肿瘤生物治疗(张)

1、肿瘤生物治疗叔人2001/4/5,页脚.一.肿瘤生物治疗发展概况#早期的肿瘤免疫治疗多采用非特异性免疫增强剂。如卡介苗 （BCG）和小棒状杆菌（C.Parvum）菌苗。 膀胱癌# 80年代初期，Rosenburg应用LAK过继免疫治疗晚期癌症病人取 得明显疗效，再次掀起免疫治疗的高潮。（TIL CIK生物导弹）# 90年代，比利时Thierry Boon首先应用T细胞克隆的方法找到 了人类肿瘤抗原。SEREX法发现了一批肿瘤抗原。DC肿瘤抗原肽# 肿瘤基因治疗。P53 Rb# 针对阻止肿瘤血管生成治疗肿瘤。近几年随着分子生物学的发展，在肿瘤抗原、抗原递呈和T细胞识别 等方面均有了突破性进展，对

2、于肿瘤的免疫效应机制，以及肿瘤的免 疫逃逸机理有了深入的认识。众多肿瘤免疫疗法如雨后春笋般应运而 生。肿瘤免疫治疗与手术、放疗、化疗三大常规疗法有明显的互补性, 在控制肿瘤的复发和转移方面展示良好前景。生物治疗：应用生物的组织、细胞、蛋白质、多糖、基因等生物制剂 治疗疾病。肿瘤的生物疗法的策略：调节强化抗肿瘤免疫、祛除免疫抑制、直接 杀伤或诱导肿瘤凋亡、促肿瘤分化、阻断肿 瘤营养供应、提高肿瘤被杀伤的敏感性。肿瘤的免疫治疗策略：去除免疫抑制、提高免疫原性、增强宿主免疫细胞的反应性 以及免疫导向。1. 过继免疫治疗(adoptive immunotherapy) ： LAK, TIL,CIK(1

3、)淋巴因子活化的杀伤细胞(Lymphokine Activated Killer)：制备：IL-2;测定：释放法、乳酸脱氢酶(LDH)释放法National Biotherapy Study Group interleukin-2Trials： Tumor Response According to Type of CancerResponseDiseaseCRPRMRSDPDTotal(CR+PR) %Melanoma52824587333/18818Lung17318228/5116Breast14113155/3415Renal31011766713/1678Colon01636331/

4、761Other0124475912/12210Total10624924826972/63811CR：complete response； PR：partial response. MR：mixed or minor responseSD：stable disease： PD： progressive disease.rIL-2：半衰期短，给药方式：皮、瘤、腔、淋巴管、吸入副作用：寒战、发热、恶心、乏力、心律失常、神经异常、毛细血管渗漏综合症(Capillary leak syndrome, CLS),肺水肿预防和处理：地塞米松、消炎痛、安定类、吸氧(2)其他非MHC限制性过继免疫治疗(粘附

5、 MNCA-LAK+ 抗 CD3CD3AKLAK (fNC + IL-2)4+ 抗 CD3 + IFN-/ + IL-1 CIK+ MEP (TCR-Vy9. V52) ydTI Monoe t h y1po s pa t eLAK、CD3AK、CIK细胞活性及增殖数量（殿俊）LU/106 cellsCell num. x 10'Total LULAK238104CD3AK18871566CIK26782028TAK ： IL-2 + 抗 CD3 + Tu-Ag（2）肿瘤浸润性淋巴细胞（Tumor-infiltrating lymphocyte, TIL）制备：肿瘤组织-消化（透明脂酸

6、酶、 胶原酶、DNA酶）一单细胞-密度梯度 分离富含 TIL+IL-2/抗 CD3/100Gy 自 体肿瘤标志：CD37CD81CD37CD4，1.055/*富含肿瘤细胞1.077<富含TILNK、LAK、TIL之间的区别NKLAKTIL来源外周血，脾外周血，脾肿瘤区域抗原致敏+产生条件自然存在IL-2IL-2、Ag、抗 CD3选择性杀瘤能力+抗瘤谱窄广窄MHC限制+体增殖能力差弱强聚集肿瘤部位差差强免疫记忆+LGL特征+CD3-/+TIL和LAK体抗肿瘤效力的比较回输TIL或LAK早期荷瘤小鼠肺转移抑制率数量X106TIL+IL-2LAK+IL-20.0. 516±8广274

7、 ±124596±48101003012±16028±410059 ±2620097±2肿瘤一一照射灭活裂解+DC注入淋巴结区域 腹股沟取淋巴结一一CTL克隆一一扩增一一回输2. 肿瘤疫苗：(1)细胞瘤苗a.细菌或病毒佐剂瘤苗：BCG NDVb.转基因细胞瘤苗：细胞因子(IL-2 GM-CSF)MHC (class I II B7)共刺激分子(B7)c.基于DC的瘤苗：负载多肽 导入肿瘤抗原基因d. 红细胞瘤苗：RBC-唾液酸酶e.细胞融合瘤苗：肿瘤细胞+ B细胞/DC(2) 亚细胞瘤苗:exosome (外泌小体)近期发现DC分泌的

8、exosome属于亚细胞结构，具有多种抗原递 呈分子和T细胞共刺激分子。肿瘤抗原肽刺激的DC产生的exosome 能够呈递肿瘤抗原，活化CTL,抑制和根除已建立的小鼠肿瘤，所以 exosome瘤苗极具发展潜力。(3)多肽分子瘤苗：肿瘤提取抗原多肽(酸洗脱)，病毒成分 (HPV16-E6, E7)合成肿瘤抗原多肽，HSP(4) 多糖瘤苗：MUC-1(5) 基因瘤苗：CEA-痘苗 V、HPV、erbB2/neu3.基于抗体的免疫治疗：抗体抗抗体(1)激活效应细胞(抗 CD3AbfCIK, TIL,抗 4TBBf T)(2) idiotype-抗抗体瘤苗(3)抗肿瘤相关抗原抗体，体应用直接产生抗瘤作

9、用。Trustuzumab (Herceptin) anti-HER2.页脚.,页脚.页脚.Vi. linker VH(4)抗体导向治疗对抗体改造克服HAMA反应抵小分子抗体：Single chain Fv (ScFv) 1/6 Disulfide-stabilized Fv(DsFv) Permutated Fv (pFv)b.双功能抗体(Bispecific Ab) 杂化杂交瘤技术轻重链无改变X 2重链不变X 4重、轻链均变X 4 化学交联Fab 基因重组 两套重轻链基因c.嵌合抗体(chimeric Ab) Fcd.人源化抗体(humarmized Ab) 重构抗体，VH,VL区6个CD

10、R 移植，骨架区的一些氨基酸同 时移植e.人源抗体：利用基因工程技术 构建的小鼠XenoMouse,产生 抗EGFr单抗，在裸鼠模型显 示很强的抑瘤作用。f.T-body ：T细胞表达的嵌合受体（Fv或ScFv为胞外区与Fc Y receptor 和彳链较链区重组）。不受MHC限 制，杀伤肿瘤或半抗原修饰的肿瘤。毒素分类：双链毒素：（植物毒素 单链毒素：厂化毒素”i细菌毒素：DiptheriaAbrin,Ricin,Modeccin,ViscuminPAP,SAP,Lonin,Monoridin,Triuchosanthintoxin （DT）,Pseudomonasexotoxin（PE）,

11、膜活性毒素：staphylococcal a-hemolysin（aHL）, streptolysin 0, .E.coli a-hemolysin, pneumolysin, aerolysin, perferins, eqinatoxinsa.毒素改造： PE664E（将结合细胞能力的 Dia 中 Lys57,His246,Arg247,和His249诱变为Glu,使其失去结合能力） PE40（缺失 Dia,剩 40KD） PE38 （从 PE40 的 DIb 中去除 365-380aa） PE38KDEL（将 PE38 中 DHI 的 C 端 Arg-Glu-Asp-Leu-Lys 用L

12、ys-Asp-Glu-Leu,KDEL替代，提高IT跨膜效率） Reiter 证明:ScFv-PE38KDEL 较 ScFv-PE38 对直肠癌多 种细胞系细胞毒活性高3-5倍，体高2倍。b.杂合毒素：植物与细菌毒素杂交100-1000倍c.基因重组毒素：融合蛋白，必须存在与天然毒素一样的蛋白水解 位点，使毒素与载体化时解离，便于进入胞质，发挥 杀伤效应。d.膜活性毒素：不需化，杀伤力大，毒副作用大，需改造。靶向治疗肿瘤相关的靶抗原表1已用于况向治疗小床试验的单抗针对肿福相关性抗原分类抗原肿瘤类型淋巴瘤/白血病分化抗原CD5T细胞白血病/淋巴瘤CD 19, CD2O, CD21, CD22,

13、CD37B细胞淋巴描CD3O何杰金氏淋巴痛CD33,CD45急性假1细胞样白血病CAMPATH-l(CI>w52)急性淋巴痛（T和B细胞）HLA-DRB细胞淋巴瘤抗独特型B细胞淋巴描实体瘫细胞表面抗原糖蛋白CEA, TAG-72, Ep-CAM, MUC1表皮细胞肿瘤（乳腺，结肠，肺）叶酸结合蛋白卵巢肿瘤A33结肠直肠痛G25O肾癌情胆神经节甘脂（GD2,GD3）神经外胚层肿瘤糖类Ley表皮细胞肿瘤（乳腺，结肠，肺）CA-125卵巢肿瘤胞内抗原铁蛋白何杰金氏淋巴痛，肝细胞瘤生长因子受体EXJFK肺，乳腺，头部和颈部肿瘤p侬由乳腺，卵巢肿瘤L2受体T和B细胞痛胞外基质抗原FAP-a表皮细胞

14、肿瘤（乳腺，结肠，肺）肌鹿蛋白多形性成胶质细胞瘤金属蛋白酶表皮细胞肿瘤抗体靶向治疗的临床研究 淋巴瘤Kaminski： 1996I-抗CD20鼠源，顽固性非何杰金氏淋巴瘤 75%患者有效，分化低的分化高的，化疗不敏感的也取 得较好疗效。Knox ： 90Y (钮)-抗CD20对非何杰金氏淋巴瘤有效率72% (治愈率33%)o 9°丫-抗个体基因型治疗B细胞淋巴瘤有效率近33% 白血病人源化抗CD33单抗M195治疗急性髓样白血病和急性早幼粒细胞 白血病。131I-M195与白消安或环磷酰胺合用于骨髓移植(BMT), 除去排异反应的T细胞。I 抗CD54 (ICAM-1)急性髓样白血

15、病或急性单核细胞增多型白血病的BMT,与传统全身辐射除去T 细胞对正常细胞毒性小。 结直肠癌鼠源抗表皮粘附分子单抗17-1A,对Duke' C期结肠癌死亡率和 复发率分别降低了 30%和27%,主要与低分化肿瘤结合，ADCC, 80% 产生HAMA,但未影响疗效。人源化改造。放免治疗：抗A33,与骨髓也有相当数量的结合，5/23有一 定的疗效。I与靶向抗体偶联物易为肿瘤细胞吞。侬抗A33, 21例患者，10例显效，而骨髓细胞很少与标记抗体作用，被 射线损伤机会少。近来证明：放射偶联物离细胞核越近，细胞毒 越强，并成指数增加。免疫毒素：Le'-Ab与PE化学偶联，I期研究，5/3

16、8例好转，正常 组织表达同样靶抗原，但未受损。但是，由于毒素的免疫原性强, 再次使用应有效果。,乳腺癌 肾癌I标记鼠源G250,由于HAMA反应,二次使用则失效。I-G250人鼠嵌合型，肿瘤富集浓度0.1% (每克组织达到的 注射计量，一般水平为0.001%-0.01%) , 16例中的2例有轻微 HACA 反应。ADCC4.细胞因子治疗(1)干扰素(interferon, IFN) I型干扰素：细菌、病毒-白细胞、 成纤维细胞等，IFN-a 166-172aa(ak a2 亚族)无糖基； IFN-p 166aa糖蛋白；广谱抗病毒作 用，促进多数细胞MHC I类分子的 表达，提高巨噬细胞、NK

17、细胞、CTL抗肿瘤作用。II型干扰素：IFN-y成熟分子143aa的糖蛋白，同源双体形式存在，活化T细胞和NK细胞产生。它可上 调多种细胞MHC I类分子、II类分子表达，上调血管皮细胞细胞间干扰素治疗肿瘤肿瘤疗效毛细胞白血病 慢性白血病 淋巴瘤Kaposi氏肉瘤 急性白血病 多发性骨髓瘤 神经胶质瘤 肾细胞癌 黑色素瘤卵巢癌乳腺癌6090%缓解50%PR37%PR+CR26%PR24%PR20% PR+CR17% PR+CR16% PR+CR10% PR+CR 局部应用好10%PR10%PR.页脚.粘附分子-1的表达。促转移？(2) Interleukin, IL白细胞介素 糖蛋白18种IL

18、主要生物学活性1促T细胞分化，增殖、CTL, NK活性t2促T细胞分化,增殖、CTL, NK, LAK活性t3多能干细胞、T细胞增殖4促B细胞增殖，产生Ig, DC5促B细胞分化6促T、B、干细胞增殖，Ig t,巨核细胞分化7促T、B细胞增殖，诱导LAK8趋化中性、嗜碱性粒细胞、T细胞9T细胞生长，协同IL-3刺激肥大细胞10抑制TH1,促胸腺和肥大细胞增殖11促Ig分泌，促血小板形成12协同IL-2促进CTL、NK、LAK分化13促B细胞增殖14促B细胞增殖15CTL, NK, LAK 活性 t16促进CD4+细胞增殖，抑制病毒复制(HIV)17促 IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1、

19、G-CSF t18NK、T t|IL-12： 35KD、40KD异二聚体，激发NK、LAK、T细胞增值、分化；向肿 瘤趋化；诱导IFN-y产生；促巨噬细胞产生NO；抑制肿瘤血管生 成；有利于TH1细胞分化。临床研究：I期美国遗传研究所主持安全性和耐受性H期另一研究组，肾癌17人中15人出现严重副作用。胃肠道出血，肝毒性和贫血，2人死亡。动物实验表明：第一次单计量注射两周后再多次给药可预防毒性反应。SC代替iv ,减少用药次数，未出现毒性反应。改进：IL-12基因f自体纤维母细胞f扩增f注入体（或与灭活 的瘤细胞混合，作为瘤苗）CD4”,CD+细胞浸润，出现大量并指状 细胞。对晚期肿瘤有效。（3

20、）肿瘤坏死因子TNF：分为两种，TNF又称为恶质素；TNF-p又称为淋巴毒素。两者都是同源三聚体。炎症因子，与败血症 休克、发热、多器官衰竭、恶病质有关。体外均能杀死某些类 型的瘤细胞，或抑制其增殖，激活免疫细胞攻击肿瘤，增强IL-2 依赖的胸腺细胞、T细胞增殖能力，促进IL-2、CSF、IFN-丫等 淋巴因子产生，干扰肿瘤血液供应。它的许多功能与IL-1相同。 另一方面，肿瘤坏死因子又可促肿瘤有丝分裂、肿瘤扩散、血 管生成和恶液质。毒性大，基因重组突变型（4）血细胞生成因子 G-CSF、GM-CSF. TPO、EPO、IL-6、SCF其他生物反应调节剂：BCG、0K432、香菇多糖、中草药(

21、黄黄、女 贞子对抗免疫抑制：PGEz-InM; Ts-CYC或低剂量辐射；反义RNA(TGF-p, IGF, IL-10)配体导向治疗：IL-2/IL-2R、EGF/EGFR三、抗血管生成肿瘤长至l-2m/无新血管行成供应营养，则不能生长。策略Four strategies (to design anti-angiogenesis agents)(1) Block the ability of the endothelial cells to break down the surrounding matrix.(2)Inhibit normal endothelial cells direct

22、ly.(3)Block factors that stimulate angiogenesis.(4)Block the action of integrin, a molecule on the endothelial cell surface.1阻断皮细胞降解周围基质的能力2直接抑制正常皮细胞3阻断刺激血管生成的因子4阻断整合素的作用（皮细胞表面的分子） .页脚.活化皮细胞生长、运动的因子active endothelial cell growth and movement1 vascular endothelial growth factor (VEGF)2 fibroblast gro

23、wth factor (FGF)3 angiogenin4 epidermal growth factor (EGF)5 scatter factor (SF)6 placental growth factor (P1GF)7 interleukin-8 (IL-8)8 tumor necrosis factor alpha (TNF-a)天然抗血管因子naturally occurring inhibitors of angiogenesis1 .Angiostatin2 .endostatin1.1 nterferons (IFN)4. platelet factor 4 (PF4)5.

24、thrombospondin (凝血栓蛋白)6. transforming growth factor beta(TGF-p)7.16Kd fragment of prolactin8. tissue inhibitor of metalloproteinase-1, -2, and -3 (TIMP-1, TIMP-2 and TIMP-3) Angiostatin血管抑素：1994年O' Reily研究转移癌抑制机制时从Lewis肺癌鼠血清和尿中提取38Kda蛋白，亲肝素和赖氨酸，抑制血管皮生长和新的血管形成。是纤溶酶原的酶解产物。 endostandin皮抑素：1997年从血管皮

25、细胞培养上清中发现， 20kDa,胶原XVIII的酶解产物，原核表达无天然折叠，可溶性差, 体外无活性。皮注射出现活性。 抗肿瘤作用：手术、放疗、化疗、免疫治疗各有其局限性，肿瘤 生长严格依赖血管形成。肿瘤长至1-2皿/无新血管行成供应营养, 则不能生长。通过抑制血管形成对各种实体瘤均有效。血管皮细 胞为新生血管前体，很少发生变异，治疗效果稳定不易产生耐药 性。对正常静止的血管皮细胞无抑制作用。O' Reily称其为休眠 疗法(dormancy therapy)o真核表达的血管抑制素有种属差异。 小鼠实验中达同样抗肿瘤效果，人血管抑制素用量100mg/kg.d, 小鼠血管抑制素为6mg

26、/kg. d 基因重组皮抑素皮下注射已长至小鼠体重3%的多种肿瘤都缩小至 镜下可见水平。凋亡率是对照组的7倍之多。2-6个周期,页脚.安全性有风险安全*安全有风险3 .基因导入方法：病毒感染、脂质体（图）、电穿孔、基因枪（图）、 裸基因注射、基因缝线等基因缝线：汤健缝;线直接涂抹DNA或通过polylysine偶联到缝线上 血管、骨骼肌、心肌比单纯注射表达率高5-10倍。尿激 酶基因缝线-微小动脉缝合f防止吻合口血栓形成和狭窄。基因针：用polylysine将基因粘附在不锈钢针上（75T00|ig DNA） 一刺入肌肉（0.2V,lmA,直流脉冲，DNA为负极无关电极为 正）一电针30分钟-第

27、3天表达-14天达高峰一持续一个 月。针刺捻转为电针效率的1/3T/5。基因球囊和支架：外源基因（反义N-ras）在冠状动脉中表达，抑 制损伤造成的血管膜下增生和狭窄血管外基因转移：a 外科切开蘸有基因的滤纸贴于血管外膜b 可溶性纤维蛋白+DNA血管周围注射一一凝血酶+ 组织凝血因子一一网状不溶性纤维蛋白/DNA复合物一一1 4天纤 溶酶作用降解4 .肿瘤基因治疗的靶向性和组织特异性表达（1）病毒： RV: IL-2替代其env N端部分IL-2-Envf淋巴细胞胶联EGF、Ab 有待评价 AdV： Ad5-纤维蛋白的糖基，经化学修饰与一种血清类粘蛋白 （ASOR）和多聚赖氨酸连接物共价连接一

28、与ASOR.细胞结合 HSV：具有嗜神经性，改造成只感染分裂相胶质瘤细胞，而脑 正常细胞不受影响。 EBV： EBNA-1是EBV复制所需唯一的反式激活因子。存在于所 有的EBV转化的细胞中。pFR-tk-Zta质粒中溶细胞性复制周 期反式蛋白Zta是依赖EBV激活。（HBV-嗜肝性）（2）脂质体：特异性配基（抗体、凝集素、病毒表面的糖蛋白）（3）受体介导：转铁蛋白-多聚赖氨酸/DNAf K562EGF-多聚赖氨酸/DNAfK562（5）肿瘤组织特异性表达：组织特异性启动子、增强子、反式作用因子调控表达。AFP启动子/增强子-TK5 .目的基因及其应用（1）抗癌基因：P53（50%人类肿瘤伴P

29、53基因突变），、RB、WTTMD安德森癌症研究中心，直接瘤注射P53-rAdV（106-10"PFU/3次/w x2/月x7个月），安全和效果，以及3天 前注射顺箱80mg/m2o虽然每例患者均出现抗AdV抗体，但不 影响转染效率和治疗效果。33例复发性头颈癌，2 PR, 1 CRo Wild type P53产物也可用作肿瘤疫苗。(2)免疫细胞因子基因：IFN、IL、GM-CSF、TNF(3) 抗血管生成因子； angiostatin endostatin(4)转化预施药物的酶类：virus-directed enzyme prodrug therapy无毒胞啥定脱氨酶(CD)有

30、毒5-氟胞喀唳(5-FC)5-氟尿啥唳(5-FU)AFP调控-胸腺啼唉核昔激酶(TK)6-甲氧基嘿吟阿拉伯糖(araM)腺喋吟阿拉伯糖普三磷酸(araATP)(5)膜抗原：MHC、B7、异种 MHC class I > 同种 MHC class IAllovectin (HLA-B7/Pjm,质粒DNA阳离子脂质体)瘤注 射，9例放化疗无效的头颈鳞癌，4例PR, 1例活17个月。6 .反义核酸：作用机制：与靶基因正义RNA形成复合物而被核酶剪切降解；结合到靶基因的mRNA与5,非编码区，抑制RNA与40s核糖体亚单位的结合；结合到靶基因前mRNA上，影响前mRNA的有效拼接；结合到已经拼

31、接的mRNA上，影响其从胞核转运到胞浆；影响细胞RNA产生和降解的一系列程序；针对靶基因5，非编码区调控序列(启动子、转录因子)阻止靶基因转录。癌基因作靶基因：CN7%,细胞分裂进入S期所必需的。肿瘤厂伴有表达失控。22号染色体bcr与9号染色体c-abl交互易位rbcr-abh致癌(慢性粒细胞白血病的治疗和骨髓净化)Bcl-2,肿瘤过渡表达Bel-2抑制正常的凋亡途径。的-ras,膀胱癌Ha-ras第12号密码子突变（G-T）,针对突变其他： 从 c-jun、c-myb、N-ras、c-fosx c-sis、c-crbB2、 生长因子及其受体基因作靶基因：肿瘤长生某些生长因子及其受 体高表达

32、，（自分泌和旁分泌）促进肿瘤生长IGF-1R,其反义核酸抑制肿瘤增殖比抗IGF-1R抗体有效bFGF,神经胶质瘤高表达TGF-a/EGF-R,促细胞转化，增殖VEGF 细胞信号传导系统相关物质的基因PKA/Ria,肿瘤高表达（结肠癌、成神经细胞瘤、乳癌、胃癌） 细胞周期调控物质的基因细胞周期蛋白cyclin D1-细胞增殖“油门”、“加速器”：其反义 核酸抑制细胞G1向S期转换，从而抑制肿瘤生长，恶性表型逆转。 酶类基因作靶点参与DNA合成与复制的酶：胸甘酸激酶、胸甘酸合成酶、核糖核 酸还原酶、二氢叶酸还原酶；DNA聚合酶、增殖细胞核抗原（PCNA）、 DNA拓扑异构酶H-a亚基。许多化疗药物

33、以此为靶点。 其他：多药耐药基因mdrl、CD44 （粘附分子，肿瘤转移） 理想反义核酸治疗靶基因的条件：a,肿瘤发生发展中起关键作用，而不是部分作用。b.只在肿瘤表达，正常组织不表达。（近期，端粒酶，除生殖腺.页脚.细胞以外，正常组织均为阴性。)7.基因治疗的问题和发展方向:(1)构建更为安全的病毒载体(3)肿瘤特异性表达(5)载体的可控性(7)新的目的基因五、增殖病毒治疗肿瘤(2)肿瘤特异性导向(4)高效载体系统(6)多基因转导协同效应(8)与其他治疗手段有机结合1.根据病毒在肿瘤特异性增殖机制分三大类:选择进入细胞：有些病毒具有组织亲和性-改变结合蛋白-与特 定肿瘤组织结合。尚无重大进展

34、。选择性转录病毒增殖必须基因：肿瘤特异性启动子或增强子插入病毒增殖必须基因的上游。Johns Hopkins大学治疗前列腺癌II111H H III另：人腺血管舒缓启动子控制E1B,该病毒杀伤前列腺癌细胞比 杀伤正常细胞高10000倍。二军大 EB病毒潜伏感染细胞特异性激活的增强子和启动子控制AdV的E1A、E1B杀伤EBV感染的细胞和瘤细胞。(鼻咽癌、淋巴 瘤、胃癌)将病毒在正常细胞中复制所必须，而在肿瘤细胞中非必须的病毒 基因选择性缺失AdVf 正常细胞一激活P53 fApOf Ad V复制终止 、ElB55kd/C、AdV增殖复制f细胞溶解一再感染 /AdV f肿瘤：P53突变或缺失 /

35、AdV缺失E1B55kd T 正常细胞一激活P53fAp（）fAdV复制终止 I肿瘤细胞fAdV增殖复制-细胞溶解-再感染一消灭肿瘤 美国ONYX生化制药公司：缺失ElB55kd的AdV命名为ONYX-015。 对5株正常细胞无明显杀伤。最近数个研究小组的结果认为：0NYX-015作用机制与P53突变无关。I期临床：5例复发新头颈鳞癌（1次/4w）瘤注射，3例PR；9 例（1 次/日，x5, 4xlO9-5xlOloPFU） 5 例多疗程，6例肿瘤坏死（30-90%） 3例PR, 3例MRH期临床：常规治疗无效的头颈部肿瘤ONYX-015 +化疗PR 63%, CR 27%明显优于单纯化疗组（

36、1999. 9.开始HI期）Georgetown大学 将HSV复制必须的基因核糖核酸还原酶活T脱氧 核糖核甘酶（MSV-TK）失活，只能在含有上述酶丰富的、分裂迅速的 细胞增殖，在正常CNS细胞不能增殖（治疗神经胶质瘤）。为安 全剔除的致脑炎病毒基因，称G207,几乎对所有实体瘤有效。2.其他几种特异性杀伤肿瘤病毒呼吸道肠道过滤性病毒（reovirus） f感染后早期病毒基因转录f激活双链RNA激活蛋白激酶（PKR）一抑制病毒其他基因转录一 抑制病毒有效复制。癌fRas激活-抑制PKRf病毒有效复制一杀瘤加拿大Calgary大学用该病毒治疗Ras高表达人胶质瘤SCID小鼠模 型，65%-80%

37、肿瘤明显缩小或消退。对乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌同 样有效。将进入临床。 NDV,自主小病毒3 .增殖病毒关注的几个研究方向增殖病毒携带目的基因：IL-2、HSV-tk. CD （胞喀唳脱氨酶）， 增强抗肿瘤作用。减少病毒的免疫原性：更换不同血清型的AdV； IL-12、IFN-丫抑 制中和抗体产生。寻找肿瘤特异性增强子、启动子，控制病毒增殖必须基因，产生 新型肿瘤特异性增殖病毒。4 .选择增殖病毒时，病毒应有以下特征：必须能在肿瘤选择性增殖，并溶解瘤细胞；病毒所导致的人类疾病必须是轻微的，已熟知的。如有致病性 需有有效抗病毒治疗方法；该病毒增殖和治病的基因均巳清楚；具有遗传稳定性极少能恢复为野

38、生型病毒；不整合到人的基因组；容易产生高滴度的病毒，易于生产纯化；体能感染多种组织及细胞；有理想的动物模型进行临床前毒性研究。六.抗端粒酶治疗肿瘤1 .端粒、端粒酶与肿瘤的关系(1)端粒和端粒酶三四十年代，染色体末端存在一种维持染色体稳定和完整的特殊 结构端粒(telomere)，它能防止染色体DNA降解、末端融合、缺失和非正常重组。八十年代，端粒结构：端粒DNA-端粒结构蛋白。人和脊椎动物端粒DXA均为(TTAGGG) nDNA 5, 3，I3, "RNA 5'端粒DNA 1985年，四膜虫中发现端粒酶(telomerase)。1998年，耶鲁大学Morin从人宫颈癌细胞中

39、发现人端粒酶。端粒酶：是一种核糖核蛋白，由蛋白质和与端立互补的RNA组成，它能以自身RNA为膜板合成端粒DNA,本质上属你转录酶。端粒酶 RNA 蛋白质1I端粒 -DNA尖毛虫属(2)肿瘤的“端粒-端粒酶”假说1991年，Harley提出“端粒-端粒酶”假说。他认为：端粒可 能是细胞有丝分裂的计时钟(milotic clock)o细胞在有丝分裂中， 端粒DNA不断丢失，使端粒缩短。缩短到一定程度时可能触发某种信 号，退出细胞周期而老化，死亡。此阶段端粒酶被激活，恢复端粒的 功能，使细胞逃避死亡而获得永生化(肿瘤)。(3)端粒酶与肿瘤的关系“端粒-端粒酶”假说认为端粒酶的再激活与细胞永生化和恶性肿 瘤的发生发展有密切关系，大量研究已证实了此推论。Kim等检测端粒酶活性：100株人肿瘤细胞系98% ( + )22个正常细胞株均为(-)桥等检测