10ADVP0.001-9.999无脉动，适于半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性， 适于常量分析*所有单元都既可做高压梯

3、度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度返回柱温箱分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性 柱温控制的优点：色谱柱1）柱压低于150kgf/cm22）柱温在40左右，最高使用温度为503）缓冲液PH使用范围为27返回ODS柱的使用注意点：*硅胶在PH为34时稳定性最好*碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。检测器HPLC常用检测器：紫外检测器（包括二极管阵列检测器）示差折光检测器蒸发光检测器检测器原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：比耳定律，AKCL优点：1）对温度和流速不敏感 2）可用于梯度洗提缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器紫外检测

4、器检测器1）采集三维谱图2）峰纯度检验3）光谱库检索4）可以发现单波长检测时未测到的峰二极管阵列检测器的优点：检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样 各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1）对温度变化敏感 2）不能用于梯度检测示差折光检测器示差折光检测器返回LC10AVP液相色谱仪液相色谱仪键键 盘盘 操操 作作LC10ATVP输液泵面板LC10ATVP pump prog.run remote G.E. power pump run purge VP sleep del CE 7 8 9 edit back 4 5 6 conc func 1 2 3 0 . Enter输液泵功能设

5、定0.000mL MAX 200.0 初始屏幕 0.0 kgf MIN 0.0 func0.000mL MAX 200.0 流速 0.0 kgf MIN 0.00.000mL MAX 200.0 最高压力 0.0 kgf MIN 0.00.000mL MAX 200.0 最低压力 0.0 kgf MIN 0.0输液泵辅助功能设定0.000 FILE NUM 选择文件 Select File 090.000 SPROT 设定系统保护 0: Clear 1: Set0.000 MODE CHANG 设定输液方式 Enter to Change0.000 PSET 柱塞杆复位 0: Clear 1:

6、 Set输液泵辅助功能设定0.000 COMP 0.450 压缩系数补偿 Input 0.003.000.000 ZERO ADJ 压力传感器调零 Enter to ZeroAdj0.000 SYS 设定系统参数 Set System Param0.000 LOCAL 设定控制方式0: Remote 1: Local输液泵辅助功能设定0.000 P TIMER 3.0 设定冲洗时间 0.0 9.9 MIN0.000 ADRS 设定系统控制器地址 Input 1 12 , 850.000 PRS-UNIT 设定压力单位 Select Pres unit输液泵VP功能初始屏幕下，按VP键，显示：P

7、RODUCT INFOPress Func or VP产品信息组MAINTENANCEPress Func or VPVP维修信息组VALIDATIONPress Func or VPVP认证功能组CALIBRATIONPress Func or VPVP校正功能组PRODUCT INFOSERIAL NUMBERC2032000000S/W ID: V5.27LC-10ATVPfuncCE显示部件系列号显示ROM版本号MAINTENANCETOTAL OP TIME 208 ( h ) R SEAL DELIVERED 25 / 120 LPART REPLCEMENT P / N: - -

8、 L SEAL DELIVERED 25 / 120 Lfuncfuncfuncfunc累计运行时间右密封圈输液总体积及更换时输液体积左密封圈输液总体积及更换时输液体积部件更换记录MAINTENANCEMAINTENANCE LOGEnter to Display ERROR LOGEnter to DisplayOPERATION LOGEnter to DisplayfuncfuncCE显示维修记录显示错误信息记录显示操作记录VALIDATIONDATE YY-MM-DD 00 - 05 - 12 TIME HH:MM:SS 09 : 10 : 20 PULSE CHECKEnter to

9、 StartMEMORY CHECKEnter to Startfuncfuncfuncfunc显示和输入日期显示和输入时间内存检查脉冲检查FLOW CHECKEnter to StartLPGE TEST PROGCopy to File 1LEAK SENSOR TEST Soak and EnterLEAKAGE TESTEnter to StartfuncfuncfuncCE流速检查低压梯度分析浓度准确性检查漏液检查漏液传感器检查VALIDATIONInput PASSWORD XXXXXFLOW COMP . FACT 0.0LEAK THR 128Act Lv 50 / 255PR

10、ESS COMP . FACT 0.0funcfuncfuncfunc输入口令：00000输入流速补偿系数输入压力传感器补偿系数输入漏液传感器报警阈值CALIBRATIONSEAL REPLACEMENT 120 OP MODE 0: 10Avp 1: 10ACHANGE PASSWORDEnter to ChangeINITIALIZE PARAMEnter to InitfuncfuncfuncCE设置密封圈更换时的输液体积设定操作模式参数初始化更改口令CALIBRATIONSPD10AVP紫外检测器面板SPD10AVP S.V. prog.run remote pol power zer

11、o run mark VP sleep del dual pol CE 7 8 9 Z.Shift edit rsp back 4 5 6 scan shift func 1 2 3 0 . Enter检测器参数设定254 nm 0.000 AU 初始屏幕 D2 0.0100AUFS funcLAMBDA 1 254 设定 测量波长1 Input 190 600LAMBDA 2 254 设定 测量波长2 Input 190 600 （双波长模式）RANGE 0.010 设定记录仪输出端口Input 0 2.56 的量程检测器参数设定SMPL EN 1450 样品池和参比池能量REF EN 14

12、55SCAN FILE 设定光谱扫描文件 Input 0 2SCAN BGN 设定 扫描起始波长 Input 190 599 SCAN END 设定扫描终止波长Input 191 600 检测器参数设定SCAN STEP 设定扫描波长步长 Input 1 5PLOT SPD 设定光谱输出速度1: 1 2: 3 3: 10 nm/sSPC PLOT 输出光谱图 Enter to Plot AUX RANGE 设定积分仪输出端口Input 1 6 的量程 检测器参数设定REC MODE 设定双波长检测时的 Input 0 3 的输出模式LAMP 开/关氘灯0: Off 1: D2D2 TIME 显

13、示氘灯累积使用时间 LINK ADRS 设定系统控制器地址Input 1 12 检测器参数设定LOCAL 设定控制方式0: Remote 1: Local WAVE CHECK 检查波长准确性Enter to StartRT RNG 10 设定比例色谱图范围 Input 2 10000 RT THR 0.0001 设定 比例色谱图阈值Input 0.0001 1 紫外检测器VP功能初始屏幕下，按VP键，显示：PRODUCT INFOPress Func or VP产品信息组MAINTENANCEPress Func or VPVP维修信息组VALIDATIONPress Func or VPV

14、P认证功能组CALIBRATIONPress Func or VPVP校正功能组PRODUCT INFOSERIAL NUMBERC21003400000S/W ID: V5.22SPD - 10AVPfuncCE显示部件系列号显示ROM版本号MAINTENANCETOTAL OP TIME 208 ( h ) D2 LAMP USED 80 / 2000PART REPLCEMENT P / N: - - funcfuncfunc累计运行时间显示氘灯累计使用时间及更换时的使用时间部件更换记录MAINTENANCEMAINTENANCE LOGEnter to Display ERROR LO

15、GEnter to DisplayOPERATION LOGEnter to DisplayfuncfuncCE显示维修记录显示错误信息记录显示操作记录VALIDATIONDATE YY-MM-DD 00 - 03 - 21 TIME HH:MM:SS 09 : 10 : 20 AUTO CHECKEnter to Checkfuncfuncfunc显示和输入日期显示和输入时间内存、波长准确性及光强度检查LEAK SENSOR TEST Soak and Enter漏液传感器检查CEInput PASSWORD XXXXXWAVE CALIB Enter to CalibD2 TIME 200

16、0 Input Alert Lvfuncfuncfuncfunc输入口令：00000波长校正输入D2灯更换时间输入D2灯更换能量CALIBRATIOND2 ENERGY 800 Input Alert LvABS COMP 1.000 Input 0.8 - 1.2LEAK THR 128 Act Lv 50 / 255RNG DISP MODE 0 0: REC 1:ITGfuncfuncfunc设定吸光度补偿系数设定漏液传感器报警阈值CALIBRATION设定吸光度满量程显示 OP MODE 0: 10Avp 1: 10ACHANGE PASSWORDEnter to ChangeINIT

17、IALIZE PARAMEnter to InitfuncfuncCE设定操作模式参数初始化更改口令CALIBRATION液相色谱日常维护维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器日常维护材料：不锈钢烧结，孔径10m故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗吸滤头吸滤头日常维护单向阀单向阀T泵：串联式往复泵D泵：并联式往复泵日常维护单向阀结构单向阀结构球座吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头抛光面宝石球流动相单向阀原理单向阀原理日常维护故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下

18、单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗单向阀单向阀日常维护故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：1）流动相输送量达120L时， 应更换密封圈2）更换前，新密封圈用异丙醇浸泡15 min3）拆卸泵头前，柱塞杆复位 （PSET）柱塞密封圈柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈日常维护故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力 偏高措施：5稀硝酸，超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则堵塞。线路过滤器线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相日常维护操作注意点：操作注意点：1）插针应插到底2）不使用时将针头留在进

19、样器内3）进样应使用液相色谱专用平头进样针4）清洗应使用专用针口清洗器手动进样器手动进样器定子转子针头密封垫弹簧不锈钢套日常维护紫外检测器紫外检测器参比池样品池光线硅光电池板日常维护故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN和REF EN，如两者相差较大，则样品池受污。措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。紫外检测器紫外检测器日常维护更换氘灯更换氘灯（紫外检测器） 判断氘灯能量： 设定220nm波长，检查参比池能量，如能量 低于800，需更换氘灯。 色谱柱的冲洗每种溶剂最少5

20、0ml的量色谱柱的故障诊断与维护色谱柱的故障诊断与维护液相色谱柱部分I. 常见问题常见问题 基线噪音基线噪音可能的原因：可能的原因：流动池脏检 测 器 灯 有 问 题如果是周期性的，则起源于泵的脉冲温度对检测器的影响气泡经过检 测 器Time (min.)基线漂移基线漂移 梯度洗脱 温度不稳定 (示差检测器） 流动相中有污染物 柱中的流动相没有平衡 体系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：鬼鬼 峰峰 鬼峰即使不进样也会出现的峰20% - 100% MeOH没有进样601530150371517问题1- 流动相脏问题2- 样品过量(也可能是回收率太差)峰峰 型型双 峰柱 塌 陷正 常 峰 双

21、峰柱中有死体积 过滤片部分堵塞只有一个双峰组分的共洗脱可能原因：可能原因：样品与溶剂不匹配峰峰 型型所有的峰都展宽柱效降低柱死体积大进样量 / 质量高捻度流动相部分峰展宽前次进样后流出的组分大分子量样品蛋白或聚合物峰展宽样品与流动相不匹配峰峰 型型拖尾峰对称性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：原因：部分峰拖尾二次保留效应残留硅醇基的反应小峰紧跟在大峰的后面流出柱头有污染金属所有峰拖尾额外的柱效应柱损坏不适当的样品量/溶剂峰峰 型型正常峰伸舌峰前伸峰不对称性 0.9可能的原因可能的原因柱过载在大峰前，有小峰流出样品溶剂不适当柱死体积过滤片部分堵塞峰峰 型型原因l

22、样品的吸收比流动相的吸收值低l 当样品组分通过色谱柱时打破了原来的平衡l 用示差检测器时是正常的宽宽 峰峰柱外体积增加* 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管* 保证所有的管路接头都使用正确* 用小体积检测池* 减少进样量I. 不进样时柱压连续升高- 泵密封垫- 流动相有颗粒- 流动相溶解性- 流动相的不稳定性 (聚合)- 形成柱死体积 (与使用条件有关)II. 进样时压力升高- 样品有颗粒- 样品在流动相中不溶- 样品组分与固定相不兼容压力压力I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物）- 键合相流失- 流动相不稳定 (可能性较小)- 溶剂输送系统 (流速变化)II. 所有峰都向高保留值方向漂移- 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少- 柱改变 (可能性较小)- 溶剂输送系统 (流速变化)III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移-流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移)- 柱改变 (键合相或污染)保留值漂移保留值漂移I. 与流动相有关的问题- 使用新鲜的流动相?pH?电导?色谱性能测试II. 与色谱柱有关的问题- 测试新柱- 用标准的测试混合样测试新柱- “清洗” 色谱柱后再测- 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响保留值漂移保留值漂