仪器组成及作用

1、第二节 HPLCHPLC仪器HPLCHPLC仪器包括：仪器包括：高压输液装置高压输液装置 进样系统进样系统 分离系统分离系统 检测系统检测系统 此外还配有梯度淋洗、自动进样和数据处理装置。此外还配有梯度淋洗、自动进样和数据处理装置。梯梯度淋洗度淋洗1. 1. 高压输液系统高压输液系统1 1）贮液器）贮液器：2 2）脱气）脱气：3 3）高压泵）高压泵：1-2L1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器的玻璃瓶，配有溶剂过滤器( (NiNi合金合金) )，其孔很小约其孔很小约2 2 m m，可防止颗粒物进入泵内。，可防止颗粒物进入泵内。超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的超声波脱气或真空加热脱气。溶

2、剂通过脱气器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。要求要求：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。输液泵种类：恒流型和恒压型。输液泵种类：恒流型和恒压型。4 4）梯度淋洗装置）梯度淋洗装置： 往复式柱塞泵（恒流型）往复式柱塞泵（恒流型） 气动放大泵（恒压型）气动放大泵（恒压型）4 4）梯度淋洗装置）梯度淋洗装置： 作用是在分离过程中，按一定的程序连续改作用是在分离过程中，按一定的程序连续改变流动相中多种不同性质溶剂的配比，以改变流动相变流动相中多种不同性质溶剂的配比，以改变

3、流动相的极性、离子强度或酸度等，从而提高试样的分离效的极性、离子强度或酸度等，从而提高试样的分离效率，缩短分析时间，使色谱峰形得到改善，提高测定率，缩短分析时间，使色谱峰形得到改善，提高测定的灵敏度和定量的准确度。的灵敏度和定量的准确度。2. 2. 进样系统进样系统1 1）隔膜注射进样隔膜注射进样：使用微量注射器进样。装置简单、使用微量注射器进样。装置简单、死体积小。但死体积小。但不能承受高压、进样不能承受高压、进样量小且重现性差量小且重现性差。2 2）高压进样阀高压进样阀：装入样品装入样品出口出口进样进样采样环采样环泵入溶剂泵入溶剂进色谱柱进色谱柱目前最常用的为六通阀。由于进样量可由样品目前

4、最常用的为六通阀。由于进样量可由样品管控制，因此管控制，因此进样准确，重复性好进样准确，重复性好。3. 3. 色谱柱色谱柱1 1）要求要求：内壁光滑的优质不锈钢柱，柱接头的死体积尽可内壁光滑的优质不锈钢柱，柱接头的死体积尽可能小。柱长多为能小。柱长多为1530cm1530cm，内径为，内径为45mm45mm；2 2）柱的填充柱的填充：主要采用匀浆法（湿法）。主要采用匀浆法（湿法）。填充方法：填充方法： 填充时，将制作好的匀浆液，用流动相充满色谱柱及填充时，将制作好的匀浆液，用流动相充满色谱柱及其延长管中，然后将匀浆液倒入匀浆填充器，在较高压力下迅其延长管中，然后将匀浆液倒入匀浆填充器，在较高压

5、力下迅速将其注入色谱柱内。要求填充速度快（防凝聚、沉降或结速将其注入色谱柱内。要求填充速度快（防凝聚、沉降或结块）、且无空气进入（影响填充均匀性）。块）、且无空气进入（影响填充均匀性）。4. 4. 检测器检测器1 1）紫外光度检测器）紫外光度检测器 原理：原理： 依据被分析试样组分对特定紫外光的选择依据被分析试样组分对特定紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。 紫外光度检测器光路图紫外光度检测器光路图1 1、高灵敏度，最小检测量、高灵敏度，最小检测量1010-9-9gmLgmL-1-1；2 2、对流速和温度的波动不敏感，可用于梯度洗

6、脱；、对流速和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱；3 3、结构简单；、结构简单；4 4、不适用于对紫外完全不吸收的试样，溶剂的选择、不适用于对紫外完全不吸收的试样，溶剂的选择 受限制。受限制。特点：特点：光电二极管阵列检测器（光电二极管阵列检测器（PDAPDA或或DADDAD）波长波长可的松可的松氟美松氟美松皮质酮皮质酮快速扫描快速扫描光电二极管阵列（光电二极管阵列（PDAPDA）检测所获得的三维色谱）检测所获得的三维色谱- -光谱图光谱图2 2）荧光检测器）荧光检测器 根据某些物质受激后能产生一定强度荧光的性质根据某些物质受激后能产生一定强度荧光的性质，可制成灵敏度极高的荧光检测器。它是一种可

7、制成灵敏度极高的荧光检测器。它是一种选择性很强的检测选择性很强的检测器器，其灵敏度比，其灵敏度比UVUV检测器高检测器高2323个数量级。个数量级。 适合于具有对称共轭结构的有机芳环分子，如稠环适合于具有对称共轭结构的有机芳环分子，如稠环芳烃、甾族化合物、酶、氨基酸、维生素、色素、蛋白质等荧芳烃、甾族化合物、酶、氨基酸、维生素、色素、蛋白质等荧光物质的测定。光物质的测定。 原理原理：利用两束相同角度的光照射溶剂相和样品利用两束相同角度的光照射溶剂相和样品+ +溶剂相，利用二者对光的溶剂相，利用二者对光的折射率不同，其中一束（通常是通过样品折射率不同，其中一束（通常是通过样品+ +溶剂相）光因为

8、发生偏转造成两束溶剂相）光因为发生偏转造成两束光的强度差发生变化，将此差示信号放大并记录，该信号代表样品的浓度。光的强度差发生变化，将此差示信号放大并记录，该信号代表样品的浓度。光源光源调零调零光学零光学零参比参比样品样品平面镜平面镜透镜透镜光电转换光电转换记录仪记录仪放大器放大器遮光板遮光板3 3）示差折光检测器）示差折光检测器特点：特点：为为通用型浓度检测器通用型浓度检测器，灵敏度为，灵敏度为1010-7-7g g mLmL1 1；但对温度变化敏感，且但对温度变化敏感，且不适于梯度淋洗不适于梯度淋洗。原理：原理：基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质的含量。阻的倒数）变化来测量电离物质的含量。 对温度变化敏感。对温度变化敏感。4 4）电导检测器）电导检测器属于电化学检测器，主要用于离子色谱的检测。属于电化学检测器，主要用于离子色谱的检测。5 5）蒸发光散射检测器）蒸发光散射检测器原理：原理：见书本见书本P91P91特点：特点：通用型检测器通用型检测器与示差折光检测器相比，灵敏度高与示差折光检测器相比，灵敏度高响应信号不受溶剂和温度的影响，可用于响应信号不