快速胶体-免疫层析法检测临床应用201510

1、胶体胶体-金金-免疫免疫层析法检测层析法检测在医学实验室应用的需要注意若干问题王洛平王洛平 2015-10大兴区质控中心专项1 免疫标记学可追溯到免疫标记学可追溯到6060年代。随着新理论涌现、年代。随着新理论涌现、单克隆技术与纳米工艺开发单克隆技术与纳米工艺开发，7070年代以胶体金为代年代以胶体金为代表的标记免疫分析技术表的标记免疫分析技术突起突起，迅速进入实验室常规，迅速进入实验室常规工作中，成为继酶免放免荧光免疫三大技术之后，工作中，成为继酶免放免荧光免疫三大技术之后，又一个庞大的试验技术应用体系，其产品广泛用于又一个庞大的试验技术应用体系，其产品广泛用于健康体检，流行病学调查，临床疾

2、病快筛筛查，酒健康体检，流行病学调查，临床疾病快筛筛查，酒驾测试，毒品检测，食品安全检测等方面，驾测试，毒品检测，食品安全检测等方面，2015-10大兴区质控中心专项2发展历史 基层医院实验室或者大型医院门诊部为满足临床患者急迫基层医院实验室或者大型医院门诊部为满足临床患者急迫 诊疗需要，采用胶体（诊疗需要，采用胶体（金金/ /硒硒）免疫）免疫层析层析法检测法检测 基于胶体金免疫层析法属于定性实验（无室内质控，有些基于胶体金免疫层析法属于定性实验（无室内质控，有些 用仪器半定量结果表达）范畴，灵敏度用仪器半定量结果表达）范畴，灵敏度无法无法与与定量实验定量实验比比 较，检测低水平抗原或抗体有时

3、会发生漏检，目测方法会较，检测低水平抗原或抗体有时会发生漏检，目测方法会 受到实验室光线影响等干扰，容易产生一些假阴性或假阳受到实验室光线影响等干扰，容易产生一些假阴性或假阳 性结果性结果 如何做好如何做好技术技术防范？防范？2015-10大兴区质控中心专项3使用现状1 1、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎表面抗原检测试纸卡检测试纸卡2 2、HIVHIV（1/21/2）抗体）抗体检测试纸卡检测试纸卡3 3、潜血（、潜血（HbHb）检测）检测试纸卡试纸卡4 4、轮状病毒（、轮状病毒（F-RVF-RV， A A群群）抗原检测）抗原检测试纸卡试纸卡5 5、H HCGCG检测试纸检测试纸卡卡6 6、降钙素原

4、（、降钙素原（PCTPCT）检测）检测试纸试纸卡卡7 7、甲、甲/ /乙型流感病毒抗原检测乙型流感病毒抗原检测试纸试纸卡卡、达百种、达百种2015-10大兴区质控中心专项4临床实验室胶体金检测条（卡）常用种类2015-10大兴区质控中心专项5产品种类之一 认真阅读产品说明书，了解方法学种类认真阅读产品说明书，了解方法学种类 熟知熟知产品检测灵敏度产品检测灵敏度 及时告知临床方法局限性：限于及时告知临床方法局限性：限于初步筛查初步筛查； 限于操作人员限于操作人员判断经验；限于判断经验；限于单一项目检测单一项目检测2015-10大兴区质控中心专项6检测原理快速诊断快速诊断技术之一：技术之一：免疫胶

5、体免疫胶体金金免疫层析分析检测免疫层析分析检测 (colloidal gold immunochromatography assay, GICA ) 是是以以胶体金胶体金作为示踪标志物应用于抗原作为示踪标志物应用于抗原抗体检抗体检测的测的一种新型的一种新型的免疫免疫标记技术标记技术 有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法见下面图示3-52015-10大兴区质控中心专项7方法学图示 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，形成胶体金标记物。 2015-10大兴区质控中心专项8衬板样品垫金标垫吸收垫膜胶体金免疫层析试纸条

6、的构成图示图示12015-10大兴区质控中心专项9标本处理后，标本处理后，加样行进方向加样行进方向图示图示22015-10大兴区质控中心专项10夹心法反应原理夹心法反应原理C 阴性B 阳性图示32015-10大兴区质控中心专项11间接法反应原理间接法反应原理C 阴性B 阳性图示图示42015-10大兴区质控中心专项12阳性 弱阳性阴性竞争抑制法反应原理检测线颜色强度与SD（磺胺嘧啶）浓度负相关图示图示52015-10大兴区质控中心专项13抗原抗原/抗体检测抗体检测试纸试纸卡卡 两条（两条（红红或紫或绿或紫或绿）线，）线， 阳性阳性 一条线，一条线， 阴性阴性 无线，无线， 实验失败或试纸失效实

7、验失败或试纸失效2015-10大兴区质控中心专项14结果判定结果判定2015-10大兴区质控中心专项15GICAGICA优势 GICA GICA确实是确实是一一种便捷检测种便捷检测方法，具方法，具有简单快速有简单快速、通过肉眼或小型台式仪判、通过肉眼或小型台式仪判定定结果、无需复杂操作技巧和特殊设备结果、无需复杂操作技巧和特殊设备、无无污染、携带方便等污染、携带方便等优点优点 限于初步限于初步筛查筛查限于操作人员限于操作人员判断判断经验经验限于单一项目检测，目前已有组合项目限于单一项目检测，目前已有组合项目试条出现，如甲试条出现，如甲/ /乙型流感病毒检测乙型流感病毒检测2015-10大兴区质

8、控中心专项16GICAGICA技术技术问题 最大问题：没有室内质控，其结果解释只作筛查，不作疾病诊断依据， IQC质控豁免试验。提醒临床多结果核对，例如血常规，CRP，PCT， 室间比对：卫生部或北京市临检中心发已知仪器结果质控品，各家发回结果给予EQA评价2015-10大兴区质控中心专项17室内/室间质控 术前或孕期术前或孕期12周检查或创伤输血：周检查或创伤输血： 艾梅乙检查已纳入必检项目，择期手术或正常孕艾梅乙检查已纳入必检项目，择期手术或正常孕检标本可采用检标本可采用EIA或或MEIA或或ECL方法上机检测方法上机检测 急诊情况，快速筛查使用试条检测，如筛查结果急诊情况，快速筛查使用试

9、条检测，如筛查结果是阴性，血清学是阴性，血清学仪器仪器复检结果是阳性结果，复检结果是阳性结果，临床大临床大夫问：夫问：是否存在实验室检测方法学问题是否存在实验室检测方法学问题 回答回答：肯定会这种情况，方法学自身局限性问题肯定会这种情况，方法学自身局限性问题2015-10大兴区质控中心专项18案例一HIV（1/2）抗体检测试条1513-1514阳性?（胶体硒法）1513-1514阳性（胶体金法）2015-10大兴区质控中心专项192015-10大兴区质控中心专项20仔细观察后！案例二某公司便潜血检测试条某公司便潜血检测试条 HGB检测浓度检测浓度: 试剂试剂标定标定灵敏灵敏度度0.2ug/ml

10、(检测范围检测范围0.22000ug/ml=0.00020.2g/L)换算公式换算公式: 1ug/ml=0.000001g/0.001L=0.001g/L 判定判定： 预试验预试验0.2ug/ml根本肉根本肉眼看不出。眼看不出。所以所以科室科室要求只要要求只要看见检测线就看见检测线就报阳性报阳性HBsAg检测试条检测试条 曾验证曾验证4家市场上最常用试家市场上最常用试条检测灵敏度条检测灵敏度 实验发现，仅美国雅培试条实验发现，仅美国雅培试条能检出说明书标定检测灵敏能检出说明书标定检测灵敏度，其他试条均捡不出度，其他试条均捡不出2015-10大兴区质控中心专项21案例三轮状病毒抗原检测试条轮状病

11、毒抗原检测试条 曾收集曾收集150例例婴幼儿婴幼儿腹泻便标本，腹泻便标本，进口试条快筛获得阳性与阴性结进口试条快筛获得阳性与阴性结果，再经过聚丙烯酰胺凝胶电泳果，再经过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）法）法检测轮状病毒基因检测轮状病毒基因组组RNA，发现阴性标本中，发现阴性标本中有有3例例C群群轮状病毒血清型轮状病毒血清型 阳性均为阳性均为A群群轮状病毒血清型，感轮状病毒血清型，感染人群中主要血清型染人群中主要血清型甲型甲型/乙型流感乙型流感病毒病毒抗原检测试条抗原检测试条 市场上最常用产品标注：市场上最常用产品标注：甲型甲型流感流感病毒病毒：Flu A (A2/Aichi/2/68,H3N2)

12、 乙型乙型流感流感病毒：病毒：Flu B (Hong Kong5/72) 事实上，流行毒株事实上，流行毒株 Flu A有有16个亚型；个亚型； Flu B 有有5个亚型个亚型；检测检测阳检率与流行阳检率与流行株株 紧密紧密相关相关2015-10大兴区质控中心专项22解决对策(1-1)方法学互相补充方法学互相补充 多种方法多种方法（厂家（厂家）验证）验证 必要必要时复查（时复查（尤其遇到临尤其遇到临床对阴性结果质疑床对阴性结果质疑）或多或多次不同批号试条次不同批号试条核查核查 HIV抗体检测流程为典范抗体检测流程为典范2015-10大兴区质控中心专项23以以CDC结果结果报告临床报告临床2015

13、-10大兴区质控中心专项24解决对策(1-2)质疑时，质疑时，双双法验证法验证解决对策(2)产品选购目标产品选购目标 改良最好结果是用仪器测定，去除人为干扰。例如PCT，用血清50ul或全血75ul； 性能指标与临床意义：性能指标与临床意义： 检测范围 0.1-100ng/ml 灵敏度 0.1ng/ml 参考范围：0.5ng/ml仪器法参考性强仪器法参考性强2015-10大兴区质控中心专项25 免疫方法学遇到技术问题，在这一技术领域几乎都免疫方法学遇到技术问题，在这一技术领域几乎都能遇到，须事先想到：能遇到，须事先想到： 例一 便潜血试条：柏油便阴性，抗原过多后带现象，稀释后再做 为强阳性 例

14、二 肺炎支原体试条：自身免疫型疾病患者可能出现假阳性干扰 例三 Flu A/B试条：取材不足，假阴性。临床质疑，可以重新再送 一次，反复多次 例四 工艺问题： RV一盒试条多一半无C线，更换批次正常； 潜血检测两家医院结果不一致，更换批次一致2015-10大兴区质控中心专项26解决对策(3) 项目操作规范一致性培训项目操作规范一致性培训 无论如何开展正式实验前，须让全体参加发报告的检验人员每人操作一遍，最好能覆盖阳性与阴性标本 目的：目的：发现纠正个人习惯性操作与随意性，防止造成边缘性结果有出入。例如使用移液器手法；重要试剂从冰箱回到室温时间；目测判断标准；观察结果时间（计时器定时）2015-10大兴区质控中心专项27解决对策(4) 与与临床经常沟通，检验项目临床经常沟通，检验项目手册告知该方法检测手册告知该方法检测结果结果可靠性可靠性，强调临床质疑可强调临床质疑可复检（更换批次！）复检（更换批次！） 强调低浓度抗原或抗体，因其检测下线灵敏度受限：强调低浓度抗原或抗体，因其检测下线灵敏度受限： 1）报告注明：XXXXX试验筛查 2）建议临床多次开单复检，便潜血 3）关注流行季节特点：RV试条或Flu A/B试条 4）重要检验项目，须同时进行同期预留标本血清学检测， Anti-HIV或梅毒特异性抗体/RPR 5) 4周后血清抗体复查2015-10大兴区质控中心专项28解决对