细胞生物学实验：2 液泡系、线粒体的活体染色

1、实验二实验二 液泡系、线粒体的活液泡系、线粒体的活体染色体染色实验目的实验目的 掌握植物细胞活体染色的原理和相关技术掌握植物细胞活体染色的原理和相关技术实验原理实验原理 活体染色活体染色指对生物有机体的细胞或组织能着色，但又指对生物有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。无毒害的一种染色方法。显示活细胞内的天然结构，而不影响细胞的显示活细胞内的天然结构，而不影响细胞的生命活动。生命活动。液泡液泡 中性红中性红 (neutral red)(neutral red)中性红是一种弱碱性中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，变色范围指示剂，变色范围 pH6.48.0之间（由红之间（由红变黄）变

2、黄）。 在在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性酸性，因此，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色； 死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子

3、，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。合，而使原生质与细胞核染色。线粒体线粒体 詹纳斯绿詹纳斯绿B B (Janus green B)(Janus green B)线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色。而线粒体外染料被还原，呈无色。材料、试剂和仪器材料、试剂和仪器 仪器、用具：仪器、用具：普通光学显微镜、普通光学显微镜、50ml烧杯、解剖盘、剪烧杯、解剖盘、剪刀、镊子、解剖刀、玻璃滴管、载波片、盖刀、镊子、解剖刀、玻璃滴管、载波片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。玻片、擦镜纸、吸水纸。 材料材料

4、洋葱鳞茎洋葱鳞茎材料、试剂和仪器材料、试剂和仪器 试剂试剂 Ringer溶液溶液 、1%和和1/3000中性红溶液中性红溶液 、1%和和1/5000詹纳斯绿詹纳斯绿B溶液溶液实验步骤实验步骤 植物细胞液泡的活体染色与观察植物细胞液泡的活体染色与观察 撕取洋葱鳞茎撕取洋葱鳞茎内内表皮，放在加有一滴表皮，放在加有一滴1/3000的的中性红染液的载波片中，中性红染液的载波片中，染色染色5 min以上，以上，8 min最佳最佳，用吸水纸吸去中性红染液，换上，用吸水纸吸去中性红染液，换上Ringer液，盖上盖玻片，显微镜观察（液，盖上盖玻片，显微镜观察（10物物镜），可见到被染成砖红色的中央大液泡。镜）

5、，可见到被染成砖红色的中央大液泡。发生质壁分离正常洋葱表皮细胞植物细胞线粒体的活体染色与观察植物细胞线粒体的活体染色与观察 用吸管吸取用吸管吸取1/5000詹纳斯绿詹纳斯绿B染液，滴一滴在染液，滴一滴在干净的载波片上，然后用镊子撕取洋葱鳞茎内干净的载波片上，然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，表皮一小块，置于染液中，染色染色10 -20 min。用吸水纸吸去詹纳斯绿用吸水纸吸去詹纳斯绿B染液，换上染液，换上Ringer液，液，盖上盖玻片，显微镜观察。在盖上盖玻片，显微镜观察。在高倍镜下高倍镜下，可见，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤到旁边，线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线条到旁边，线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。状。正常未染色细胞正常未染色细胞正常的染色细胞正常的染色细胞死亡的染色细胞死亡的染色细胞思考题思考题 简述液泡系中