生物分离技术综合实验_ ppt课件

1、生物分别技术综合实验生物分别技术综合实验植物色素提取、分别及定量与初步鉴定植物色素提取、分别及定量与初步鉴定实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备一、实验目的一、实验目的:了解有机溶剂提取目的物质植物色素的过程了解有机溶剂提取目的物质植物色素的过程与本卷须知。并了解目的物质提取过程中的主与本卷须知。并了解目的物质提取过程中的主要影响因子及其相互关系。要影响因子及其相互关系。二二 实验原理：实验原理：用有机溶剂法从原料中提取黄酮类成分用有机溶剂法从原料中提取黄酮类成分,利用黄酮利用黄酮类物质在热乙醇中溶解度较高类物质在热乙醇中溶解度较高,将其提取出。将其提取出。实验一、实验一、 植物色素

2、的制备植物色素的制备 三、三、 仪器仪器 高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管假设干、高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管假设干、中低速离心机、过滤安装漏斗和滤纸，中低速离心机、过滤安装漏斗和滤纸，250ml磨口椎形瓶磨口椎形瓶6个个/每组；每组；10ml容量瓶容量瓶4个个/组。组。 四、试剂四、试剂 配配40%80ml/组、组、70%450 ml/组的乙醇，组的乙醇，10硝酸铝溶液硝酸铝溶液50ml/组，组，5亚硝酸钠亚硝酸钠50 ml/组组, 质量分数质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠200 ml/组。组。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 五、操作五、操作 1、不同浸提剂浓度对黄

3、酮提取率的影响、不同浸提剂浓度对黄酮提取率的影响 1.1取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组组2.5克每组，用克每组，用8倍体积指倍体积指料液比料液比v/m为为8：1即即20ml的的40%、70%，95%的乙醇浸提的乙醇浸提温度温度70，时间，时间1.5h，浸提时每隔，浸提时每隔15 min用手轻摇用手轻摇2min。浸提所得粗液进展离心浸提所得粗液进展离心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 1.2 精细汲取上清液精细汲取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后

4、，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提剂浓度。吸光度值，得出最优的浸提剂浓度。 按三个程度，每个程度做两组操作，即每个单要素条件得六按三个程度，每个程度做两组操作，即每个单要素条件得六个数据。个数据。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 2、不同浸提时间对黄酮提取率的影响、不同浸提时间对黄酮提取率的影响 2.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组组2

5、.5克每组，用按克每组，用按8：1指指料液比料液比v/m的的70%乙醇浸提温度乙醇浸提温度70，浸提时间分别为，浸提时间分别为90min、120min，150min，浸提时每隔，浸提时每隔15分钟用手轻摇分钟用手轻摇2min。浸提所得粗液进展离心浸提所得粗液进展离心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 2.2 精细汲取上清液精细汲取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝酸铝硝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量

6、分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。 按三个程度，每个程度做两组操作每个程度做两组操作，按三个程度，每个程度做两组操作每个程度做两组操作，即每个单要素条件做六个数据。即每个单要素条件做六个数据。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 3、不同料液比对黄酮提取率的影响、不同料液比对黄酮提取率的影响 3.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组组2.5克每组，用按克每组，用按6：1，8：1，10：1指料液比指料液比v

7、/m，即，即ml/克的克的70%乙醇浸提温度乙醇浸提温度70，时间，时间1.5h，浸提时每隔，浸提时每隔15分钟用手轻摇分钟用手轻摇2min。浸提所。浸提所得粗液进展离心得粗液进展离心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 3.2 精细汲取上清液精细汲取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀

8、，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，按吸光度值，按V*A值的大小比较得出最优的料液比。值的大小比较得出最优的料液比。 选做部分：假设出现从选做部分：假设出现从6：18：110：1的的V*A继续平继续平稳添加，那么可以继续加大料液比可以为稳添加，那么可以继续加大料液比可以为12：1，14：1,直到找到拐点位置的最正确料液比。直到找到拐点位置的最正确料液比。 实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 六、实验本卷须知六、实验本卷须知 1 1、将本实验中一切的乙醇提取的浸提液集中起来一定要、将本实验中一切的乙醇提取的浸提液集中起来一定要记下这些浸提液所对应的原

9、料质量记下这些浸提液所对应的原料质量M M，量取其总体积，量取其总体积V V，将提取液分出将提取液分出50ml50ml，将这，将这50ml50ml和其他色素液分置于两个烧和其他色素液分置于两个烧杯中，然后将两个烧杯在杯中，然后将两个烧杯在44左右的低温下并用保鲜膜封锁左右的低温下并用保鲜膜封锁保管按如今的温度，放在台子上避光保管即可，以供保管按如今的温度，放在台子上避光保管即可，以供后面纯化实验运用。后面纯化实验运用。 2 2、在色素提取过程中，每隔一段时间要进展轻摇，摇摆时、在色素提取过程中，每隔一段时间要进展轻摇，摇摆时幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，呵斥原料损失。幅度要小，以免使提取原

10、料粘在壁上，呵斥原料损失。 3 3、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣要用要用V V* *A,A,即：体积即：体积* *吸光度值。吸光度值。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 六、实验本卷须知六、实验本卷须知 4 4、离心前一定要仔细平衡好，两管质量平衡误差应在、离心前一定要仔细平衡好，两管质量平衡误差应在0.10.1克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护以免发惹事故。以免发惹事故。 5 5、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心、实验当中的提取液一定要全部从磨口

11、锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，不要将底部的沉降物倒出来。不要将底部的沉降物倒出来。 6 6、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，假设、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，假设乙醇蒸发较快时如：乙醇蒸发较快时如：80%80%以上的高浓度乙醇提取时，以上的高浓度乙醇提取时，可以思索在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇可以思索在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇提取时没有必要加蛇形管。提取时没有必要加蛇形管。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 7、上样液的制备该步骤亦可以在实验二中完成、上样液的制备该步

12、骤亦可以在实验二中完成 将实验一中所得的一切浸提液用烧杯放在将实验一中所得的一切浸提液用烧杯放在100水浴中浓缩水浴中浓缩到到20ml，将所得浓缩液置于，将所得浓缩液置于50ml或更大的分液漏斗中，或更大的分液漏斗中，按等量体积参与石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，按等量体积参与石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，放在得下层黄酮液，放在90水浴中浓缩，浓缩至水浴中浓缩，浓缩至10ml详细操详细操作时，可先用大烧杯进展浓缩，待溶液约作时，可先用大烧杯进展浓缩，待溶液约50ml左右时，改用左右时，改用50ml小烧杯进展浓缩，这样便于进展定量，备用。小烧杯进展浓缩，这样便于进

13、展定量，备用。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备 8、丈量吸光度时，一定要设空白对照即把除、丈量吸光度时，一定要设空白对照即把除1ml样样液以外的其他液以外的其他9ml亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水水+1ml乙醇乙醇 9、由于各提取液浓度较大，在丈量吸光度前，一定要、由于各提取液浓度较大，在丈量吸光度前，一定要将待测液取出将待测液取出1mL，稀释到，稀释到10mL后，再按前面后，再按前面A值测值测定方法进展测定。定方法进展测定。实验一、实验一、 植物色素的制备植物色素的制备附录附录 1 1、实验前面预备同窗们不需求做：、实验前面预备同窗们不需求做

14、： 1 1、原料的制备、原料的制备 用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过4040目以上，目以上，40-6040-60目，目，60-7060-70目，目，70-8070-80目，目，80-9080-90目，目，90-10090-100目，目，100100目以上，筛后目以上，筛后备用。备用。 2 2、规范曲线的绘制：、规范曲线的绘制： 精细称取芦丁对照品精细称取芦丁对照品200 mg200 mg，用体积分数，用体积分数( (下同下同)70)70乙醇溶乙醇溶解，定容至解，定容至100 mL100 mL容量瓶中摇匀。精细移取容量瓶中摇匀。精细移取10 mL10 mL芦丁乙醇

15、液芦丁乙醇液于于25 mL25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，得到容量瓶中，用蒸馏水定容，得到0.8 mg0.8 mgmLmL规范溶液。规范溶液。精细汲取规范溶液精细汲取规范溶液0.00.0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.0 mL1.0 mL，分别，分别置于置于10 mL10 mL容量瓶中，加质量分数容量瓶中，加质量分数5 5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 6 minmin后，加质量分数后，加质量分数1010硝酸铝硝酸铝0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min，再加质，再加质量分数量分数4.34.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL4

16、mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 15 minmin，进展丈量，在，进展丈量，在510nm510nm处有最大吸收波长。以测定结果得处有最大吸收波长。以测定结果得芦丁浓度与吸光度的规范曲线：芦丁浓度与吸光度的规范曲线：Y=0.1035Ad-0.0016(YY=0.1035Ad-0.0016(Y：芦丁：芦丁浓度，浓度，mgmgmlml；A A：吸光值：吸光值) )，R =0.9999R =0.9999。实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 一、目的一、目的 学习掌握柱层析法分别纯化目的物质植物色素的方法学习掌握柱层析法分别纯化目的物质植物色素的方法和

17、操作。和操作。 二、原理二、原理 柱层析是比较理想的分别黄酮类色素的方法柱层析是比较理想的分别黄酮类色素的方法,其原理是经其原理是经过基质分子与黄酮类化合物分子上的酚羟基构成氢键缔合过基质分子与黄酮类化合物分子上的酚羟基构成氢键缔合物而产生作用物而产生作用,其作用力强弱取决于黄酮类化合物分子上其作用力强弱取决于黄酮类化合物分子上羟基的数目与位置以及洗脱剂与黄酮类化合物和基质之间羟基的数目与位置以及洗脱剂与黄酮类化合物和基质之间构成氢键缔合才干的大小。常用不同比例的水和醇混合溶构成氢键缔合才干的大小。常用不同比例的水和醇混合溶剂作为洗脱剂，能胜利分别各种类型的黄酮。剂作为洗脱剂，能胜利分别各种类

18、型的黄酮。实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 三、器材与试剂三、器材与试剂 1、 实验仪器实验仪器 层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。 2、 实验试剂实验试剂 石油醚、石油醚、40%乙醇乙醇200ml/组、组、70%乙醇乙醇300ml/组、组、95%乙醇乙醇200ml/组、基质。组、基质。 3 、实验资料、实验资料 银杏叶提取液银杏叶提取液实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 四、操作四、操作 1、上样液的制备该步骤亦可以在实验一中完成、上样液的制备该步骤亦可以在实验一中完成 将实验一中所得的一切浸提液用烧杯放在将实验一中所得的一

19、切浸提液用烧杯放在100水浴中浓缩水浴中浓缩到到20ml，将所得浓缩液置于，将所得浓缩液置于50ml或更大的分液漏斗中，或更大的分液漏斗中，按等量体积参与石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚按等量体积参与石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，放在层，得下层黄酮液，放在90水浴中浓缩，浓缩至水浴中浓缩，浓缩至10ml详细操作时，可先用大烧杯进展浓缩，待溶液约详细操作时，可先用大烧杯进展浓缩，待溶液约50ml左左右时，改用右时，改用50ml小烧杯进展浓缩，这样便于进展定量，小烧杯进展浓缩，这样便于进展定量，备用。备用。 2、基质的的预处置：、基质的的预处置： 称取所需的大孔吸附树脂

20、称取所需的大孔吸附树脂 (湿重湿重)，以，以95乙醇浸泡乙醇浸泡24 h，充分溶胀后用乙醇湿法装柱，充分溶胀后用乙醇湿法装柱， 实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化3 装柱：装柱：将酒精浸泡好的基质约将酒精浸泡好的基质约40ml指混匀外形下取样，经过漏斗缓慢倒入指混匀外形下取样，经过漏斗缓慢倒入柱中柱中曾经装好柱中柱中曾经装好10ml95%乙醇，边加边用木夹子轻敲柱子，同时乙醇，边加边用木夹子轻敲柱子，同时用竹签悄然压实。流速应控制在用竹签悄然压实。流速应控制在20滴滴/min，待装至，待装至20cm柱高，再加与柱柱高，再加与柱壁完全吻合的滤纸片，接着参与壁完全吻合的滤纸片，接

21、着参与1.0 cm高海沙或石英砂。留意，在高海沙或石英砂。留意，在整个装柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否那么会出现断痕，气泡等。假整个装柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否那么会出现断痕，气泡等。假设柱子无砂芯，要在装柱前加一小团大拇指指甲大小的棉花封住柱子，设柱子无砂芯，要在装柱前加一小团大拇指指甲大小的棉花封住柱子，以防基质漏出。以防基质漏出。4、平衡：、平衡：用用95%乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液，待流出的乙醇液与去离子水以乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液，待流出的乙醇液与去离子水以1：3的体积比混合，振摇不显白色浑浊时终了洗柱已洗好，不用做，的体积比混合，振摇不显白色浑浊时终了洗柱已洗好，

22、不用做，用纯化水将柱中树脂洗至无醇味后备用。留意，一切醇洗液需回收到大用纯化水将柱中树脂洗至无醇味后备用。留意，一切醇洗液需回收到大的烧杯里，水洗液不用回收的烧杯里，水洗液不用回收5、上样与吸附：、上样与吸附： 取浓缩液取浓缩液10ml上柱，吸附上柱，吸附20min流速流速20滴滴/min，等样品液完全流入基，等样品液完全流入基质中后，用质中后，用3倍柱体积约倍柱体积约150ml去离子水洗脱。去离子水洗脱。实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 6、洗脱解吸附：、洗脱解吸附： 6.1 依次用依次用40%200ml流速约流速约30滴滴/min、70%300ml流流速约速约20滴滴/

23、min、95%200ml流速约流速约40滴滴/min乙醇分别乙醇分别进展洗脱，将试管放在试管架上按序接纳洗脱液，每管搜集进展洗脱，将试管放在试管架上按序接纳洗脱液，每管搜集 8ml左右洗脱液左右洗脱液 6.2 从第一管起，每接纳从第一管起，每接纳3管，那么精细汲取第管，那么精细汲取第1、4、7、10等管中的洗脱液等管中的洗脱液1.0 mL，置于，置于10 mL容量瓶中，加质量容量瓶中，加质量分数分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水

24、至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得波长下测得其吸光度值；其吸光度值；实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 6、洗脱解吸附：、洗脱解吸附： 6.3 确定黄酮所在的主要流分后，将吸光度值在确定黄酮所在的主要流分后，将吸光度值在0.1以上含以上含0.1的一切管中的洗脱液集中起来，测出其总体积的一切管中的洗脱液集中起来，测出其总体积V纯化纯化接着，可直接测定纯化液的接着，可直接测定纯化液的A值，预留值，预留50ml纯化液，用纯化液，用保鲜膜封锁后放在保鲜膜封锁后放在4中低温保管，并将其他的纯化液置于中低温保管，并将其他的纯化液置于90水

25、浴中浓缩至水浴中浓缩至10ml，用保鲜膜封锁后放在，用保鲜膜封锁后放在4中低温避中低温避光保管，备用。光保管，备用。实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 五、实验本卷须知五、实验本卷须知 1 1、装柱前在柱子底部加一小棉花球。、装柱前在柱子底部加一小棉花球。 2 2、装柱时，边加树脂边用木质棒或橡胶棒轻、装柱时，边加树脂边用木质棒或橡胶棒轻敲柱子，使基质渐渐下沉敲柱子，使基质渐渐下沉 。 3 3、装柱要求延续、均匀、无纹格、无气泡，外表、装柱要求延续、均匀、无纹格、无气泡，外表平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂外表。平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂外表。 4 4、

26、要留意及时开启和封锁旋纽，即在上一种液体、要留意及时开启和封锁旋纽，即在上一种液体刚好没入基质时，才开场参与下一种液体，且一定刚好没入基质时，才开场参与下一种液体，且一定要用玻棒引流。要用玻棒引流。实验二、植物色素的分别纯化实验二、植物色素的分别纯化 五、实验本卷须知五、实验本卷须知 5 5、要留意控制流速，不宜过快。、要留意控制流速，不宜过快。 6 6、在参与好样品后在洗壁前就要接纳洗、在参与好样品后在洗壁前就要接纳洗脱液。脱液。 7 7、柱子预处置时的流出液用三角瓶或烧杯接、柱子预处置时的流出液用三角瓶或烧杯接纳，而上样后的色素洗脱液那么用试管接纳。纳，而上样后的色素洗脱液那么用试管接纳。

27、 8 8、所预留的纯化液、所预留的纯化液50ml50ml和和10ml10ml，必需是在一，必需是在一切洗脱下来的切洗脱下来的A A值大于值大于0.10.1的纯化液混匀后才干的纯化液混匀后才干取液。取液。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 一、目的一、目的 用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，同时测定黄酮的含量和最后的得率。同时测定黄酮的含量和最后的得率。 二、原理二、原理 黄酮化合物分子构造中具有黄酮化合物分子构造中具有C5、C6位的酚羟基或邻二位的酚羟基或邻二酚羟基可与金属盐试剂铝盐生成有色络合物，黄酮络酚

28、羟基可与金属盐试剂铝盐生成有色络合物，黄酮络合物在合物在510nm处有较大的吸收峰，可由分光光度法测处有较大的吸收峰，可由分光光度法测出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些试剂发生特殊的发色反响来检测黄酮。试剂发生特殊的发色反响来检测黄酮。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 三、实验器材三、实验器材 1、实验仪器：分光光度计，烘箱，电子天平，、实验仪器：分光光度计，烘箱，电子天平，10ml 容量容量瓶瓶1支支/组，组，100m容量瓶容量瓶1支支/组，移液管假设干。组，移液管假设干。 2、实验试剂：、实验试剂：

29、80%的氢氧化钠质量分数溶液，的氢氧化钠质量分数溶液，10%的的FeCl3，10%的的FeCl2溶液，溶液，2%NaBH4溶液，甲醇。溶液，甲醇。 3、实验资料：实验二中所得的洗脱液的浓缩液总体积、实验资料：实验二中所得的洗脱液的浓缩液总体积为为10ml。 实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 四、实验步骤四、实验步骤 一物质初步鉴定操作样液是实验二中纯化液浓缩一物质初步鉴定操作样液是实验二中纯化液浓缩而来的而来的10ml： 1、在所纯化的提取液、在所纯化的提取液2ml中参与中参与10%的氢氧化钠质量的氢氧化钠质量分数溶液分数溶液2ml，假设色素液马上由黄色变为深黄

30、色；那，假设色素液马上由黄色变为深黄色；那么认定黄酮化合物的存在。么认定黄酮化合物的存在。 2、在所纯化的提取液两份，各为、在所纯化的提取液两份，各为2ml，分别参与，分别参与10%的的FeCl3，Fe Cl2；假设发现两种离子都使色素溶液变为蓝；假设发现两种离子都使色素溶液变为蓝绿色，那么可认定黄酮化合物的存在。绿色，那么可认定黄酮化合物的存在。 3、硼酸氢钠反响：取黄酮纯化液、硼酸氢钠反响：取黄酮纯化液2ml，再加等量的，再加等量的2%NaBH4的甲醇溶液的甲醇溶液1min后加浓盐酸买来即用，不后加浓盐酸买来即用，不需调配数滴，假设有紫色或紫红色出现，那么阐明此需调配数滴，假设有紫色或紫红

31、色出现，那么阐明此黄酮纯化液中有二氢黄酮存在。黄酮纯化液中有二氢黄酮存在。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 二目的物质得率确实定：二目的物质得率确实定： 1、规范曲线及方程和最正确吸收波长用实验一的结果。、规范曲线及方程和最正确吸收波长用实验一的结果。 2、从实验二所得的预留在冰箱中的、从实验二所得的预留在冰箱中的10ml纯化液中精细汲纯化液中精细汲取取1ml，留意，假设储存液有沉降景象，那么可进展，留意，假设储存液有沉降景象，那么可进展40 加热，待其廓清后再进展光度测定，但假设是延续实验，加热，待其廓清后再进展光度测定，但假设是延续实验，就不用在冰箱中保管而

32、是在实验二中直接测定其就不用在冰箱中保管而是在实验二中直接测定其A值，值，放置于放置于10 mL容量瓶中，冰箱中取出放置一定时间，使之容量瓶中，冰箱中取出放置一定时间，使之到达室温后，按前面方法，在到达室温后，按前面方法，在510nm波长下测得其吸光度波长下测得其吸光度值值A。 此步骤亦可在实验二中直接测定。此步骤亦可在实验二中直接测定。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定二目的物质得率确实定：二目的物质得率确实定：将将A样品代入规范曲线方程样品代入规范曲线方程Y=KA+b(Y：黄酮浓度，：黄酮浓度，gL；A：吸：吸光值，用各组本人测得的方程光值，用各组本人测得的方

33、程)，可以得到待测样品的黄酮浓度，可以得到待测样品的黄酮浓度，C纯化纯化 单位为单位为mg/ml。C纯化纯化=Y*10*n由于测定浓度过程中，待测液由由于测定浓度过程中，待测液由1ml定容到定容到10ml，n为实验过程中待测液的稀释倍数为实验过程中待测液的稀释倍数黄酮得率黄酮得率%=测得的黄酮含量测得的黄酮含量mg/原料总质量原料总质量100% = C纯化纯化 V纯化纯化mgM1000mg100% M代表代表V所对应的原料的总质量。将书本公式中的所对应的原料的总质量。将书本公式中的“V提取液提取液/200 去掉去掉 ，由于实验二中，由于实验二中10ml浓缩液对应的是一切提取液。浓缩液对应的是一

34、切提取液。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 三目的物质的纯度测定：三目的物质的纯度测定： 取实验一中所得的提取液取实验一中所得的提取液50ml，放置在曾经烘干，并，放置在曾经烘干，并曾经称好质量为曾经称好质量为m1的小烧杯中，放在真空枯燥箱中枯的小烧杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，枯燥到恒重后，称其分量燥，枯燥到恒重后，称其分量m2，得色素浸膏分量为，得色素浸膏分量为m2 m1，再根据上面第二中的公式算出总，再根据上面第二中的公式算出总黄酮含量黄酮含量m总，那么其纯度为：总，那么其纯度为： 目的物质的纯化前纯度目的物质的纯化前纯度= C纯化纯化50 100% m2 m1实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 三目的物质的纯度测定：三目的物质的纯度测定： 取实验二中所得的纯化液取实验二中所得的纯化液50ml，放置在曾经烘干，并曾，放置在曾经烘干，并曾经称好质量为经称好质量为m3的小烧杯中，