紫外线杀菌作用和脓杆菌分离培养

1、医学微生物学实验三医学微生物学实验三第三次实验第三次实验安徽医科大学微生物学教研室安徽医科大学微生物学教研室2012.03 合肥合肥 医学微生物学医学微生物学实验三医学微生物学实验三实 验 三(一一)示教示教1、多媒体、多媒体噬菌体溶菌现象噬菌体溶菌现象炭疽芽胞杆菌串珠实验炭疽芽胞杆菌串珠实验2、模型、模型:变形杆菌迁徙生长现象变形杆菌迁徙生长现象医学微生物学实验三医学微生物学实验三(二二)操作操作1、紫外线杀菌作用、紫外线杀菌作用：菌种为金葡菌和大肠埃希菌：菌种为金葡菌和大肠埃希菌 (两人一碟两人一碟,四人一组四人一组)2、脓标本的分离培养、脓标本的分离培养(一一):混合金葡菌和大肠埃希混合

2、金葡菌和大肠埃希菌标本在普通培养基上菌标本在普通培养基上四区划线四区划线分离单菌落并做革分离单菌落并做革兰染色兰染色 实 验 三医学微生物学实验三医学微生物学实验三噬菌体溶菌现象示教 噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三迁徙状生长现象示教菌种：变形杆菌菌种：变形杆菌 变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长,形成以菌接种部位为中心的厚薄交替,同心圆型的层层波状菌苔,这种现象称为迁徙生长现象。 如培养在含0.1石碳酸培养基上

3、，细菌不能产生鞭毛，没有迁徙现象而呈现单个菌落。医学微生物学实验三医学微生物学实验三丛集样丛集样呈点状呈点状医学微生物学实验三医学微生物学实验三 串珠试验示教 菌种：炭疽杆菌菌种：炭疽杆菌 炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽孢杆菌属，菌体粗大，两端平截或凹陷，是致病菌中最大的细菌。排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐，呈卷发状。能引起羊、牛、马等动物及人类的人畜共患急性、热性、败血性传染病。表现为脾脏显著肿大；皮下及浆膜下结缔组织出血性浸润；血液凝固不良，呈煤焦油样。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作

4、者易受感染。 利用青霉素处理炭疽杆菌，可以破坏细菌的细胞壁中的肽聚糖，所以造成细菌内部的渗透压大，造成细菌膨胀变圆，呈串珠状排列。此现象是炭疽芽孢杆菌所特有的，具有鉴别意义。医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三菌种：菌种：金葡菌、大肠埃希菌金葡菌、大肠埃希菌（二人一碟、四人一组）（二人一碟、四人一组）方法：方法：密集划线密集划线步骤步骤：用接种环用接种环（无菌）（无菌）取细菌培养物在无菌的取细菌培养物在无菌的普通琼脂平板上做普通琼脂平板上做密集划线后置于紫外灯下，将密集划线后置于紫外灯下，将皿盖盖一皿盖盖一 半，接受紫外线

5、照射半，接受紫外线照射30min；然后倒置；然后倒置温箱培养温箱培养1824h后，观察结果后，观察结果。紫外线杀菌作用操作注意事项注意事项： 1 1、无菌操作、无菌操作 2 2、密集划线使细菌充分较均匀地分散在培养基表面、密集划线使细菌充分较均匀地分散在培养基表面 3 3、在平皿背面作好标记、在平皿背面作好标记（标本名称，姓名，日期，班（标本名称，姓名，日期，班级级) )，再进行紫外线照射和培养，再进行紫外线照射和培养 . 12341图示图示医学微生物学实验三医学微生物学实验三脓标本的分离培养（一） 医学微生物学实验三医学微生物学实验三实验目的实验目的 1、掌握细菌分离培养的方法、掌握细菌分离

6、培养的方法 2、掌握细菌单个菌落的观察、掌握细菌单个菌落的观察 3、熟悉混合标本的分离鉴定程序、熟悉混合标本的分离鉴定程序医学微生物学实验三医学微生物学实验三实验原理实验原理n将待检材料进行分离培养，常用的分离接种法是将待检材料进行分离培养，常用的分离接种法是琼脂板分区划线琼脂板分区划线法法，是借划线将混杂的细菌在琼脂平板上分开来，使个别的细菌是借划线将混杂的细菌在琼脂平板上分开来，使个别的细菌能能固定在某一点固定在某一点，经培养繁殖后形成，经培养繁殖后形成单个菌落单个菌落，以达到分离获得，以达到分离获得纯种细菌，再进一步鉴定的目的。纯种细菌，再进一步鉴定的目的。今天实验主要使用的是分区划今天

7、实验主要使用的是分区划线法中的四区划线法。线法中的四区划线法。医学微生物学实验三医学微生物学实验三 1、脓标本、脓标本 2、培养基（普通琼脂平皿），革兰染色液一套、培养基（普通琼脂平皿），革兰染色液一套 3、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯等、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯等实验材料实验材料医学微生物学实验三医学微生物学实验三 1 1，四区划线：，四区划线：脓标本脓标本 接种环接种环烧灼灭菌烧灼灭菌后取标本涂布与平板后取标本涂布与平板1 1区内作数次区内作数次Z形形划线，再在划线，再在2 2、3 3、4 4区依次区依次Z形形划线（注意：划线（注意：划完一区划完一区后应烧掉环上的残菌后应烧掉环

8、上的残菌 ） 。 每一区的划线与上区交叉接触，每区每一区的划线与上区交叉接触，每区保持一定距离保持一定距离，密而不重密而不重，如此后一区菌量少于前一区，逐渐减少以至划，如此后一区菌量少于前一区，逐渐减少以至划线上的细菌呈单个菌分布。线上的细菌呈单个菌分布。3737温箱温箱倒置培养倒置培养18182424小时。小时。并作革兰染色观察混合细菌的种类、染色性和形态。并作革兰染色观察混合细菌的种类、染色性和形态。实验方法实验方法医学微生物学实验三医学微生物学实验三1234医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三医学微生物学实验三1、整个操作在酒精灯火焰边进行。、整个操作在酒精灯火焰边进行。2、接种环和培养皿呈、接种环和培养皿呈3045度角度角，用力均匀用力均匀，不要，不要 划破平皿。划破平皿。3、倒置培养倒置培养，37 温箱培养温箱培养1824h。4、在皿底做上、在皿底做上标记标记(标本名称，姓名，班级，日期）标本名称，姓名，班级，日期） （通常为（通常为1,2区）区）。注意事项注意事项医学微生物学实验三医学微生物学实验三2，革兰染色：脓标本，观察混合细菌的种类、染色性和观察混合细菌的种类、染色性和形态形态注意：上次革兰染色实验所使用的是菌苔，所以在涂片前需加生理盐水，而