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文档简介

1、RNA 极为脆弱RNA的大敌是RNaseRNase无处不在 培养液、体液 皮肤表面，唾液飞沫，皮屑 花粉、昆虫 孢子（细菌、真菌）RNase特别难搞定 极难失活，普通高温灭菌无法灭活，变性后可复性 可借助DEPC等化学物质灭活，但DEPC有很大的局限性 致癌性强，挥发，吸入蒸汽即可致癌 不能处理Tris为基础的溶液，而大量RNA实验的溶液都是Tris-HCl / Tris-HEPES系统 DEPC本身和DEPC分解的产物会抑制许多酶反应养成良好的操作习惯做RNA实验时 严禁开窗通风！（可以开门）需强制通风时请打开通风橱电源 操作者请戴口罩，长发飘飘的MM请戴头套 观看实验者可不戴口罩和头套，但

2、需保持一定距离，说话时避免直接朝向实验方向，避免唾液飞沫中RNase污染 实验室里走动慢一点，避免激起过大的气流收集垃圾的容器经常清理和清洗养成良好的操作习惯操作台面的清洁 保持操作台面干净，经常用抹布清洁，可用水和酒精混合液杀菌 重要实验前用专用RNase消除剂喷洒清洁台面和器具表面 喷洒要适量，喷洒时最好戴口罩，因为RNase消除剂对人体还是有一点危害的 严禁对着人喷！养成良好的操作习惯RNA实验所用溶液和器具（如枪头）需要灭菌者，两次高压灭菌即可消除RNase，无需使用致癌的DEPC严禁用手直接接触离心管、反应管等外表面！必须戴手套！养成良好的操作习惯节约手套，但别太节约 至少每4-5小

3、时要换一双手套 如果有大量短时操作需频繁更换手套，可优先使用薄塑料手套Trizol相关操作请在通风橱里进行 Trizol沾染的固体和液体垃圾请收集在通风橱内的专用瓶子内养成良好的操作习惯制胶、跑胶的器具也需要保持干净，防止RNase污染 不要徒手接触 玻璃板和托盘经常用洗涤液浸泡和清洗 制胶过程中所用的小锥形瓶也要保持干净染料的使用后染法染胶 制胶时不加任何染料 照常跑胶，核酸迁移速率会比预染法快约15%别跑过了！ 跑胶完毕，将胶放进紫外灯台 将染料稀释1000-2000倍(0.5-1ul in 1ml buffer/water)均匀涂在胶上 关住灯台的门，暗中染色5分钟 打开紫外灯，观察、照相 完毕后将灯台擦干净预染法后染法干净能带来什么从10个RNA分子即可获得可靠的qRT-PCR结果线性度接近完美y = -1.436ln(x) + 38.778R2 = 0.99941520253035401.0E+011.0E+021.0E+031.0

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