分离分析新技术

1、Tel:(O) E-mail: 蜂胶的SFE纯化流程优于溶剂法一些代表性的大孔吸附树脂大致操作步骤：树脂预处理树脂上柱药液上柱树脂的解吸 树脂的清洗、再生树脂预处理：加甲醇或丙酮浸泡24小时，加热回流洗脱装柱：蒸馏水湿法装柱，乙醇流动清洗，大量蒸馏水清洗药液的上柱吸附：（1）泄漏曲线与吸附容量的考察（2）药液上柱前的预处理（3）上柱工艺条件的选择 树脂自身特性、样品浓度、pH值、吸附柱径高比、上样流速（4）树脂的解吸 树脂的清洗、再生： 无水乙醇或95乙醇洗至无色，大量水洗去醇在天然药物有效成分的提取、纯化领域大有用途：1.许多提取成功的单味中草药，奠定良好的基础2

2、.不断有新型的吸附树脂问世到目前为止,已成功用于黄酮类、皂苷类、生物碱类、酯类、萜类等成分的分离实例：银杏叶提取物 （GBE） 主要有效成分 黄酮苷 萜内酯 溶剂萃取法 24 6 树脂吸附法 Amberlite XAD-7 30 未达标 Duolite-761 达标 达标 ADS-F8 6065 2530 其他中草药：毛冬青根、山楂、葛根、黄芩根、苦荞麦、沙棘等实例：绞股蓝皂苷 研制出强极性吸附树脂ADS-7、S-038 S-038，吸附量达65.5 mg/ml，70乙醇洗脱 人参皂苷 吸附和脱色双重作用 ADS-7 ，70乙醇洗脱，粗品（棕色） 白色或微黄色实例：绞股蓝皂苷 绞股蓝：葫芦科植

3、物绞股蓝的根状茎或全草，多年生草质藤本植物 功效：镇咳、清热解毒有效成分：皂苷、黄酮类、多糖类 “绿色的金子” “第二人参” “人参宝草”提取工艺：绞股蓝干茎叶 热水浸提 浸提除杂 树脂吸附乙醇解吸 脱色 浓缩干燥 粉碎 绞股蓝皂苷粉末7-8倍热水浸提三次调节酸碱性静置除杂DA大孔树脂水洗除杂50%乙醇70%乙醇DB树脂真空干燥80-100目实例：喜树碱 弱碱 AB-8 pH 8，盐浓度(1-2.5)mol/L, 吸附量达160 mg/g 小檗碱 碱性大 水溶性大 10%H2SO4, 10%NaOH, 非极性吸附树脂 小檗碱含量为原生药含量的97%色谱技术： 有效成分的定性与定量工作 开发出疗

4、效好、质量指标明确的中药新药按照分离过程的原理不同分为： 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱1. 亲和色谱1.薄层色谱 操作简单、费用低廉、应用广泛新型薄层色谱法 离心制备薄层色谱 （PCLC）旋转离心、连续洗脱的圆形色谱技术，分离效果优于常规的制备薄层色谱和柱色谱独特的优点：u 对固定相不会造成损坏u 装填容量、分离速度和分离效能得到极大提高实例：龙胆属植物 Sstrictiffora 甲醇提取物 bellidifolin 和 desmethylbellidifolin 离心薄层色谱法 聚酰胺开口柱色谱 30 min. 12hr.2.柱色谱特殊的柱色谱：（1）干柱色谱干法装填上样洗脱

5、推出、切割谱带溶剂萃取特点：溶剂消耗很少，操作迅速（1530min）（2）真空液相色谱 (VLC)抽真空装柱低极性溶剂冲柱上样洗脱收集馏分、抽干特点：操作简便、处理量大（一次可达30g）3.压力液相色谱 (PLC)闪蒸色谱 (约0.2 MPa) 价格低廉、操作方便低压液相色谱 ( 2.0 MPa) 分离效率高、应用范围广实例：银杏内酯A、银杏内酯B、白果内酯的分离纯化硅胶H柱 (10-40 m) 流动相：乙酸乙酯石油醚（8：2）(5) 超临界流体色谱 介于液相色谱和气相色谱之间的色谱方法特点：分离速度快、产品易回收、应用范围广、有可能替代正相HPLC4.离子交换色谱固定相：离子交换树脂 可再生

6、性和重复使用性交换功能基团：阳离子和阴离子形态：凝胶型（水溶胀）和大孔型（永久性微孔）特点：使用方便、成本低廉、重复使用性好、分离速度快应用范围：生物碱、糖类、氨基酸、蛋白质以及核酸实例：总生物碱制备生药粗粉0.1%HCl渗漉强酸性阳离子交换树脂蒸馏水洗树脂倒出晾干10%NaOH碱化树脂氯仿回流干燥重结晶 5.逆流色谱 (CCC)以液相物质为固定相的液液色谱离心逆流色谱 (CCCC)：（1）分离物质的极性范围很宽（2）没有拖尾现象（3）样品定量回收实例：银杏叶中的黄酮糖苷 固定相：水，流动相：乙酸乙酯乙酸乙酯（异丁醇）乙酸乙酯/异丁醇 (6:4)高速逆流色谱 (HSCCC)6.其他形式色谱体积

7、排阻色谱 分子筛机理凝胶过滤色谱凝胶渗透色谱优点：操作简单、快捷、流动相选择宽泛(2)亲和色谱 大多被利用来分离纯化生物大分子载体：琼脂糖凝胶、交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶(3)疏水作用色谱 主要分离对象为蛋白质特点：分离条件温和，易于保持生物蛋白质的活性7.多种色谱方法的联用最初分离步骤：如闪蒸色谱、逆流色谱或凝胶过滤色谱等最后的纯化过程：如HPLC实例：生物碱 液相色谱法排阻色谱法实例：水飞蓟黄酮的提取 水飞蓟：也叫乳蓟，菊科植物，一年或两年生草本 功效：抗肝脏中毒和保护肝细胞有效成分：水飞蓟素提取工艺：水飞蓟种子 去油种子饼 去油种子渣 过滤 提取液 浓缩 总黄酮油液 总黄酮 溶解 上柱 洗脱 浓缩干燥 水飞蓟素机械榨油粉碎提取4次每次4h分离植物油丙酮硅胶柱黄酮类、酚酸类 乙腈水酸系统皂苷类 乙腈水系统生物碱类 乙腈三乙胺系统danshensuprotocatechuic acidprotocatechuic aldehydr