常用的生化反应ppt课件

1、 认识染色方法鉴别细菌的局限性认识染色方法鉴别细菌的局限性 掌握几种常用生化反应的原理、方法和结果判断掌握几种常用生化反应的原理、方法和结果判断 产气肠杆菌产气肠杆菌Enterobacter arogenes） 大肠埃希菌大肠埃希菌Escherichia coli） 普通变形杆菌普通变形杆菌Proteus vulgaris） 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa） 细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌。一般非致病菌能发同，可借以鉴别细菌。一般非致病菌能发酵多种单糖，如大肠埃希菌能分解葡萄糖酵多种单糖，如大肠埃希菌

2、能分解葡萄糖和乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸脱氢和乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸脱氢酶，可将其分解为酶，可将其分解为CO2和和H2，故生化反应，故生化反应结果为产酸产气，以结果为产酸产气，以“ ”表示。伤寒沙表示。伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸，但无甲酸脱氢酶，门菌分解葡萄糖产酸，但无甲酸脱氢酶，故生化结果为产酸不产气，以故生化结果为产酸不产气，以“+”表示。表示。伤寒沙门菌不能分解乳糖，以伤寒沙门菌不能分解乳糖，以“-”表示。表示。 将实验菌种接种到将实验菌种接种到2支支O-F管中管中 在其中在其中1支管中加入无菌液体石蜡，厚度支管中加入无菌液体石蜡，厚度0.5cm左右。左右。 35培养培养18-

3、24小时。小时。 结果结果 开口管开口管 加石蜡管加石蜡管 结果结果 黄色黄色 黄色黄色 发酵型发酵型F） 黄色黄色 绿色绿色 氧化型氧化型O） 绿色绿色 蓝色蓝色 产碱型产碱型产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧生成中产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被氧化在碱性溶液中生成二乙酰，氧化在碱性溶液中生成二乙酰，后者可与含胍基的化合物反应生成红后者可与含胍基的化合物反应生成红色化合物，称色化合物，称VP试验阳性。大肠埃试验阳性。大肠埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VP阴阴性。性。VP甲液：甲液：5%萘酚萘酚VP乙液：乙液：40%

4、KOH产气肠杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液pH5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性，大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性pH5.4，指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验阳性。 能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气肠杆菌，分解枸橼酸盐生成菌如产气肠杆菌，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨，由此使培养基变为碱性，使指示氨，由此使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝剂溴麝香草酚蓝BTB由淡绿转为由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。 含有色氨酸酶的细菌如大肠埃希菌

5、、变形杆菌等可分解色氨酸生成吲哚靛基质），若加入对二甲基氨基苯甲醛，与吲哚结合形成玫瑰吲哚，呈红色，称吲哚试验阳性。 变形杆菌、乙型副伤寒沙门菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚铁存在时，则生成黑色硫化铅或硫化亚铁，可借以鉴别细菌。 变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色。测呈红色。 吲哚吲哚I）、甲基红）、甲基红M）、）、VPV）、）、枸橼酸盐利用枸橼酸盐利用C四种试验，常用于四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为鉴定肠道杆菌，合称之为IMViC试验。

6、试验。大肠埃希菌呈大肠埃希菌呈“+-”，产气肠杆菌，产气肠杆菌为为“-+”。 原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。原性产物

7、。 硝酸盐还原的过程因细菌不同而异硝酸盐还原的过程因细菌不同而异: 有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；希菌； 有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵； 有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。单胞菌等。 硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸。酸。 试剂：甲液试剂：甲液 对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸 乙液乙液 - -奈胺奈胺 结果：出现红色为阳性。结果：出现红色为阳性。 若加入试剂后无颜色反应，

8、可能是：硝酸盐没有被还原，若加入试剂后无颜色反应，可能是：硝酸盐没有被还原，试验阴性；硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假试验阴性；硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。性。 若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。如有气泡产生，表示有氮气生成。 原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和原理：

9、具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。 试剂：试剂：3 3过氧化氢溶液。过氧化氢溶液。 方法：取待测菌涂在玻片上，然后加方法：取待测菌涂在玻片上，然后加3 3过氧化氢数滴立过氧化氢数滴立即观察结果。即观察结果。 结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。 原理：氧化酶细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的原理：氧化酶细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C C氧化，氧化，再由氧化型

10、细胞色素再由氧化型细胞色素C C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。合物。 试剂：试剂：1 1盐酸四甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺或1 1盐酸二甲基对苯二胺。盐酸二甲基对苯二胺。 方法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。方法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。 结果：细菌在与试剂接触结果：细菌在与试剂接触1010秒内呈深紫色，为阳性。秒内呈深紫色，为阳性。 葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖1 10 铁：枸橼酸铁铵铁：枸橼酸铁铵 指示剂：酚红指示剂：酚红 我们人为的把高层代表葡萄糖，斜面代表乳糖。我们人为的把高层代表葡萄糖，斜面代表乳糖。以葡萄糖，乳糖为

11、例葡萄糖是最早利用的单糖，发酵葡萄糖的中间产物丙酮酸为酸性，酚红指示剂为黄色。1、斜面生长的菌量多，面积大，跟氧分子接触的面积也大氧化丙酮酸 CO2H2O中性，PH不变2、斜面蛋白质被细菌利用，氨基酸被利用产生NH3，碱性，酚红指示剂为红色。 高层中丙酮酸浓度高，跟氧分子接触少，在高层中丙酮酸浓度高，跟氧分子接触少，在2424小时内小时内不会被氧化，因此仍为黄色。不会被氧化，因此仍为黄色。 高层黄色斜面红色高层黄色斜面红色 如葡萄糖，乳糖，则高层与斜面均为黄色如葡萄糖，乳糖，则高层与斜面均为黄色2424小时小时内）。内）。 如果延长培养时间，高层中的丙酮酸也会进一步氧化，同如果延长培养时间，高

12、层中的丙酮酸也会进一步氧化，同时细菌利用蛋白质后产碱性物质越来越多，则高层也会变时细菌利用蛋白质后产碱性物质越来越多，则高层也会变为红色。为红色。 有些细菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，有些细菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢生成硫化氢H2SH2SFeFe 黑色的硫化亚铁黑色的硫化亚铁 问：有无葡萄糖，乳糖的情况？为什么？问：有无葡萄糖，乳糖的情况？为什么？ 半固体半固体 M M代表动力代表动力 I I代表吲哚靛基质）代表吲哚靛基质） U U代表尿素代表尿素 结果观察时先观察有无动力，试验管有无变红三分之二结果观察时先观察有无动力，试验管有无变红三分之二管变红为尿素阳性），然后加入对二甲基氨基苯甲醛，观管变红为尿素阳性），然后加入对二甲基氨基苯甲醛，观察吲哚试验结果。察吲哚试验结果。 思考题：思考题： KIA的试验原理的试验原理 1 1、用革兰染色法观察四种试验细菌的形态学特征、用革兰染色法观察四种试验细菌的形态学特征 2 2、将四种试验细菌接种各种生化反应管：、将四种试验细菌接种各种