唾液淀粉酶最适pH值

1、精选优质文档-倾情为你奉上唾液淀粉酶最适pH值的测定陆绍龙广西医科大学七年制临床医学10级4班摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=6.6时，唾液淀粉酶的活性最高。关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往

2、仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为4.34.8的酸性反应为止。正文：1.材料与方法：仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722

3、G分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。试剂：2.5g/L淀粉，0.2mol/L Na2HPO4 溶液，0.2mol/L NaH2PO4 溶液,蒸馏水，唾液，碘液。2.操作步骤1）1. 不同pH缓冲液配制 按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。 pH6.06.26.46.66.87.07.20.2mol/L Na2HPO4 溶液(mL)0.6150.9251.3251.8752.4503.0503.6000.2mol/L NaH2PO4 溶液(mL)4.3854.0753.6753.1252.5501.9501.400注：应用pH值试纸来确定所配溶液pH。2）唾液的获取先漱口

4、12次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。3）淀粉用量的确定123空白7.0pH缓冲液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.10.20.3唾液（稀释10倍）0.10.10.10.1混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O5.95.85.76混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量4）酶稀释液的倍数确定稀释倍数51015202530酶液（mL）10.50.40.250.20.2H2O（mL）44.55.64.754.85.8稀释倍数51015202530空白7.0pH缓冲液（mL）0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉由第3步操

5、作确定唾液0.10.10.10.10.10.1混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O6666666混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数5）最适pH值的确定 pH6.06.26.46.66.87.07.2pH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.9某倍数唾液（由第四步确定）由第3步操作确定混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O6666666混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液A6600.1320.1640.0790.0650.1110.1250.100以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的A值，记录好数据。6）实验数据据处理以A

6、660为纵坐标，pH为横坐标作图。3.结论：根据实验数据做出的平滑曲线图可知，最低点对应的pH 值即为唾液淀粉酶的最适pH值，所以由本次实验得出唾液淀粉酶的最适pH值为6.6。4讨论： （1）此次实验是根据唾液淀粉酶催化底物水解量来测最适pH 值，因此在唾液淀粉酶活性最高时要保证底物过量，淀粉分解的越多，A值就小；（2）由实验可知：过酸过碱都会抑制酶的活性，使之淀粉的分解减少，A值增大；（3）本次实验要选取合适的底物浓度，如浓度过高火过低，可导致颜色过浓或过浅，难以判断；5.参考文献1 吴耀生 .医学生物化学与分子生物学实验指南【M】：人民卫生出版社，2007，74-752查锡良、周春燕 .生

7、物化学【M】.第七版北京：人民卫生出版社.3 关爱萍. “唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”的探究性实验教学设计J. 生物学教学, 2004,(09) 4 尚渤程、黎一苇 . 人体常见的pH值【J】.生物学教学 . 2009；12 5 吴举宏关于“对酶活性的影响”种实验方案的比较分析生物学通报，2008，4346 王雯斌，解金辉“不同对酶活性的影响”实验方法的讨论及改进【J】中学生物教学，2008. 7 许冰、原媛、 赵文献. pH值对酶活性影响的实验观察【J】 .临床合理用药杂志. 2010; 3(10) : 358 刘培生, 叶宝珍. 唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的改进J. 实验教学与仪器, 1999,(10)9 林焕棠. 对唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的探索J. 生物学教学, 1994,(07)10 周照县. 对一些参考书修改“唾液淀粉