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文档简介
1、精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -课题 1DNA 的粗提取与鉴定一、试验原理提取生物大分子的基本思路是 选用肯定的物理或化学方法分别具有不同物理或化学性质的生物大分子 ;对于 DNA 的粗提取而言,就是要利用 DNA与 RNA 、蛋白质和脂质 等在物理和化学性质方面的差异,提取 DNA ,去除其他成分;1 DNA 的溶解性DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同,利用这一特点,挑选适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分别目的;此外, DNA不溶于 酒精 溶液,但是细胞中的某些蛋白质就溶于酒精;利用
2、这一原理,可以将DNA 与蛋白质进一步的分别;2 DNA 对酶、高温顺洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解 蛋白质 ,但是对 DNA 没有影响;大多数蛋白质不能忍耐 6080oC 的高温,而 DNA 在 80oC 以上才会变性;洗涤剂能够瓦解 细胞膜 ,但对 DNA 没有影响;3 DNA 的鉴定在沸水浴 条件下, DNA 遇二苯胺 会被染成 蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定 DNA 的试剂;二、试验设计1试验材料的选取凡是含有 DNA的生物材料都可以考虑,但是使用DNA含量相第 1 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 1 页,共 26 页 - - - - - - -
3、 - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -对较高 的生物组织,胜利的可能性更大;2破裂细胞,猎取含DNA 的滤液动物细胞的破裂比较简洁,以鸡血细胞为例, 在鸡血细胞液中加入肯定量的 蒸馏水 ,同时用玻璃棒 搅拌,过滤后收集滤液即可; 假如试验材料是植物细胞, 需要先用 洗涤剂 溶解细胞膜; 例如,提取洋葱的 DNA 时,在切碎的洋葱中加入肯定的洗涤剂 和食盐 ,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液;留意:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血
4、细胞的破裂 细胞膜和核膜的破裂 ,从而释放出 DNA;加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放; 食盐的主要成分是NaCl,有利于 DNA的溶解;假如研磨不充分,会对试验结果产生怎样的影响.研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全,提取的 DNA量变少,影响试验结果,导致看不到丝状沉淀物、 用二苯胺鉴定不显示蓝色等;此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质;3去除滤液中的杂质方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl 溶液中溶解度不同;方第 2 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - -
5、 -第 2 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA ;方案三的原理是蛋白质和 DNA的变性温度不同;留意:为什么反复地溶解与析出DNA ,能够去除杂质?用高盐浓度的溶液溶解 DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使 DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质;因此,通过反复溶解与析出 DNA,就能够除去与 DNA溶解度不同的多种杂质;方案二与方案三的原理有什么不同?方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的 DNA与蛋白质分开;方案三利用的是 DNA和
6、蛋白质对高温耐受性的不同, 从而使蛋白质变性,与 DNA分别;4DNA 的析出与鉴定将处理后的溶液过滤 , 加入与滤液体积 相等、冷却的 酒精溶液 , 静置 23min,溶液中会显现 白色丝状物 ,这就是粗提取的DNA ;用玻璃棒 沿一个方向 搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分;取两支 20ml 的试管,各加入物质的量浓度为2mol/L的 NaCl 溶液 5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解;然后,向两支试管中各加入4ml 的二苯胺试剂 ;混合匀称后,将试管置于 沸水 中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色 的变化,看看溶解有DNA 的溶液是否变 蓝
7、;三、试验步骤以洋葱为试验材料1称取 30 克已切碎的洋葱,放入研钵中,加入少量石英砂助研,倒入 10mL 2mol/L 的氯化钠溶液,充分研磨;第 3 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 3 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -洋葱含有挥发性刺激物,有效削减刺激,才能使试验顺当进行;上课前, 老师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿,使其凉透但又不能结冰;或将洋葱切成几大块, 放入清水泡一会儿,让其挥发性刺激物溶于水,可以减轻刺激;然后将洋葱切碎备用;研磨的目的主要
8、是使洋葱细胞破裂, 使 DNA溶于 2mol/L 的氯化钠溶液, 没必要将洋葱研成粥糊状,后者既铺张时间又影响试验成效;研磨时,切忌使用搅拌器(榨汁机);使用搅拌器虽可以提高研磨效率,但搅拌器将洋葱切成 极细小的颗粒, 无法通过过滤将洋葱颗粒剔除;只能将酒精直接倒入滤液中,很多洋葱小颗粒由于轻会漂浮起来,DNA藏在其中,无法辨论;同学看不到白色纤维状粘稠物的DNA ; 2研磨后,用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中,得到滤液;3向滤液中加入95%的酒精溶液 20mL,沿烧杯壁慢慢倒入,不要震惊或搅拌;此时,烧杯中的液体分为上、下两层,下层较浑浊,上层澄清, 很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出
9、,用玻璃棒可将其轻轻卷起;这就是记录生命遗传信息的重要物质DNA;DNA析出的过程中,切忌震惊和搅拌(不震惊易于分层,我们就能很简洁观看到上清液中的丝状物; 搅拌会使特别松软的DNA断裂成小段, 不易取出);假如用玻璃棒 DNA不易卷起,可改用表面打毛的牙签,DNA提取物就缠绕在牙签上了;4鉴定:取两支试管,编为1、2 号,各加入 2mol/L的氯化钠溶液2mL,向 1 号试管中加入一些白色纤维状物,振荡使其溶解,然后向第 4 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 4 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 -
10、 - - - - - - - - - - -两支试管中各加入2mL二苯胺试剂,沸水浴加热5 分钟;四、留意事项1以血液为试验材料时, 每 100ml 血液中需要加入3g 柠檬酸钠防止血液凝固;2加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和 ,否就简洁产生大量的泡沫, 不利于后续步骤地操作;加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓 ,以免 DNA 分子的断裂 ,导致 DNA分子不能形成絮状沉淀;3二苯胺试剂要 现配现用 ,否就会影响鉴定的成效;4 DNA 的溶解度与 NaCl 溶液浓度的关系:当 NaCl 溶液浓度低于 0.14mol/L 时,随浓度的上升, DNA 的溶解度降低;当 NaCl 溶液浓度高于 0.
11、14mol/L 时,随浓度上升, DNA 的溶解度上升;5盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器;鸡血细胞破裂以后释放出的DNA ,简洁被玻璃容器吸附, 由于细胞内 DNA 的含量原来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取 到的 DNA 就会更少;因此,试验过程中最好使用塑料高中生物选修 3 一、基因工程 1、( a)基因工程的产生(一)基因工程的概念基因工程是指依据人们的愿望,进行严格的设计, 通过体外 DNA重组和转基因技术, 给予生物以 新的遗传特性 ,制造出 更符合人们需要的第 5 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 5 页,共 26 页 -
12、- - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -新的生物类型和生物产品;基因工程是在 DNA分子水平 上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术 ; 2、( a)基因工程的原理及技术原理:基因重组技术:(一)基因工程的基本工具1. “分子手术刀” 限制性核酸内切酶(限制酶)( 1)来源:主要是从 原核生物 中分别纯化出来的;( 2)功能:能够识别双链DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列,并且使每一条链中 特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 断开,因此具有专一 性;( 3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端
13、和平末端 ;2. “分子缝合针” DNA连接酶(1) 两种 DNA连接酶( E·coliDNA 连接酶和 T4 DNA连接酶)的比较:相同点:都缝合 磷酸二酯 键;区分: E· coliDNA 连接酶来源于 T4 噬菌体 ,只能将双链 DNA片段互补的 黏性末端 之间的磷酸二酯键连接起来;而 T4DNA连接酶能缝合两种末端 ,但连接平末端的之间的效率较 低;(2) 与 DNA聚合酶作用的异同 :DNA聚合酶只能将 单个核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键;DNA连接酶是连接 两个 DNA片段的末端,形成磷酸二酯键;3. “分子运输车” 载体第 6 页 共 26
14、 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 6 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -( 1)载体具备的条件: 能在受体细胞中复制并稳固储存 ; 具有一至多个限制酶切点, 供外源 DNA片段插入 ;具有标记基因, 供重组 DNA的鉴定和挑选 ;( 2)最常用的载体是 质粒 , 它是一种 暴露的、结构简洁的、 独立于细菌染色体之外,并具有自我复制才能的双链环状DNA分子;( 3)其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒 二 基因工程的基本操作程序第一步: 目的基因的猎取1. 目的基因是指
15、:编码蛋白质的结构基因;2. 原核基因实行 直接分别 获得,真核基因是 人工合成 ;人工合成目的基因的常用方法有 反转录法 _和化学合成法 _;3. PCR技术扩增目的基因( 1)原理: DNA双链复制( 2)过程:第一步:加热至 90 95DNA解链;其次步:冷却到 5560, 引物结合到互补 DNA链;第三步:加热至 70 75, 热稳固DNA聚合酶从引物起始互补链的合成;其次步: 基因表达载体的构建1. 目的:使目的基因在受体细胞中稳固存在 ,并且可以 遗传至下一代 ,使目的基因能够 表达和发挥作用 ;2. 组成: 目的基因 启动子 终止子 标记基因第 7 页 共 26 页精选名师 优秀
16、名师 - - - - - - - - - -第 7 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -( 1)启动子:是一段有特别结构的DNA片段 ,位于基因的 首端,是RNA聚合酶 识别和结合的部位, 能驱动基因 转录出 mRN,A 最终获得所需的蛋白质 ;( 2)终止子:也是一段有特别结构的DNA片段 ,位于基因的 尾端;( 3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因 ,从而将 含有目的基因的细胞 挑选出来;常用的标记基因是抗生素基因;第三步: 将目的基因导入受体细胞_1. 转化的概念: 是目的基
17、因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维护稳固和表达的过程;2. 常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法是农杆菌转化法 ,其次仍有 基因枪法 和 花粉管通道法 等;将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术 ;此方法的受体细胞多是受精卵 ;将目的基因导入微生物细胞:3. 重组细胞导入受体细胞后, 挑选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达 ;第四步: 目的基因的检测和表达1. 第一要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采纳 DNA分子杂交技术 ;第 8 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 8 页,共 2
18、6 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -2. 其次仍要检测目的基因是否转录出了mRN,A方法是采纳用标记的目的基因作探针与mRNA杂交 ;3. 最终检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提 取 蛋白质 ,用相应的抗体进行抗原抗体杂交 ;4. 有时仍需进行个体生物学水平 的鉴定;如 转基因抗虫植物是否显现抗虫性状 ;(三)( b)基因工程的应用1. 植物基因工程: 抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质;2. 动物基因工程: 提高动物生长速度、 改善畜产品品质、 用转基因动物生产药物;3.
19、基因治疗: 把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用;(四)( a)蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础, 通过基因修饰或基因合成 ,对现有蛋白质进行 改造,或制造一种新的蛋白质 ,以满意人类的生产和生活的需求;(基因工程在原就上只能生产 自然界已存在 的蛋白质)( 1)蛋白质工程崛起的缘由: 基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质( 2)蛋白质工程的基本原理:它可以依据人的需求来设计蛋白质的结构,又称为其次代的基因工程;基本途径:从预期的蛋白质功能动身,设计预期的蛋白质结构,估计第 9 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - -
20、- - - - - -第 9 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -应有的氨基酸序列,找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)以上是蛋白质工程特有的途径;以下依据基因工程的一般步骤进行;(留意:目的基因只能用人工合成的方法)设计中的困难:如何估计非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列二、细胞工程(一)植物细胞工程1. 理论基础(原理): 细胞全能性2. 植物组织培育技术( b)( 1)过程:离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织试管苗植物体( 2)用途: 微型繁衍、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂
21、化生产 ;A植物繁衍微型繁衍:可以高效快速地实现种苗的大量繁衍作物脱毒: 采纳茎尖组织培育来除去病毒 (由于 植物分生区邻近的病毒极少或没有 )人工种子:以植物组织培育得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为 材料, 经人工薄膜包装得到的种子;优点: 完全保持优良品种的遗传特性,不受季节的限制;便利贮存和运输 B作物新品种培育单倍体育种:a 过程:植株( AaBb)通过减数分裂得到花粉(AB 、Ab 、aB、ab 四第 10 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 10 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - -
22、 - - - - - - - - - -种类型);对花粉进行 花药离体培育 (技术是植物组织培育) ;得到单倍体植株 ;对其幼苗时期进行 秋水仙素 处理;得到了正常的纯合二倍体植株( AABB 、AAbb 、aaBB、aabb 四种类型);b优点:明显缩短育种年限 C突变体利用:在组织培育中会显现突变体,通过从有用的突变体 中选育出新品种( 如挑选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体)D细胞产物的生产:通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培育,从而让它们能够产生大量的细胞产物;( 3)位置:是培育 转基因植物 、植物体细胞杂交 培育植物新品种的最终一道工序;3. 植物植物体细胞细胞 A杂交技植物
23、术细胞( 1)过程:图( 2)杂种细胞愈伤组织杂种植株第 11 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 11 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -( 2)诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电刺激 等;化学法一般是用 聚乙二醇( PEG) 作为诱导剂;( 3)意义: 克服了远缘杂交不亲和的障碍;(二)动物细胞工程1. 动物细胞培育( a)( 1)概念:动物细胞培育就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成 单个细胞 ,然后放在相宜的 培育基 中,让这些细胞 生长
24、和繁衍 ;( 2)动物细胞培育的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织 )剪碎用 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成 单个细胞制成 细胞悬液 转入培育瓶中进行 原代培育贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞连续传代 培育;( 3)细胞贴壁和接触抑制: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 ,称为细胞贴壁 ;细胞数目不断增多, 当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会 停止分裂增殖 ,这种现象称为 细胞的接触抑制 ;( 4)动物细胞培育需要满意以下条件无菌、无毒的环境 :培育液应进行 无菌处理;通常仍要在培育液中添加肯定量的 抗生素 ,以防培育过程中的污染;此外,应
25、定期更换培育液,防止 代谢产物积存对细胞自身造成危害;养分 :合成培育基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等;通常需加入 血清、血浆 等自然成分;第 12 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 12 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -温度 :相宜温度:哺乳动物多是36.5 0.5 ;pH:7.2 7.4 ;气体环境 :95%空气5%CO2;O2 是细胞代谢 所必需的, CO2 的主要作用是维护培育液的pH;( 5)动物细胞培育技术的应用:制备病毒疫
26、苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培育医学讨论的各种细胞;2. 动物体细胞核移植技术和克隆动物( 1)哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞 核移植(比较简洁)和 体细胞核移植(比较难);( 2)选用去核 卵 母 细胞 的缘由:卵 母 细胞比较大,简洁操作 ; 卵 母 细胞细胞质多,养分丰富;( 3)体细胞核移植的大致过程是:高产奶牛(供应体细胞)进行细胞培育 ;同时采集卵母细胞,在体外培育到 减二分裂中期的卵母细胞,去核(显微操作)注:为什么要用卵细胞?它可以供应充分的养分;操作简便; 细胞质不会抑制细胞核全能性的表达 ;将供体细胞注入去核卵母细胞;通过电刺激使两细胞融合,供体核进入受体卵母细胞,构
27、建重组胚胎;将胚胎移入受 体(代孕)母牛体内;生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛( 4)体细胞核移植技术的应用: 加速家畜遗传改良进程, 促进良畜群繁育; 爱护濒危物种, 增大存活数量; 生产宝贵的医用蛋白; 作为异种移植的供体; 用于组织器官的移植等 ;第 13 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 13 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -( 5)体细胞核移植技术存在的问题:克隆动物存在着 健康问题、表现出 遗传和生理 缺陷等;3. 动物细胞融合( 1)动物细
28、胞融合也称 细胞杂交 ,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程; 融合后形成的具有原先 两个或多个 细胞遗传信息的单核细胞,称为 杂交细胞 ;( 2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等;( 3)动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性 ,成为讨论细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段;( 4)动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合理论基础细胞的全能性、细胞细胞增殖、细胞膜的膜的流淌性流淌性融合前处理酶解法去除细胞壁注射特定抗原,
29、免疫(纤维素酶、果胶酶)处理正常小鼠诱导手段物理法 : 离心、振动、物理法 : 离心、振动、电激电激化学法:聚乙二醇化学法:聚乙二醇( PEG)生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒)第 14 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 14 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -诱导过程第一步:原生质体的制备(酶解法) 其次步:原生质体融合(物、化法)第三步:杂种细胞的 挑选和培育第四步:杂种植株的诱导与鉴定正常小鼠免疫处理动物细胞的融合(物、化、生法) 杂交瘤细胞的挑选
30、与培育专一抗体检验阳性细胞培育单克隆抗体的提纯用途和意义克服远缘杂交的不亲和障碍,大大扩展杂交的亲本组合范畴 应用:白菜- 甘蓝等杂种植株( 1) 制备单克隆抗体( 2) 诊断、治疗、预防疾病,例如“生物导弹”治疗癌症4. 单克隆抗体( 1)抗体:一个 B 淋巴细胞只分泌一种 特异性抗体 ;从血清中分别出的抗体 产量低、纯度低、特异性差;( 2)单克隆抗体的制备过程:第 15 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 15 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -对免疫
31、小鼠注射特定的抗原蛋白(目的使小鼠产生了效应B 细胞);提取 B 淋巴细胞;同时用动物细胞培育的方法培育骨髓瘤细胞并提取;促使它们细胞融合 注:融合的结果是有很多不符合要求的;如有 2 个 B 淋巴细胞融合的细胞等,所以要进行挑选 ;在特定的挑选培育基上挑选出融合的 杂种细胞 特点是能快速大量增殖,又能产生专一的抗体 ;然后对它进行 克隆化培育和抗体检测 挑选出能够分泌所需抗体的杂种细胞 ;最终将杂交瘤细胞在体外做大规模培育或注射入小鼠腹腔内增殖, 从细胞培育液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体;( 3)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁衍 ,又能产生 专一的抗体 ;( 4)单克隆抗体的优点: 特异
32、性强,灵敏度高,并能大量制备;( 5)单克隆抗体的作用: 作为诊断试剂 :精确识别各种 抗原物质的微小差异,并跟 肯定抗原 发生特异性结合,具有 精确、高效、简易、快速的优点;用于治疗疾病和运载药物 :主要用于治疗 癌症治疗 ,可制成“ 生物导弹 ”,也有少量用于治疗其它疾病;三、胚胎工程(一)动物胚胎发育的基本过程( 1)精子的发生: 补充,精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂; 变形过程中, 细胞核为精子头的主要部分,高尔基体发育为顶体, 中心体演化为精子的尾, 线粒体在尾基部形成线粒体鞘膜,其他物质浓缩为原生质滴直至脱落; 线粒体为精子运动供应能量( 2)卵子的发生:在 胎儿时期 ,卵原
33、细胞进行有丝分裂演化成初级第 16 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 16 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -卵母细胞 被卵泡细胞包围 ,减一分裂在 排卵前后完成 ,形成次级卵母细胞和第一极体 进入输卵管预备受精 ;减二分裂是在 受精过程中完成的;( 3)受精:精子获能( 在雌性动物生殖道内);卵子的预备(排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到减二中期 才具备受精才能) ;受精阶段 卵子四周的结构由外到内:放射冠、透亮带、卵黄膜 ,a 顶体反应:精子释放顶体酶
34、溶解卵丘细胞之间的物质,穿越放射冠; b 透亮带反应:顶体酶可将透亮带溶出孔道,精子穿入,在精子触及卵黄膜的瞬时阻挡后来精子进入透亮带的生理反应 它是防止多精子入卵受精的第一道屏障 ; c卵黄膜的封闭作用:精子外膜和卵黄膜 融合,精子入卵后,卵黄膜会拒绝其他精子再进入卵内的过程 它是防止多精子入卵受精的其次道屏障 ;精子尾部脱落,原有核膜破裂形成雄原核,同时卵子完成减二分裂 ,形成雌原核 留意:受精标志是其次极体的形成;受精完成标志是雌雄原核融合成合子 ;( 4)胚胎发育: a卵裂期:细胞进行有丝分裂,数量增加,胚胎总体积不增加 ; b 桑椹胚: 32 个细胞左右的胚胎 之前全部细胞都能发育成
35、完整胚胎的潜能属全能细胞 ;c囊胚: 细胞开头分化 ,其中个体较大的细胞叫 内细胞团 将来发育成 胎儿的各种组织 ;而滋养层细胞将来发育成 胎膜和胎盘 ;胚胎内部逐步显现囊胚腔 注:囊胚的扩大会导致透亮带的破裂,胚胎舒展出来,这一过程叫孵化 ;d 原肠胚:内细胞团表层形成外胚层, 下方细胞形成内胚层, 由内胚层包围的囊腔叫原肠腔; 细胞分化在胚胎期达到最大限度第 17 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 17 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -9 胚胎工程的
36、理论基础(识记)( 1)胚胎工程的概念及技术手段:对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培育 等技术;( 2)体外受精 属有性生殖过程 : a 卵母细胞的采集和培育 对体型小的动物用促性腺激素处理,从输卵管冲取卵子 (可直接受精);对体型大的动物从卵巢中采集卵母细胞 (要在体外培育成熟) b 精子的采集 假阴道法、手握法和电刺激法;获能 对啮齿动物、兔、猪等的精子用培育法(放入人工配制的获能液中) ;对牛、羊等精子用化学法(放在肝素或钙离子载体溶液中)( 3)胚胎的早期培育: a培育液成分:无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血
37、清等留意与动物细胞培育液成分的比较 ;b 当胚胎发育到相宜的阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻储存 ;( 4)胚胎移植: a 概念:将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生 理状态相同的其他雌性动物的体内,使之连续发育为新个体的技术; 是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁衍后代的过程,通过转基因、核移植、体外受精获得的胚胎必需移植给受体才能获得后代;b 优势:可以充分发挥雌性优良个体的繁衍潜力,缩短供体本身的繁衍周期;c 胚胎移植的生理学基础:同种动物的供、受体生殖器官的 生理变化是相同 的 对供体和受体进行同期发情处理 ;早期胚胎形成后处于 游离状态,为胚胎的收集供应可能; 受体对移入子宫的外
38、来胚胎 基本不第 18 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 18 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -发生免疫排斥反应 ;移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响;d 胚胎移植的程序:对供、受体母牛进行挑选,用激素进行 同期发情处理;对供体母牛用激素做 超数排卵 处理;挑选同种优秀公牛 配种 有性生殖过程 ;对胚胎进行 收集 此时胚胎处于游离状态;对胚胎进行质量检查 此时胚胎应发育到 桑椹胚或囊胚 ;胚胎移植 或冷冻储存 ; 检查受体母牛是否受孕;产下
39、胚胎移植的犊牛;( 5)胚胎分割: a 概念:用机械方法将 早期胚胎 切割成 2、4、8 等分等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术 可看作是 动物无性繁衍或克隆b 基本过程:挑选良好的 桑椹胚或囊胚 移入培育皿中,用分割针或分割刀片将其切开, 吸出其中的半个胚胎注入透亮带中或直接移植给受体; 留意:内细胞团要均等分割,否就会影响胚胎的复原和进一步发育10 胚胎干细胞的移植(识记)( 1)胚胎干细胞的含义:由 早期胚胎 囊胚或原始性腺 胎儿 中分别出来的一类细胞,又叫ES 或 EK 细胞;( 2)特点:形状上体积小、细胞核大、核仁明显;功能上具有发育的全能性,即可分化为成年动物体内任何一种组织细胞
40、;体外培育下, ES 细胞可以只增殖不分化( 3)应用:用于治疗人类疾病,如利用ES 细胞诱导其分化成新的组织细胞特性,移植ES 细胞可使坏死或退化的部位得以修复;第 19 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 19 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -1、胚胎工程是指对动物 早期胚胎或配子 所进行的多种显微操作和处 理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培育 等技术;经过处理后获得的 胚胎,仍需移植到 雌性动物体内 生产后代, 以满意人类的各种需求
41、;2、动物胚胎发育的基本过程( 1)受精场所是母体的 输卵管 ;( 2)卵裂期:特点:细胞 有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体体积 并不增加,或略有减小;( 3)桑椹胚:特点:胚胎细胞数目达到32 个左右时,胚胎形成致密的细胞团,形似桑椹;是全能细胞 ;( 4)囊 胚:特点:细胞开头显现 分化 (该时期细胞的 全能性仍比较高);集合在胚胎一端个体较大的细胞称为 内细胞团 ,将来发育成胎儿的各种组织;中间的空腔称为 囊胚腔 ;( 5)原肠胚:特点:有了 三胚层 的分化,具有 囊胚腔和原肠腔;(二)胚胎干细胞1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或 EK细胞,来源于 早期胚胎或从原 始 性 腺 中
42、 分 离 出 来 ;2、具有 胚胎细胞 的特性,在形状上表现为体积 小, 细胞核 大, 核仁明显; 在功能上,具有 发育的全能性 ,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞;另外,在体外培育的条件下,可以增殖 而不发生 分化,可进行 冷冻储存,也可进行 遗传改造 ;第 20 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 20 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -3、胚胎干细胞的主要用途是:可用于讨论哺乳动物 个体发生和发育规律 ;是在体外条件下讨论 细胞分化 的抱负材料,
43、在培育液中加入分化诱导因子 ,如牛黄酸等化学物质时,就可以诱导 ES细胞向不同类型的组织细胞分化, 这为揭示 细胞分化和细胞凋亡 的机理供应了有效的手段;可以用于治疗 人类的某些顽疾 ,如帕金森综合症、少年糖尿病等; 利用可以被诱导分化形成 新的组织细胞 的特性, 移植ES细胞可使 坏死或退化 的部位得以修复并复原正常功能;随着组织工程技术的进展,通过ES细胞体外诱导分化 ,定向培育出 人造组织器官 ,用于器官移植 ,解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥 的问题;(三)胚胎工程的应用1. 体外受精和胚胎的早期培育(1) 卵母细胞的采集和培育:主要方法:用促性腺激素 处理,使其排出更多的卵子,然
44、后,从 输卵管 中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精;其次种方法:从刚 屠宰母畜的卵巢 中采集卵母细胞;第三种方法是借助超声波探测仪、 腹腔镜等直接从 活体动物的卵巢 中吸取卵母细胞;采集的卵母细胞, 都要在体外经 人工培育成熟 后,才能与 获能的精子 受精;(2) 精子的采集和获能:在体外受精前,要对精子进行获能 处理;(3) 受精:获能的精子和培育成熟的卵细胞在获能溶液或 专用的受精溶液中完成受精过程;第 21 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 21 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - -
45、 - - - - - - - - -(4) 胚胎的早期培育:精子与卵子在体外受精后,应将受精卵移入发育培育液 中连续培育, 以检查 受精状况和受精卵的发育才能;培育液成分较复杂,除一些无机盐和有机盐外,仍需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸 等养分成分, 以及血清等物质; 当胚胎发育到相宜的阶段时,可将其取出向 受体移植或冷冻储存 ;不同动物胚胎移植的时间不同; 牛、羊一般要培育到 桑椹胚或囊胚 阶段才能进行移植,小鼠、家兔等试验动物可在 更早的阶段 移植,人的体外受精胚胎可在4 个细胞阶段移植; 2. 胚胎移植(1) 胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及其它 方式得到的胚胎,
46、移植到 同种的、生理状态相同的 其它雌性动物的体内,使之连续发育为新个体的技术; 其中供应胚胎的个体称为 “供体”, 接受胚胎的个体称为 “受体” ;(供体为 优良品种,作为受体的雌性动物应为 常见或存量大 的品种;)位置: 如转基因、核移植, 或体外受精 等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎, 都必需经过 胚胎移植技术 才能获得后代, 是胚胎工程的最终一道“工序” ;(2) 胚胎移植的意义: 大大缩短了 供体本身的繁衍周期 ,充分发挥 雌性优良个体的繁衍才能;(3) 生理学基础:动物发情排卵后,同种动物的供、受体生殖器官 的生理变化是相同的 ;这就为供体的胚胎移入受体供应了相同的生理环境;第
47、22 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 22 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -早期胚胎在肯定时间内处于游离 状态;这就为 胚胎的收集供应了可能;受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应 ;这为胚胎在受体的存活供应了可能 ;供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织 联系,但供体胚胎的遗传特性 在孕育过程中不受影响;(4) 基本程序主要包括:对供、受体的挑选和处理 ;挑选 遗传特性和生产性能 优秀的供体, 有健康的体质和正常繁衍才能 的受体, 供体和受体是
48、 同一物种;并用激素进行 同期发情处理 ,用促性腺激素 对供体母牛做 超数排卵 处理;配种或人工授精 ;对胚胎的收集、检查、培育或储存 ;配种或输精后第 7 天,用特制的冲卵 装置,把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来 也叫冲卵 ;对胚胎进行质量 检查,此时的胚胎应发育到 桑椹或胚囊胚 阶段;直接向受体移植或放入 196的液氮 中储存;对胚胎 进行移植;移植后的检查;对受体母牛进行是否妊娠 的检查;3. 胚胎分割(1) 概念:是指采纳机械方法将早期胚胎 切割 2 等份、 4 等份等,经移植获得 同卵双胎或多胎 的技术;(2) 意义:来自同一胚胎的后代具有相同 的遗传物质, 属于无性繁衍;第 23 页 共 26 页精选名师 优秀名师 - - - - - - - - - -第 23 页,共 26 页 - - - - - - - - - -精品word 名师归纳总结 - - - - - - - - - - - -(3)
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