习题2核酸分子杂交技术

1、第二章核酸杂交技术E原位杂交（一）名词解释1 .原位杂交2 .核酸分子杂交技术3 .探针4 .反向点杂交5 .缺口平移标记法6 .随机引物标记法7 .末端标记法8 .Southernblot杂交9 .荧光原位杂交10 .菌落杂交（二）选择题A型题】1 .DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（AGC含量BA-T含量CA-G含量DA-C含量ET-G含量2 .液相杂交是下列哪一种（）ASouthem印迹杂交BNorthem印迹杂交CDot印迹杂交DSlot印迹杂交ERPA实验3 .研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A菌落杂交BSouthern杂交CNorthern杂交D液相杂交4 .Southern

2、杂交通常是指（）ADNA和RNA杂交BDNA和DNA杂交CRNA和RNA杂交D蛋白质和蛋白质杂交EDNA和蛋白质杂交5 .最容易降解的核酸探针是（）AcDNA探针BdsDNA探针CssDNA探针DgDNA探针E:RNA6 .探针基因芯片技术的本质就是（）A核酸分子杂交技术B蛋白质分子杂交技术C聚合酶链反应技术D基因重组技术E酶切技术7 .DNAf针的长度通常为（）A10002000个碱基B5001000个碱基C400500个碱基D100400个碱基E.<100个碱基8 .寡核昔酸探针的最大的优势是（）A杂化分子稳定B可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列C易标记D易合成E易分解9 .在Sout

3、hern印迹中常用的核酸变性剂是（）A甲醛B乙醛C氢氧化钠D碳酸钠E盐酸10 .盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A脆性大B本底低C共价键结合D非共价键结合E高结合力11 .最常用的DNA探针标记方法是（）A随机引物B切口平移C3'-末端标记D5-末端标记EPCR法12 .为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过13 .5'一末端的DNA探

4、针标记主要依靠的酶是（）AT4多聚核昔酸激酶B末端转移酶CAKPDDNApolIIEDNApol14 .血友病是一种（）A染色体病BX连锁遗传病C先天性代谢缺陷病D先天畸形E常染色体隐性遗传病15 .预杂交中最常用的封闭剂是（）ADenhavdt's溶液B5XTBEC1XTBED1XTAEE1XTPE16 .检测目标是RNA的技术是（）ASouthern杂交BWestern杂交CNorthern杂交DEastern杂交E杂交淋巴瘤17 .检测靶序列是DNA的技术是（）ASouthern杂交BWestern杂交CNorthern杂交DEastern杂交E杂交淋巴瘤18 .DNA双螺旋之间

5、氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称（）A变性B复性C复杂性D杂交E探针19 .具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称()A变性B复性C复杂性D杂交E探针20 .一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称()A变性B复性C复杂性D杂交E探针21 .点/狭缝杂交可以用于()A快速确定是否存在目的基因B不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C用于基因定位分析D阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测22 .放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是()A-70B-30CC-20

6、D-10E4cA不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B检测的目标是RNAC用于基因定位分析D阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测24 .寡核昔酸探针的Tm简单计算公式为()ATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T)25 .Northern印迹杂交可以用于()A快速确定是否存在目的基因B不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C检测的目标是RNAD用于基因定位分

7、析E阳性菌落的筛选2626 .荧光原位杂交可以用于()A快速确定是否存在目的基因B检测的目标是RNAC用于基因定位分析D阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测27 .以等位基因特异的寡核昔酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探23.Southern印迹杂交可以用于()A正常人针接合，则该样本为()B杂合体患者C纯合体患者D携带者E不能确定28 .在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显（）ApH为35BpH为45CpH为56DpH为59EpH为81129 .一般来说，设计的寡核昔酸探针的长度为（）A2-10bpB17-50bpC60-100bpD100-200bpE200-30

8、0bp30 .变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是（）A甲酰胺B氢氧化钠C浓盐酸D稀盐酸E甲醇31 .下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针BcDNA探针不包含内含子CcDNA探针不包含大量的高度重复序列D由于cDNA探针自身所携带的poly（dT）,有可能产生非特异性杂交的问题EcDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32.一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行（）A1525cB1015cC510cD3040cE4050c33 .对于寡核昔酸探针，杂交温度一般般低于其Tm值（）A3040cB2030cC1530

9、cD1015cE5c34 .一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少C下进行（）A90B80C75D68E5835 .在含50湖酰胺时，杂交反应在多少C进行（）A70B65C55D42E3536 .杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%则Tm值下降（）A0.5CB11.5CC22.5CD33.SCE44.5C37 .RNA/RNA勺杂交体的Tm值一般应增加（）A15cB510cC1015cD1520cE2025c38 .杂交的时间一般为。11/2的（）A4B13倍C35倍D58倍E10倍以上39 .为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入（）AssDNAB1XSSCC10>

10、SSCD5灯BECE50灯AE40 .随机引物法标记探针常用的AGC、T聚合体的数目是（）A4个B6个C8个D10个E12个【X型题】41 .下列哪些是影响DNA复性的因素（）ADNA浓度BDNA的分子量C温度D碱基组成EDNA的来源42 .DNA探针的优点有（）A制备方法简单BDNA探针易降解CDNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择D克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽E单链，不存在竞争性的自身复性43 .以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）ADNA加尾法BDNA切口平移标记法C随机引物标记法E尾端标记44 .关于DNA变性的描述正确的是（）A二级结构破B一级结构破坏C黏度降低D

11、生物活性丧失E浮力密度增加45 .以下哪些因素可以使DNA变性（）A增加溶液的浓度B加热C改变溶液的pH值D有机溶剂E冷藏46 .预杂交中，下列能起封闭作用的是（）AssDNABBSAC小牛胸腺DNAD脱脂奶粉EDTT47 .变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A粘度下降B沉降速度增加C浮力下降D紫外光吸收增加E紫外光吸收减少48 .下列物质适于非放射性探针标记的是（）AAKPBACPC生物素D地高辛E荧光素49 .关于人工合成的寡核昔酸探针，下列描述正确的是（）A特异性高B可依赖氨基酸序列推测其序列D末端标记C分子量小E可用末端转移酶进行5'端标记预杂交55.整个杂交反应主要以下

12、哪些步骤组成（D可用于相似基因顺序差异性分析AB采用大片段探针少量的反应体积CD洗脱固定C高反应温度E转移D不断的振摇56.放射自显影可以被分为（）E大量的反应体积A直接放射自显影51.关于切口平移法下述正确的是（）B氧化显影AB可标记线性DNA可标记松散螺旋DNAC封闭显影C可标记超螺旋DNAD间接放射自显影D可标记存在缺口的双链DNAE固定显影E可标记随机引物57.()52.以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）AB快速、高效需要特殊设备A毛细转移C缓冲?用TA豉TBEB真空转移D可产生高温C负压转移E常用NC膜作为支持介质D电泳转移58.预杂交的主要目的是（）E冷冻转移A平衡滤膜53

13、.关于随机引物法标记探针下述正确的是（）B封闭非特异性杂交的位置AB可标记单链DNA可标记双链RNAC提高杂交信号的检测效率C可标记单链RNAD便于从滤膜上除去探针D比活性高达108cpm/iigDNA以上E清除用于杂交反应检测的显色物质E常经过SephadexG-50纯化才可使用59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是54.可以采用哪些方法来标记探针（）()A对人体危害小A杂交标记法B需要特殊设备B切口平移标记法C可长时间使用C5'-末端的标记DE灵敏度不如放射性探针重新杂交新探比较容易D3'-末端的标记杂交50.通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（)60.对于改变DNA

14、片段长度的突变，可以由于缺E化学法延长标记失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（）APCR扩增BRAPDCSoutherm印迹杂交DNorthern印迹杂交E以上都不是61 .重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）A菌落印迹杂交BNorthern印迹杂交CWestern印迹杂交D原位杂交E斑点杂交62 .关于RNA探针的描述下列正确的是（）A可用于随机引物标记B特异性高C灵敏度高D可用非同位素标记法标记E不易降解63 .下列哪些可以作为核酸探针使用（）AmicroRNAB单链DNAC寡核昔酸DmRNAE双链R

15、NA64.关于核酸探针的描述下列正确的是（）A可以是DNAB可以是RNAC可用放射性标记D可用非放射性标记E必须是单链核酸（三）问答题1 .根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2 .简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3 .试述Northernblot杂交的操作步骤？4 .什么是肽核酸？并简述其应用？5 .请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。6 .请叙述杂交探针标记方法的种类。7 .简述直接放射自显影的原理。参考答案退火温度下，能与各种单链DNA模板结合。首先（一）名词解释1 .原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体

16、，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。2 .核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3 .探针：是一段单链或双链核甘酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核甘酸被称为探针。4 .反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品DNA又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知

17、序列。5 .缺口平移标记法：该法是利用低浓度DNaseI在DNA双链上随机切开若干个切口，然后利用E.coliDNA聚合酶I的5'外切酶活性和5'聚合酶活性，使DNA链上的核昔酸不断被切除，而带放射性核素标记的dNTP不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。6 .随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核昔酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNaseI降解物。随机引物在较低的使双链DNA分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的4种dNTP中有一种带放射性核素标记时，在DNA聚合酶催化下合成新的带标记的

18、DNA链。反应结束后经纯化即可得到标记的DNA探针。7 .末端标记法：寡核甘酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要DNA分子的末端带有羟基，而人工合成寡核甘酸的5'端本身即为羟基。其原理是利用多核昔酸激酶将732PATP分子上7位磷酸基转移至寡核甘酸链的5'末端，末端标记也可在3'端进行。8 .Southernblot杂交：是研究DNA图谱的基本技术，在遗彳诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的方法是将标本DNA用限制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分离各酶切片段，接着，使酶切片段DNA发生变性并转印到一固相支持

19、物（通常是硝酸纤维素薄膜或尼龙膜）上，经固定后和标记探针进行杂交。这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。9 .荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依与DNA杂交，DNA与RNA杂交，RNA与RNA10 .菌落杂交：用于重组

20、细菌克隆筛选的固相杂交,杂交；根据杂交探针标记的不同，可以分为同位称菌落杂交，主要步骤包括：菌落平板培养；素杂交和非同位素杂交；根据杂交介质的不同,滤膜灭菌后放到细菌平板上，是菌落粘附到经适当可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交；其中固饱和的吸水纸上；菌斑溶解产生单练的DNA固相杂交又可以分为菌落杂交、Southern杂交、定DNA用32P标记的探针与菌落进行杂交；杂Northern杂交、点杂交和狭缝杂交。交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于X线胶片2.简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围进行放射自显影；将自显影胶片、滤膜、培养平反义核酸技术是近几年发展起来的一项新的板相比较，就可以确生物技

21、术。它是根据碱基互补的原理，设计出能特定阳性菌落。异地同相应靶基因结合的RNA或DNA,从而影响（二）选择题靶基因的转录和翻译，以达到调控靶基因表达的目【A型题】的。反义核酸技术包括反义RNA技术，反义DNA2.E3.D4.B5.E6.A技术及核酶技术。7.C8.B9.C10B11A123.试述Northernblot杂交的操作步骤?13A1415A16C17A18RNA的变性琼脂糖电泳；将硝酸纤维薄19B2021A2223A24膜放在含有RNA电泳条带的凝胶上；转印盘中25C26C27D28D29B30的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的吸水纸吸31E32A33E34D35收，从而利用毛细作用

22、将胶中的变性RNA分子36B3738B39A40.B转移到硝酸纤维薄膜上；转印完成后，使RNA分子固定到膜上；膜上的RNA分子与探针杂交;41ABCD42ACD43BC44.CACDE寸自显影5淇BCD测技术显松杂BCD带。47ABD48ACDE49ABCD50.4BCD么是肽核睇玄触其应用?52.ABD肽核酸是一种全新的DNA类似物，在20世纪53ABCD54BCD55ABC56AD57ABCD90年代由丹麦科学家发明。58AB肽核酸中以中性的肽链59ABCD60AC61ADE62晓BCD-氨基乙磬昔廉鞭取代了64DNABCD勺戊糖磷（三）问答题酸二酯键，其余结构与DNA相似。PNA可以通过

23、1.根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪碱基互补配对的形式识别并结合DNA或RNA序几类?列，形成稳定的双螺旋结构。由于PNA不带电荷,根据杂交核酸分子的种类，可以分为DNA与DNA和RNA之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；PNA与DNA或RNA的杂交能力远远优于DNA、DNA或DNA、RNA杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鉴于上述诸多优点，近年来，PNA被广泛应用在许多高科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的研究和应用。特别是PNA可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升级产品。PNA还可用

24、于定量PCR分析。随着对PNA研究的不断深入，PNA将显示出更大的优越性和更为广阔的应用前景。5 .请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用在临床检验科，杂交技术最常用于基因诊断的例子是镰状细胞贫血病的基因诊断。镰状细胞贫血是一种单基因遗传性疾病，病因是编码血红蛋白的基因发生点突变导致编码下连第6位的谷氨酸被缴氨酸取代，表示为先(A3)谷-缴。在血红蛋白基因的碱基序列上表现为第6位密码子GAA突变为GTA,也就是在这一位点发生了A到T的点突变。由于这一突变导致基因内部一个MstII限制性酶切位点丢失，因而针对这一情况，可以设计与？珠蛋白基因杂交的核酸探针。先扩增靶片断，并用MstII消化扩增的DNA片断，电泳分离消化的DNA片断。将DNA片断转印到硝酸纤维素薄膜上，采用Southern杂交技术检测DNA片断。以此将正常人、携带者和患者区分开来。止匕外，还可以用凝血因子IX基因探针检测B型血友病，凝血因子XW基因探针检测A型血友病，用胰岛素基因探针检测糖尿病，用苯丙氨酸羟化酶基因探针检测苯丙酮尿症。以上都是杂交技术在临床检验科进行基因诊断的例子。6 .请叙述杂交探针标记方法的种类探针的标记方法可分为放射性核素标记法和非放射性核素标记法两大类。(1)放射性核素标记的探针，灵敏度高、特异性强，主要缺点是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期较短，必须随