液相色谱维护基础知识

1、11Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited岛津公司（大连）综合技术交流会岛津公司（大连）综合技术交流会2013年12月18日 22Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited内容介绍内容介绍时间时间内容内容负责人负责人8:30-9:008:30-9:00签到签到9:00-9:109:00-9:10开场致辞开场致辞 内容介绍内容介绍陈有新陈有新9:10-10:009:10-10:00气相色谱基础理论及气相色谱分析方法改善气相色谱基础理论及气相色谱分析方法改善王妍王妍1

2、0:05-10:1510:05-10:15休息休息 茶歇茶歇 抽奖抽奖10:15-10:4510:15-10:45气相色谱柱的维护与选择气相色谱柱的维护与选择邹敏邹敏10:45-11:3010:45-11:30液相色谱柱实用技术液相色谱柱实用技术 及液相色谱维护保养及液相色谱维护保养陈有新陈有新11:30-11:5011:30-11:50岛津公司最新岛津公司最新UFMSUFMS产品介绍产品介绍陈有新陈有新11:50-12:0011:50-12:00抽奖抽奖 答疑答疑郭志远郭志远12:00-13:3012:00-13:30精美中餐精美中餐中联大酒中联大酒店店33Shimadzu Internat

3、ional Trading (Shanghai) Co. Limited液相色谱实用技术液相色谱实用技术2013年12月17日 丹东44Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited内容介绍 液相色谱基础介绍液相色谱基础介绍 液相色谱柱种类介绍液相色谱柱种类介绍 液相色谱柱常见问题解决液相色谱柱常见问题解决 液相色谱柱的保养液相色谱柱的保养55Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. LimitedHPLCHPLC工作流程图工作流程图66Shimadzu International T

4、rading (Shanghai) Co. Limited色谱柱色谱柱在一个圆筒型管子里，填装细微颗粒的填料，是整个分析过在一个圆筒型管子里，填装细微颗粒的填料，是整个分析过程的心脏。有各种类型的填料（分离模式），要根据分析的程的心脏。有各种类型的填料（分离模式），要根据分析的目的成分的不同，进行合理的选择与使用。目的成分的不同，进行合理的选择与使用。77Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limitedwww.shimadzu-www.shimadzu-色谱柱横截面色谱柱横截面（单位：单位：mmmm）HPLCHPLC色谱柱色谱柱 （一般

5、情况一般情况, 20, 20300mm300mm 1 14.6mmI.D.)4.6mmI.D.) （材质材质：SUSSUS、PEEKPEEK）填料填料（单位：单位：mm） 硅胶硅胶 聚合物聚合物扩大扩大扩大扩大无数的细孔无数的细孔（单位：单位：10nm10nm）官能基官能基色谱柱和填料色谱柱和填料788Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limitedwww.shimadzu-www.shimadzu-正相填料（固定相极性流动相极性）反相填料（固定相极性流动相极性）离子交换型填料尺寸排阻型填料其他不同填料对应不同的分离模式用途不同的填料分

6、类用途不同的填料分类899Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited9液相色谱柱键合相选择参考液相色谱柱键合相选择参考名称名称 别名别名 功能基团功能基团 正相正相 反相反相 离子离子对对 应用应用 Silica -OH 极性和中等极性以及非离子性有机化合物极性和中等极性以及非离子性有机化合物 Btyl C4 -C4H9 分离肽和蛋白质，保留时间比分离肽和蛋白质，保留时间比C8和和C18短。短。 MOS C8,Octyl -C8H17 中等极性到强极性化合物，小肽和蛋白质，极性药物、甾族环境样中等极性到强极性化合物，小肽和蛋白质，

7、极性药物、甾族环境样品。品。 ODS C18 -C18H37 烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。广泛用于药物、甾族化烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。广泛用于药物、甾族化合物、脂肪酸和环境样品。合物、脂肪酸和环境样品。 CPS CN,Cyano (Propyl nitrile) -(CH2)3CN 对极性化合物有独特的选择性，适合正相分离；当用于反相系统时，对极性化合物有独特的选择性，适合正相分离；当用于反相系统时，其选择性与其选择性与C8和和C18不同。在药学领域和复杂混合物的分离中应用不同。在药学领域和复杂混合物的分离中应用广泛。广泛。 APS NH2 (Amino propy)

8、-(CH2)3NH2 反相中分析糖类和其他极性化合物；弱阴离子交换分析，阴离子和反相中分析糖类和其他极性化合物；弱阴离子交换分析，阴离子和有机酸则应用缓冲剂和有机改性剂做流动相；正相中与硅胶的选择有机酸则应用缓冲剂和有机改性剂做流动相；正相中与硅胶的选择性不同。性不同。 Phenyl -(CH2)3C6H5 苯环及芳香族化合物苯环及芳香族化合物 Diol -(CH2)3OCH2CHOHCH2OH 反相时，分离肽和蛋白质。正相时，与硅胶选择性相似，但极性较反相时，分离肽和蛋白质。正相时，与硅胶选择性相似，但极性较弱弱 SCX 强阳离子次换强阳离子次换 -(CH2)2C6H4 SO3H- 有机碱有

9、机碱 SAX 强阴离子交换强阴离子交换 -(CH2)3N+（(CH3)3 有机酸、核苷和核苷酸有机酸、核苷和核苷酸 1010Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色谱柱常见问题解决色谱柱常见问题解决1111Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色谱柱是液相色谱仪的心脏 现代高效液相色谱中, 分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。不要总是首先埋怨色谱柱不要总是首先埋怨色谱柱!1212S

10、himadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 3.1.1 3.1.1 谱峰分叉谱峰分叉 首先判断柱头是否柱头塌陷? (按色谱柱评价报告的条件评价色谱柱)色谱柱使用过程中易出现的问题及解决办法1313Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited修补前后现象 1414Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因原因: : a.柱头塌陷 b.柱外死体积 c.柱头填料污染 d.进样阀密封问题 e.样品分解 f.色谱柱

11、填充不实 g.色谱柱受到强烈振动1515Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 样品分解1616Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited解决办法：解决办法： a.流动相含盐时,冲洗系统要用20%的甲醇水，不要用纯水冲柱,修补色谱柱；b.检查进样阀色谱柱检测器的管路连接有无死体积,更换密封环(刃环)； c.严格过滤流动相和样品,修补色谱柱； d.检修进样阀。 1717Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Lim

12、ited3.1.2 柱压过高不要认为压力高就是色谱柱的问题不要认为压力高就是色谱柱的问题首先判断是否是色谱系统管路阻塞首先判断是否是色谱系统管路阻塞? ?方法:(分段检查泵在线过滤器进样阀色谱柱检测器排液管)1818Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因原因: a. 在线过滤器阻塞 b. 进样阀定量管阻塞 c. 管路阻塞 d. 保护柱阻塞 e. 压力传感器不准确 f. 泵流量偏大 e. 色谱柱的问题1919Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited色谱柱问题色

13、谱柱问题 微粒堵塞流动相改变造成粘度变化柱床膨胀样品在色谱柱上不可逆吸附细菌滋生联系色谱柱生产厂家寻求帮助。联系色谱柱生产厂家寻求帮助。 2020Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.3 重复性差实验的重复性差实验的重复性差色谱柱被污染流动相pH值及组成不合适造成键合相流失，如通常的硅胶基质色谱柱在碱性条件下使用样品溶剂不同或样品本身不稳定进样技术问题2121Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited原因：原因：色谱柱被污染官能团坍塌色谱柱内的死体积流动相

14、pH值及组成不合适造成固定相流失流速急剧变化造成固定相物理损坏机械震动造成固定相产生裂缝柱床收缩或干涸3.1.4 柱效降低2222Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.5 鬼峰或假峰进样阀或注射器污染样品溶剂与流动相不同样品中有空气流动相中杂质引起20%到100%甲醇梯度2323Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.6 柱外效应小于3mm内径的色谱柱进样阀和色谱柱、色谱柱和检测器之间用短的细内径的连接管用无死体积接头用较小体积的检测池进样体积减

15、小2424Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.7 色谱峰分裂柱外死体积柱头填料污染部分阻塞进样阀密封问题化合物一起洗脱2525Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.8 色谱峰展宽所有的色谱峰展宽所有的色谱峰展宽柱效降低进样体积太大部分色谱峰展宽部分色谱峰展宽上次进样洗脱的色谱峰蛋白或聚合物等高分子量化合物2626Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.9 色谱峰拖尾部分

16、色谱峰拖尾部分色谱峰拖尾次级保留效应次级保留效应残留硅醇残留硅醇基的作用基的作用在大峰的尾部有小峰在大峰的尾部有小峰所有色谱峰拖尾所有色谱峰拖尾柱外效应柱外效应柱头污染柱头污染重金属离子重金属离子色谱柱填充不理想色谱柱填充不理想2727Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited3.1.10 峰前伸色谱柱没有充分平衡在主峰前有小色谱峰流动相的溶剂强度低于溶解样品的溶剂2828Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 色谱柱筛板问题 强保留的样品组分 色谱柱填充不良 压

17、力影响 化学影响通常的硅胶基质色谱柱，其通常的硅胶基质色谱柱，其pHpH使用范围为使用范围为2 28 83.1.12 色谱柱寿命色谱柱作为消耗品具有一定的使用寿命，应在日常使用过程中注意以上事项，尽量延长色谱柱的寿命。2929Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited养成良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，请先检测柱效；拿到一根新色谱柱时，请先检测柱效；保存新色谱柱所得结果及实验条件；保存新色谱柱所得结果及实验条件；定期检测柱效。定期检测柱效。2. 色谱柱的使用及保养色谱柱的使用及保养3030Shimadzu Internati

18、onal Trading (Shanghai) Co. Limited2.1 色谱柱的使用及操作流动相的转换流动相的转换 特别是正、反相互换，及使用GPC柱温度的变化温度的变化 常规色谱柱温度不超过60流速流速( (压力压力) )的变化幅度的变化幅度 避免流速(压力)突然变化特殊色谱柱特殊色谱柱 样品及溶剂的要求样品及溶剂的要求切记拿到一支新色谱柱时， 一定要先看其使用说明！3131Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited2.2 色谱柱的保养流动相流动相样样 品品其它方面其它方面3232Shimadzu Internationa

19、l Trading (Shanghai) Co. Limited流动相：流动相：使用色谱纯溶剂，并与填料相匹配超纯水或二次蒸馏水若使用缓冲液作流动相缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液(盐)的浓度缓冲盐过滤流动相对样品的溶解度流动相对样品的溶解度3333Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited样品：样品：除去样品中的微粒及杂质除去样品中的微粒及杂质 SPE或过滤等方法了解样品在流动相中的溶解度了解样品在流动相中的溶解度 如样品溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用填料是否相互作用3434Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited其它方面在线过滤器在线过滤器 通常与仪器共同配置通常与仪器共同配置 防止流动相中的颗粒进入管路或色谱柱中防止流动相中的颗粒进入管路或色谱柱中使用保护柱使用保护柱 防止色谱柱被污染3535Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited2.3 色谱柱的清洗再生根据厂