山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验

1、山东省单县鸡大肠杆菌病病山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验原的分离与鉴定及药敏试验 指导老师：唐建华指导老师：唐建华 （副教授）（副教授）姓名：王亚班级：07级动物医学系1班论文的结构和主要内容论文的结构和主要内容第一部分第一部分 背景及意义背景及意义第二部分第二部分 技术路线技术路线第三部分第三部分 实验结果实验结果第四部分第四部分 讨论与分析讨论与分析第五部分第五部分 结论结论课题的背景及意义课题的背景及意义l 背景背景 近几年随着单县养殖业迅速发展和集约化程度的大大提高，大近几年随着单县养殖业迅速发展和集约化程度的大大提高，大肠杆菌病流行势头愈加迅速。肠杆菌病流行势头愈加迅

2、速。 大肠杆菌病是在世界范围内影响养大肠杆菌病是在世界范围内影响养殖业发展的主要细菌病之一，殖业发展的主要细菌病之一， 常招致巨大的经济损失，有效防治常招致巨大的经济损失，有效防治大肠杆菌病一直是养殖业的一项重要课题。大肠杆菌病一直是养殖业的一项重要课题。l 意义意义 从部分养鸡场分离出的细菌进行分离培养，通过药敏试验筛选从部分养鸡场分离出的细菌进行分离培养，通过药敏试验筛选出敏感药物，为山东省单县治疗与预防鸡大肠杆菌病提供理论依出敏感药物，为山东省单县治疗与预防鸡大肠杆菌病提供理论依据和实际应用参数。据和实际应用参数。技术路线技术路线2.1 病理剖检病理剖检 对送检的对送检的35只病死鸡进行

3、了病理剖检及大体病变的观察。只病死鸡进行了病理剖检及大体病变的观察。2.2分离与鉴定分离与鉴定 样品样品 在各种培养基上划线分离在各种培养基上划线分离(置置37培养培养24h) 菌落形成菌落形成 挑取菌落染色镜检挑取菌落染色镜检 纯培养纯培养 培养特性检查培养特性检查 染色镜检染色镜检 生化试验生化试验 致病力测定致病力测定 药敏试验药敏试验技术路线技术路线2.2.1病料采集病料采集 采集六大鸡场病死鸡各一只，无菌取心脏和肝脏。采集六大鸡场病死鸡各一只，无菌取心脏和肝脏。 2.2.2分离培养分离培养 以无菌操作的方法，将采取的病料，分别接种在普通以无菌操作的方法，将采取的病料，分别接种在普通琼

4、脂平板、麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂琼脂平板、麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂2.2.3镜检镜检 挑取光滑、砖红色的单个菌落涂片，革兰氏染色镜检，挑取光滑、砖红色的单个菌落涂片，革兰氏染色镜检，观察记录菌体形态和染色特征。观察记录菌体形态和染色特征。2.2.4生化实验生化实验 将各株细菌分别接种到用于鉴定的生化反应管中将各株细菌分别接种到用于鉴定的生化反应管中2.2.5致病性试验致病性试验 取健康小白鼠取健康小白鼠6只，只，A组组3只，腹腔接种营养肉汤菌液；只，腹腔接种营养肉汤菌液；B组组3只，腹腔接种等量的灭菌生理盐水作对照组；取只，腹腔接种等量的灭菌生理盐水作对照组；取6只只7日龄雏鸡，日龄雏鸡，健康

5、，也分为健康，也分为C、D两组，与小白鼠同样的方法，分别隔离饲养观察。两组，与小白鼠同样的方法，分别隔离饲养观察。技术路线技术路线2.2.6药敏试验药敏试验 选取不同地区的分离株选取不同地区的分离株6株进行药敏试验。株进行药敏试验。在无菌条件下将培养在无菌条件下将培养24h的肉汤培养物，用灭菌生理盐水的肉汤培养物，用灭菌生理盐水作作10倍稀释，取倍稀释，取0.2mL滴加在普通琼脂平板培养基上，用滴加在普通琼脂平板培养基上，用灭菌棒涂匀，平板置室温下干燥灭菌棒涂匀，平板置室温下干燥35min，用无菌镊子将，用无菌镊子将卡那霉素、新霉素、庆大霉素、呋喃妥因、四环素、链霉卡那霉素、新霉素、庆大霉素、

6、呋喃妥因、四环素、链霉素素6种药物的含药纸片紧贴于琼脂表面，进行观察种药物的含药纸片紧贴于琼脂表面，进行观察结果结果3.1分离培养：麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、分离培养：麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为直径为1.52.5毫米的小菌落（见图毫米的小菌落（见图1） 伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落 （见图（见图2） 图图1 图图23.结果结果3.2 形态学观察形态学观察 经镜检可见到革兰氏阴性菌，两端钝圆，有长约经镜检可见到革兰氏阴性菌，两端钝圆，有长约1.53.O微米的微米的短小杆菌，偶

7、有短小杆菌，偶有23个菌体相连，无芽孢。（见图个菌体相连，无芽孢。（见图3） 图图33.结果结果3.3生化鉴定生化鉴定 将分离到的菌株，经生化试验鉴定，分解葡萄糖、麦芽糖、甘将分离到的菌株，经生化试验鉴定，分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，不分解蔗糖露醇产酸产气，不分解蔗糖,MR试验呈阳性，试验呈阳性，VP试验为阴性，吲哚试验阳性，试验为阴性，吲哚试验阳性，硝酸盐试验阳性，枸橼酸盐试验阴性，硫化氰试验阴性。此结果符合大肠杆硝酸盐试验阳性，枸橼酸盐试验阴性，硫化氰试验阴性。此结果符合大肠杆菌的特征，见表菌的特征，见表1： 生化试剂生化试剂乳糖 构椽酸盐 葡萄糖 VP试验 甘露醇 靛基质 +麦芽

8、糖 MR试验 +蔗糖 硫化氢 阿拉伯糖 尿素酶 山梨醇 吲哚 +硝酸盐 +课题的背景及意义课题的背景及意义3.4 致病性实验致病性实验 小白鼠试验结果：接种小白鼠试验结果：接种36h内内A组小白鼠全部死亡，剖组小白鼠全部死亡，剖检可见肝肿大、表现出点状出血和灰白色坏死灶，脾脏瘀检可见肝肿大、表现出点状出血和灰白色坏死灶，脾脏瘀血，肺脏出血等明显病理变化，从死亡小白鼠的心、肝、血，肺脏出血等明显病理变化，从死亡小白鼠的心、肝、脾等病料中均能回收到接种菌；脾等病料中均能回收到接种菌；B组小白鼠饲养组小白鼠饲养1周后全周后全部存活，剖检无病理变化。部存活，剖检无病理变化。 雏鸡试验结果：接种雏鸡试验

9、结果：接种1周后，周后，C组雏鸡全部死亡，用死组雏鸡全部死亡，用死鸡的心血、肝、脾接种于普通营养琼脂培养基上，经鸡的心血、肝、脾接种于普通营养琼脂培养基上，经37培养培养24h后，有菌落生长，革兰氏染色及生化化鉴定表明：后，有菌落生长，革兰氏染色及生化化鉴定表明：此菌与接种菌为同种细菌；此菌与接种菌为同种细菌；D组雏鸡则正常。组雏鸡则正常。 动物试验结果表明：此次分离出的细菌对小白鼠和雏动物试验结果表明：此次分离出的细菌对小白鼠和雏鸡均有较强的致病性。鸡均有较强的致病性。3.结果3.5药敏试验药敏试验 卡那霉素、新霉素、庆大霉素等药物为高度敏感；呋喃卡那霉素、新霉素、庆大霉素等药物为高度敏感；

10、呋喃妥因、四环素等药物为中度敏感；链霉素不敏感。见表妥因、四环素等药物为中度敏感；链霉素不敏感。见表2： 表2耐药性实验结果统计药敏纸片抑菌圈直径mm1号菌株2号菌株3号菌株4号菌株5号菌株6号菌株呋喃妥因109111098卡那霉素222020172121庆大霉素181919202019四环素131012101114新霉素222123202021链霉素7997873.讨论与分析讨论与分析 防治鸡大肠杆菌病应改善鸡舍卫生条件，减少发病防治鸡大肠杆菌病应改善鸡舍卫生条件，减少发病率。良好的环境对于有效地控制大肠杆菌感染及泛滥十分率。良好的环境对于有效地控制大肠杆菌感染及泛滥十分重要，对此，可以采取

11、以下措施：重要，对此，可以采取以下措施： 1. 注意种蛋卫生注意种蛋卫生 2加强卫生管理加强卫生管理 3适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵抗力抗力 4免疫预防接种免疫预防接种5.结论结论 本试验从可疑病鸡分离到可疑菌经形态学及培养本试验从可疑病鸡分离到可疑菌经形态学及培养条件观察、生理生化实验分析鉴定，鉴定为鸡大条件观察、生理生化实验分析鉴定，鉴定为鸡大肠杆菌的感染，由于条件不足没做大肠杆菌的血肠杆菌的感染，由于条件不足没做大肠杆菌的血清型鉴定。清型鉴定。 根据药敏试验结果，本试验中，可以看出鸡大肠根据药敏试验结果，本试验中，可以看出鸡大肠杆菌对卡那霉

12、素、庆大霉素、新霉素等药物高度杆菌对卡那霉素、庆大霉素、新霉素等药物高度敏感；对四环素、呋喃妥因等药物中度敏感；对敏感；对四环素、呋喃妥因等药物中度敏感；对链霉素产生耐药性链霉素产生耐药性表明该鸡场出现了耐药的致表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌。病性大肠杆菌。致谢致谢 从论文选题到实验过程，从写稿到反复修改，期间经历从论文选题到实验过程，从写稿到反复修改，期间经历了喜悦、聒噪、痛苦和彷徨，在写作论文的过程中心情是如此了喜悦、聒噪、痛苦和彷徨，在写作论文的过程中心情是如此复杂。如今，伴随着这篇毕业论文的最终成稿，复杂的心情烟复杂。如今，伴随着这篇毕业论文的最终成稿，复杂的心情烟消云散。在这里首先要感谢我的导师唐建华老师。唐老师平日消云散。在这里首先要感谢我的导师唐建华老师。唐老师平日里工作繁多，但他始终认真负责地给予我深刻而细致地指导，里工作繁多，但他始终认真负责地给予我深刻而细致地指导，帮助我开拓研究思路，精心点拨、热忱鼓励。正是老师的无私帮助我开拓研究思路，精心点拨、热忱鼓励。正是老