病理学技术学习教案

1、会计学1病理学技术病理学技术第一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。序： 病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮，病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮，缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定病理学的发展。病理学的发展。第1页/共209页第二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。病理学的技术主要体现在几个结合上病理学的技术主要体现在几个结合上1.传统病理学技术与现代生物新技术相结合传统病理学技术与现代生物新技术相结合2.宏观、脏器、组织、细胞、超微与分子基因不同层次技术相结合宏观、脏器、组织、细胞、超微与分子基因不同层次技术相结合3.形态、机

2、能与代谢变化相结合形态、机能与代谢变化相结合4.定性、定位与定量观测相结合定性、定位与定量观测相结合5.实验研究技术与临床应用技术相结合实验研究技术与临床应用技术相结合6.技术的基本原理与具体方法相结合技术的基本原理与具体方法相结合7.基本技术知识与作者实践经验相结合基本技术知识与作者实践经验相结合第2页/共209页第三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。病理学的发展与使用的工具病理学的发展与使用的工具和方法的更新密切相关和方法的更新密切相关1.用解剖刀剪等进行尸体检查，开展了器官病理学用解剖刀剪等进行尸体检查，开展了器官病理学2.显微镜发明百年之后，建立了细胞病理学显微镜发明百年之后，建立了

3、细胞病理学3.电子显微镜的问世，发展了超微病理学电子显微镜的问世，发展了超微病理学4.免疫组织化学促进了免疫病理学的发展免疫组织化学促进了免疫病理学的发展5.分子生物学带动了分子病理学的兴起分子生物学带动了分子病理学的兴起6.计算机及其网络的应用，将病理学走向信息病理学时代计算机及其网络的应用，将病理学走向信息病理学时代第3页/共209页第四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。传统病理学技术：传统病理学技术： 传统的传统的Formalin固定，石蜡切片和固定，石蜡切片和HE染色技术染色技术仍是病理学的基本技术，大量应用与基础和临床病理仍是病理学的基本技术，大量应用与基础和临床病理学日常工作中，

4、保证和提高常规质量和现代设备水平学日常工作中，保证和提高常规质量和现代设备水平十分重要。十分重要。第4页/共209页第五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第一章：病理解剖技术第一章：病理解剖技术一、病理解剖的意义一、病理解剖的意义 病理解剖技术是病理学的基础之一，是病理学不可分割的一部分。病理解剖技术是病理学的基础之一，是病理学不可分割的一部分。 通过病理解剖收集病理教学及科研资料是其中一个途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。通过病理解剖收集病理教学及科研资料是其中一个途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。 病理解剖是通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出

5、主要病变，分析判断直接死亡的一个重要方法。病理解剖是通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡的一个重要方法。第5页/共209页第六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。二、病理解剖室的设备和器械二、病理解剖室的设备和器械1. 设备：设备：1解剖室的设计要求解剖室的设计要求 最好位于太平间；最好位于太平间； 室内面积要大，必须有两个门；室内面积要大，必须有两个门； 地面用水磨石，四周有排水沟或地漏；地面用水磨石，四周有排水沟或地漏； 室内通风好；室内通风好； 有消毒室，男女更衣室，浴室等。有消毒室，男女更衣室，浴室等。第6页/共209页第七页，编辑于星期日：十

6、八点 三十六分。2解剖台的设计解剖台的设计 高低和大小要合适高低和大小要合适 台面可用水磨石或不锈钢台面可用水磨石或不锈钢 有条件可购置能够升降的解剖台有条件可购置能够升降的解剖台 解剖台可带有抽气的功能等解剖台可带有抽气的功能等 第7页/共209页第八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。水磨石台面的解剖台水磨石台面的解剖台第8页/共209页第九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。水磨石台面的解剖台水磨石台面的解剖台第9页/共209页第十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。不锈钢台面的解剖台不锈钢台面的解剖台第10页/共209页第十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。不锈钢台面的解剖台不锈钢

7、台面的解剖台第11页/共209页第十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。病理解剖器械2. 器械：第12页/共209页第十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第13页/共209页第十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3. 清洁、消毒和个人保护清洁、消毒和个人保护1病理解剖室的清洁和消毒病理解剖室的清洁和消毒2病理解剖器械的清洁和消毒病理解剖器械的清洁和消毒3个人保护等个人保护等第14页/共209页第十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。三、病理解剖的方法和步骤三、病理解剖的方法和步骤1. 病理解剖前的准备病理解剖前的准备 主要办理一切手续，非常重要。主要办理一切手续，非常重要。2. 体

8、表检查体表检查第15页/共209页第十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。体表检查体表检查第16页/共209页第十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。尸斑，尸僵尸斑，尸僵第17页/共209页第十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3. 胸腹腔检查胸腹腔检查1切口切口2腹腔检查腹腔检查3胸腔检查胸腔检查第18页/共209页第十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。腹腔有渗出液腹腔有渗出液第19页/共209页第二十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。心包积液（血液第20页/共209页第二十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。气管周围血液第21页/共209页第二十二页，编辑于星期日：十八点

9、三十六分。液体称量第22页/共209页第二十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。4. 内脏器官的取出及检查内脏器官的取出及检查 一般有两种方法：一般有两种方法：1各脏器分别取出法各脏器分别取出法 是病理解剖最常用的方法是病理解剖最常用的方法2多脏器联合取出法多脏器联合取出法 此法比较简单，可保持各器官的完整性。此法比较简单，可保持各器官的完整性。第23页/共209页第二十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。心脏表面充血第24页/共209页第二十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。绒毛心第25页/共209页第二十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。双肺和支气管第26页/共209页第二十七

10、页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝脏表面有结节第27页/共209页第二十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。胰腺，出血改变第28页/共209页第二十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肠管，出血第29页/共209页第三十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。脑第30页/共209页第三十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。脑干出血第31页/共209页第三十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第二章第二章 病理大体标本的制作病理大体标本的制作一、大体标本的收集、取材、固定和保存一、大体标本的收集、取材、固定和保存1.大体标本的收集大体标本的收集 通过尸体解剖和活体组织（包括外科手术切除标

11、本通过尸体解剖和活体组织（包括外科手术切除标本和活体组织穿刺标本检查时发现并收集。和活体组织穿刺标本检查时发现并收集。2.大体标本的取材大体标本的取材第32页/共209页第三十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。取材室条件：取材室条件：通风要好，必须有排风设通风要好，必须有排风设备；备；固定的组织取材前要用固定的组织取材前要用流水充分冲洗；流水充分冲洗；排水要远离住宅区等排水要远离住宅区等第33页/共209页第三十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。不同器官的取材和固定不同：不同器官的取材和固定不同：1实质性的器官：如肝、脾等实质性的器官：如肝、脾等 要注意，实质器官不容易被固定液所穿透。

12、要注意，实质器官不容易被固定液所穿透。第34页/共209页第三十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝癌肝癌第35页/共209页第三十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝癌第36页/共209页第三十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝癌肝癌第37页/共209页第三十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝癌肝癌第38页/共209页第三十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2空腔器官：如胃、肠等空腔器官：如胃、肠等 取材时要看全层，保持粘膜、肌层和浆膜全层取材时要看全层，保持粘膜、肌层和浆膜全层的组织。的组织。第39页/共209页第四十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。胃癌，呈菜花

13、状胃癌，呈菜花状切面的形状切面的形状第40页/共209页第四十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。胃癌，溃疡型胃癌，溃疡型切面的形状切面的形状第41页/共209页第四十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。切面的形状，浸切面的形状，浸润性至浆膜润性至浆膜溃疡型胃癌溃疡型胃癌第42页/共209页第四十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。溃疡型胃癌溃疡型胃癌切面的形状，浸润切面的形状，浸润性至浆膜性至浆膜第43页/共209页第四十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3肺肺 肺组织比较疏松，固定液容易渗透。肺组织比较疏松，固定液容易渗透。 肺组织的取材要清楚的了解各叶肺组织所伴肺组织的取材要清

14、楚的了解各叶肺组织所伴随的支气管。随的支气管。 第44页/共209页第四十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。A：主支气管B：叶支气管第45页/共209页第四十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第46页/共209页第四十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肺肺和和气气管管周周围围的的淋淋巴巴结结第47页/共209页第四十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肺癌肺癌肺门型肺门型第48页/共209页第四十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肺癌肺癌肺门与周围肺门与周围之间之间第49页/共209页第五十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肺癌肺癌周围型周围型第50页/共209页第五十一页

15、，编辑于星期日：十八点 三十六分。肺癌肺癌空洞型空洞型第51页/共209页第五十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。4）其它类型 外科手术标本常见： 乳腺癌 子宫颈癌 肠癌 卵巢肿瘤等第52页/共209页第五十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。乳腺癌乳腺癌第53页/共209页第五十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。乳腺癌第54页/共209页第五十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。乳腺癌乳腺癌第55页/共209页第五十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。乳腺癌乳腺癌第56页/共209页第五十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。子宫颈癌子宫颈癌第57页/共209页第五十八页，编辑

16、于星期日：十八点 三十六分。子宫颈癌第58页/共209页第五十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。子宫颈癌第59页/共209页第六十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。子宫颈癌，切面第60页/共209页第六十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3.大体标本的固定大体标本的固定1固定的目的：固定的目的： 将受检组织尽快地侵入固定液内，使组织和细胞的固有将受检组织尽快地侵入固定液内，使组织和细胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐败，使其保持与生活状态有相成分迅速凝固，防治自溶和腐败，使其保持与生活状态有相似的结构，以利于切片和观察。似的结构，以利于切片和观察。2固定液的选择：固定液的选择：A.甲

17、醛（甲醛（Fomaldehyde，又称福尔马林，其浓度在，又称福尔马林，其浓度在4，它是一种还原剂，极易挥发，散发出强烈的刺激，它是一种还原剂，极易挥发，散发出强烈的刺激性气体，使人流鼻涕、流眼泪，呼吸道有异物感。性气体，使人流鼻涕、流眼泪，呼吸道有异物感。酒精（乙醇，除具有固定组织的作用外，尚有酒精（乙醇，除具有固定组织的作用外，尚有脱水作用。脱水作用。第61页/共209页第六十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3固定液的特性固定液的特性 甲醛固定液渗透力强，固定均匀，对组织收缩甲醛固定液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较小，并能增加组织韧性的优点，而且可以保存组较小，并能增加组织韧性的优

18、点，而且可以保存组织内的脂类物质，对组织的主要作用为硬化和防腐织内的脂类物质，对组织的主要作用为硬化和防腐。 酒精可以保存组织内的糖类物质及尿酸结晶，酒精可以保存组织内的糖类物质及尿酸结晶，不过，它常使组织明显收缩，且使脂类物质溶解。不过，它常使组织明显收缩，且使脂类物质溶解。第62页/共209页第六十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。4. 大体标本的脱水、包埋和切片大体标本的脱水、包埋和切片 为能制成满意的切片，固定后的组织还要经过为能制成满意的切片，固定后的组织还要经过脱水、透明、浸蜡及包埋等一系列程序。脱水、透明、浸蜡及包埋等一系列程序。1脱水：目的是将固定了的组织内水分除去。以便脱

19、水：目的是将固定了的组织内水分除去。以便使切片时的支撑物（石蜡充分进入组织内。常用的使切片时的支撑物（石蜡充分进入组织内。常用的是酒精。是酒精。2透明：目的是使能与石蜡结合溶解的媒介剂进入组织透明：目的是使能与石蜡结合溶解的媒介剂进入组织，进而将不能与石蜡结合的脱水剂，进而将不能与石蜡结合的脱水剂置换出来，并使组织透明。常用的是二甲苯。第63页/共209页第六十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第64页/共209页第六十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3浸透和包埋：可使组织具有一定的硬度和韧度浸透和包埋：可使组织具有一定的硬度和韧度，便于切成薄的切片。常用的石蜡溶点为，便于切成薄的切

20、片。常用的石蜡溶点为6062，有时为保存更多的抗原成分。可采用低溶点石蜡（，有时为保存更多的抗原成分。可采用低溶点石蜡（4850 。4切片切片切片机类型：切片机类型： 旋转式切片机旋转式切片机 滑动式切片机滑动式切片机第65页/共209页第六十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。旋转式切片机旋转式切片机第66页/共209页第六十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。5. HE（Hematoxin Eosin,HE染色染色1苏木素染色配方：苏木素染色配方： 苏木素苏木素 1g 纯酒精纯酒精 10ml 钾明矾钾明矾 20g 蒸馏水蒸馏水 200ml 氯化汞氯化汞 2伊红染色配方：伊红染色配方：

21、伊红伊红 蒸馏水 99ml第67页/共209页第六十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。HE染色法：染色法：1苏木素染色苏木素染色57分钟；分钟；2自来水冲洗多余的染液；自来水冲洗多余的染液；31盐酸酒精分化数秒钟，使细胞核呈紫蓝色盐酸酒精分化数秒钟，使细胞核呈紫蓝色4自来水中充分洗涤；自来水中充分洗涤；51氨水中数秒，至返蓝；氨水中数秒，至返蓝；6自来水中至蒸馏水冲洗；自来水中至蒸馏水冲洗；71的伊红染色，的伊红染色，3分钟左右；分钟左右； 结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆呈粉红色，基底结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆呈粉红色，基底膜，胶原纤维及肌纤维呈粉红色。膜，胶原纤维及肌纤维呈粉红色。第68

22、页/共209页第六十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。HE切片切片第69页/共209页第七十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第三章第三章 特殊染色特殊染色 HE染色虽是一种快速、经济、且易掌握的方法，染色虽是一种快速、经济、且易掌握的方法，但它不能回答病因学、但它不能回答病因学、Z组织发生及发病机制等方组织发生及发病机制等方面的许多问题。而特殊染色可以协助解决病理面的许多问题。而特殊染色可以协助解决病理诊断问题。诊断问题。第70页/共209页第七十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。目前市场上有配制好的特殊染色试剂目前市场上有配制好的特殊染色试剂第71页/共209页第七十二页，编辑于

23、星期日：十八点 三十六分。介绍常用的几种特殊染色介绍常用的几种特殊染色1. 脂肪染色脂肪染色 主要用于心、肝、肾的脂肪变性，动脉粥样硬化主要用于心、肝、肾的脂肪变性，动脉粥样硬化，以及因脂肪栓塞导致的死亡病例鉴定等。，以及因脂肪栓塞导致的死亡病例鉴定等。1试剂配制：苏丹染液试剂配制：苏丹染液 苏丹苏丹III或苏丹，或苏丹，70%乙醇乙醇250ml，丙酮，丙酮250ml。2染色方法：染色方法：（1标本常规甲醛固定后流水冲洗标本常规甲醛固定后流水冲洗12h；（2用滤纸吸干标本表面的水分，把标本放入苏丹用滤纸吸干标本表面的水分，把标本放入苏丹III染液中浸泡染液中浸泡30min；（3用用70乙醇分化

24、，以脂肪组织呈橙黄色，其它组织不着色为佳；乙醇分化，以脂肪组织呈橙黄色，其它组织不着色为佳；（4水洗后浸存在水洗后浸存在5甲醛液中，为了防腐可加入适量的防腐剂。甲醛液中，为了防腐可加入适量的防腐剂。 第72页/共209页第七十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肝脂肪变第73页/共209页第七十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第74页/共209页第七十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。苏丹III染色第75页/共209页第七十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2. 过碘酸过碘酸(periodic acid)-schiff染色，即染色，即PAS染色染色 此技术主要显示糖原（在淀粉酶

25、消化对照下此技术主要显示糖原（在淀粉酶消化对照下、中性粘液物质、基底膜、霉菌和寄生虫等。、中性粘液物质、基底膜、霉菌和寄生虫等。1 schiff氏试剂的配方：氏试剂的配方：（1将将200ml蒸馏水煮沸；蒸馏水煮沸；（2冷却至冷却至90时，慢慢加入碱性复红时，慢慢加入碱性复红1g;（3搅拌并煮沸搅拌并煮沸5分钟使其全溶；分钟使其全溶；（4冷却至冷却至50时过滤，并加入时过滤，并加入1N盐酸盐酸20ml；（5冷却至冷却至25时，再加入无水亚硝酸钠时，再加入无水亚硝酸钠1g并搅拌匀。并搅拌匀。（6置入遮光瓶内并放入在置入遮光瓶内并放入在4冰箱内保存备用。冰箱内保存备用。第76页/共209页第七十七页

26、，编辑于星期日：十八点 三十六分。2PAS染色方法：染色方法：（11过碘酸水溶液染过碘酸水溶液染10分钟，使含有乙二醇的化合物氧化形成醛基；分钟，使含有乙二醇的化合物氧化形成醛基；（2蒸馏水洗去过碘酸；蒸馏水洗去过碘酸；（3 schiff氏试剂反应氏试剂反应15分钟，使醛基和分钟，使醛基和schiff氏试剂结合，形成紫红色产物；氏试剂结合，形成紫红色产物；（40.5%亚硝酸钠亚硝酸钠(NaHSO3)处理三次，每次处理三次，每次2分钟；分钟；（5流水冲洗流水冲洗510分钟；分钟；（6用苏木素染色液复染细胞核；用苏木素染色液复染细胞核；7水洗或水洗或1盐酸酒精分化。盐酸酒精分化。3结果：结果： 细

27、胞核呈蓝色，基底膜呈红色，胶原纤维、肌纤维及细细胞核呈蓝色，基底膜呈红色，胶原纤维、肌纤维及细胞浆呈红色。胞浆呈红色。第77页/共209页第七十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第78页/共209页第七十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。过碘酸Schiff反应：糖元及其他PAS反应阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色第79页/共209页第八十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。PAS第80页/共209页第八十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。念珠菌（念珠菌（PAS染色）染色）第81页/共209页第八十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。附：附：AB/PAS法（阿尔辛蓝过碘酸雪夫染色法法（

28、阿尔辛蓝过碘酸雪夫染色法结果：中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝结果：中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝 色，中性和酸性粘液的混合物质呈紫色。色，中性和酸性粘液的混合物质呈紫色。第82页/共209页第八十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。阿尔辛蓝阿尔辛黄法：常用于黏液上皮肿瘤的鉴别诊断阿尔辛蓝阿尔辛黄法：常用于黏液上皮肿瘤的鉴别诊断第83页/共209页第八十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应：是显示中性和酸性黏液物质的有效方法阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应：是显示中性和酸性黏液物质的有效方法第84页/共209页第八十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。HID/AB:

29、高铁二胺奥新蓝法高铁二胺奥新蓝法AB/PAS第85页/共209页第八十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第86页/共209页第八十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。3. 六胺银（六胺银（PASM染色染色 在肾脏活体组织检查和一些真菌感染的组织在肾脏活体组织检查和一些真菌感染的组织选用此方法。选用此方法。1PASM染液的配方：染液的配方： 2硝酸银水溶液硝酸银水溶液3ml； 3六次甲基四胺液六次甲基四胺液25ml； 5硼砂硼砂2ml。注：注：2硝酸银配制胺溶液，染色时间硝酸银配制胺溶液，染色时间40分钟，温度分钟，温度 5560，随时镜下观察便于控制。，随时镜下观察便于控制。 第87页/

30、共209页第八十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2PASM染色法染色法：（11过碘酸水溶液内染过碘酸水溶液内染10分钟；分钟；（2自来水冲洗，蒸馏水冲洗；自来水冲洗，蒸馏水冲洗；（3入入5铬酸水溶液铬酸水溶液40分钟，出此溶液后用分钟，出此溶液后用1亚硫酸钠除掉铬酸；亚硫酸钠除掉铬酸；（4自来水洗数次，蒸馏水洗自来水洗数次，蒸馏水洗34次；次；（5入六胺银染液（入六胺银染液（506040分钟，分钟，20分钟后，每分钟后，每5分钟镜下观察一次，蒸馏水洗四次；分钟镜下观察一次，蒸馏水洗四次；（6入入0.2%氯化金水溶液氯化金水溶液12分钟，蒸馏水洗三次；分钟，蒸馏水洗三次；（7入入5硫代硫酸

31、钠水溶液硫代硫酸钠水溶液12分钟，蒸馏水洗数次；分钟，蒸馏水洗数次；（8复染复染HE，脱水、透明、封片，脱水、透明、封片结果：结果：底膜呈黑色，网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色底膜呈黑色，网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色，背景呈粉红色。，背景呈粉红色。第88页/共209页第八十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。PASM染色染色第89页/共209页第九十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。PASM染色染色第90页/共209页第九十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。PASM第91页/共209页第九十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。PASM第92页/共209页第九十三页，编辑于星期日：十八点

32、三十六分。第93页/共209页第九十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。附：附：PASM对真菌的染色对真菌的染色 真菌（真菌（fungus，又称霉菌，其种类较多。，又称霉菌，其种类较多。 真菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白真菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白质。质。1试剂的配制：试剂的配制：（1六次甲基四胺、硝酸银原液（简称六胺银原液。六次甲基四胺、硝酸银原液（简称六胺银原液。3六次甲基四胺水溶液六次甲基四胺水溶液100ml，5硝酸银水溶液硝酸银水溶液5ml；（2六胺银硼砂染色液。六胺银原液六胺银硼砂染色液。六胺银原液25ml，蒸馏水，蒸馏水25ml，5硼砂水溶液硼砂水溶液2m

33、l；（3核固红染液。核固红，硫酸铝核固红染液。核固红，硫酸铝5g，蒸馏水，蒸馏水100ml；（4亮绿染色液。亮绿，蒸馏水亮绿染色液。亮绿，蒸馏水100ml，冰醋酸。，冰醋酸。第94页/共209页第九十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2染色步骤：染色步骤：（15铬酸水溶液氧化铬酸水溶液氧化1小时，流水洗小时，流水洗2分钟，蒸馏水洗分钟，蒸馏水洗2次；次；（2浸入浸入1亚硫酸钠水溶液除掉铬酸亚硫酸钠水溶液除掉铬酸1分钟，流水洗分钟，流水洗5分钟，蒸馏水洗分钟，蒸馏水洗3次；次；（3浸入六胺银硼砂液染色浸入六胺银硼砂液染色1小时（小时（4050温箱内，至切片呈浅棕色，蒸馏水温箱内，至切片呈浅棕

34、色，蒸馏水3次；次；（4用用0.2%氯化金水溶液调色氯化金水溶液调色3分钟，蒸馏水稍洗；分钟，蒸馏水稍洗；（5核固红染色细胞核核固红染色细胞核10分钟，流水洗，蒸馏水洗；分钟，流水洗，蒸馏水洗；（6亮绿染色液亮绿染色液30秒，用蒸馏水快速稍洗；秒，用蒸馏水快速稍洗；（7无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。结果：结果：真菌均呈黑色，菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核呈红色真菌均呈黑色，菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。，背景呈淡绿色。第95页/共209页第九十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。念珠菌（假菌丝）念珠菌（假菌丝）第96页/共209

35、页第九十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎第97页/共209页第九十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。4. 淀粉样物质染色（介绍刚果红染色）淀粉样物质染色（介绍刚果红染色） 淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，性质属于糖蛋淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，性质属于糖蛋白成分。组织出现此物质称为淀粉样变性。白成分。组织出现此物质称为淀粉样变性。1试剂配制：试剂配制：（1刚果红染色液。刚果红刚果红染色液。刚果红1g，蒸馏水，蒸馏水100ml；（2Harris苏木素染色液。苏木素染色液。第98页/共209页第九十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2染色步骤：染色

36、步骤：（1苏木素染色液浸染苏木素染色液浸染2分钟；分钟；（20.5%盐酸乙醇分化数秒钟；盐酸乙醇分化数秒钟；（3流水洗，蒸馏水洗流水洗，蒸馏水洗2次；次；（4刚果红染色液中刚果红染色液中25分钟；分钟；（5无水乙醇迅速脱水无水乙醇迅速脱水2次；次；（6二甲苯透明，中性树胶封固。二甲苯透明，中性树胶封固。结果：结果：淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色。淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色。第99页/共209页第一百页，编辑于星期日：十八点 三十六分。刚果红染色刚果红染色第100页/共209页第一百零一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第101页/共209页第一百零二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第

37、102页/共209页第一百零三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第103页/共209页第一百零四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第104页/共209页第一百零五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第105页/共209页第一百零六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第106页/共209页第一百零七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。5. Mallory三色染色法（属于结缔组织复合染色法三色染色法（属于结缔组织复合染色法1试剂配制：试剂配制：（1重铬酸钾液。重铬酸钾，醋酸重铬酸钾液。重铬酸钾，醋酸5ml，蒸馏水，蒸馏水95ml；（2苯胺蓝橘黄苯胺蓝橘黄G液。苯胺蓝，橘黄液。苯胺蓝，橘黄2g，

38、磷钨酸，磷钨酸1g，蒸馏水，蒸馏水100ml；（3酸性复红液。酸性复红，蒸馏水酸性复红液。酸性复红，蒸馏水100ml。第107页/共209页第一百零八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2染色步骤：染色步骤：（1重铬酸钾液重铬酸钾液10分钟；分钟；（2流水洗流水洗2分钟，蒸馏水洗分钟，蒸馏水洗2次；次；（3酸性复红液酸性复红液2分钟，蒸馏水稍洗；分钟，蒸馏水稍洗；（4苯胺蓝液苯胺蓝液20分钟，分钟，95乙醇快速分化；乙醇快速分化；（5直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。结果：结果：胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉胶原和网状纤维呈蓝色

39、，软骨、粘液、淀粉样变性物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸样变性物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色。性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色。第108页/共209页第一百零九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。特点：利用酸性复红、苯胺蓝、橘黄特点：利用酸性复红、苯胺蓝、橘黄G这三种染料对结缔组织和非结缔这三种染料对结缔组织和非结缔组织进行着色。组织进行着色。Mallory第109页/共209页第一百一十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。6. Masson三色染色法三色染色法1试剂配制试剂配制（1Masson复合染色液。碱性复红复合染色液。碱性复红1g，丽春

40、红，丽春红2g，橘黄，橘黄G2g，0.25%醋酸醋酸300ml；（2）亮绿染色液。亮绿，）亮绿染色液。亮绿，0.2%醋酸醋酸100ml。2染色步骤染色步骤（1 Masson复合染色液复合染色液5分钟；分钟；（2 0.2%醋酸水溶液稍洗；醋酸水溶液稍洗；（35磷钨酸磷钨酸510分钟；分钟；（4 0.2%醋酸水溶液浸洗醋酸水溶液浸洗2次；次；（5亮绿染色液亮绿染色液5分钟；分钟；（6 0.2%醋酸水洗醋酸水洗2次；次；（7无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。第110页/共209页第一百一十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。结果：结果： 细胞核呈红色，

41、基底膜、胶原纤维呈蓝细胞核呈红色，基底膜、胶原纤维呈蓝绿色，免疫复合物呈红色。绿色，免疫复合物呈红色。第111页/共209页第一百一十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。 适用于脑垂体、上皮、甲状腺、神经的正常和肿瘤组织适用于脑垂体、上皮、甲状腺、神经的正常和肿瘤组织Masson第112页/共209页第一百一十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。肾小球肾小球第113页/共209页第一百一十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。左：左：HE染色染色右：右：Masson染色，胶原组织呈蓝色，弹力纤维棕色，肌纤维、染色，胶原组织呈蓝色，弹力纤维棕色，肌纤维、 纤维素、红细胞呈红色，胞核呈黑蓝色。

42、纤维素、红细胞呈红色，胞核呈黑蓝色。第114页/共209页第一百一十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。7. 弹力纤维染色法弹力纤维染色法 病理诊断应用弹力纤维染色，目的是观察组织内弹力纤维是否增生或破坏、断裂和崩解，从而帮助诊断。病理诊断应用弹力纤维染色，目的是观察组织内弹力纤维是否增生或破坏、断裂和崩解，从而帮助诊断。试剂配制：试剂配制： 地衣红酒精液地衣红酒精液 1g 70%酒精酒精 100ml 浓盐酸浓盐酸 1ml结果：结果：Taner-Unna法，弹力纤维呈深棕红色。法，弹力纤维呈深棕红色。 Verhoeff铁苏木素染色法，弹力纤维呈黑色。铁苏木素染色法，弹力纤维呈黑色。第115页

43、/共209页第一百一十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。Verhoeff铁苏木素染色法：弹力纤维黑色或黑蓝色，胞核黑色，胶原纤维呈红色Verhoeff铁苏铁苏木素染木素染色法色法第116页/共209页第一百一十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。Lendrum纤维纤维素染色法素染色法显示肾小球毛细显示肾小球毛细血管腔内血栓形血管腔内血栓形成成第117页/共209页第一百一十八页，编辑于星期日：十八点 三十六分。第四章：第四章：第118页/共209页第一百一十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。免疫组织化学（免疫组织化学（Immunohistochemistry）一定义：一定义： 应用免

44、疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位、或定量研究，中的某些化学成分进行原位的定性、定位、或定量研究，这种技术称免疫组织化学（这种技术称免疫组织化学（immunohistochemistry） 或或免疫细胞化学（免疫细胞化学（immunocytochemistry），简称免疫组化），简称免疫组化。免疫组化技术是。免疫组化技术是1941年年 Coons等学者首创的，随着其等学者首创的，随着其理论及技术的发展，目前已发生了日新月异的变化。理论及技术的发展，目前已发生了日新月异的变化。第119页/共209页第一百二十

45、页，编辑于星期日：十八点 三十六分。1免疫组化的方法：免疫组化的方法： 1）直接法）直接法 2）间接法：）间接法： SPA、 PAP、 ABC、 LAB法等，间接法法等，间接法 的灵敏度高于直接法。的灵敏度高于直接法。2标记的物质：荧光染料、放射性同位素，酶（辣根过氧标记的物质：荧光染料、放射性同位素，酶（辣根过氧 化物酶、碱性磷酸酶等）铁蛋白、胶体金等。化物酶、碱性磷酸酶等）铁蛋白、胶体金等。3根据标记物区分：免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和根据标记物区分：免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和 免疫金银法。其中免疫荧光法和酶标法应用免疫金银法。其中免疫荧光法和酶标法应用 广泛。广泛。第120页/

46、共209页第一百二十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。反差第121页/共209页第一百二十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。二免疫组化的基本知识二免疫组化的基本知识1原理原理：抗体与抗原间的结合具有高度的特异性，免疫纽织化学正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫后获得特异性抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的抗原物质。由于抗原与抗体结合后形成的免疫复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来，以期达到对组化或细胞中的未知抗原进行定性、定位甚至定量的研究。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、氨基酸

47、、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等，都可以用相应的特异性抗体进行检测。：抗体与抗原间的结合具有高度的特异性，免疫纽织化学正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫后获得特异性抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的抗原物质。由于抗原与抗体结合后形成的免疫复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来，以期达到对组化或细胞中的未知抗原进行定性、定位甚至定量的研究。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等，都可以用相应的特异性抗体进行检测。第122页/共209页

48、第一百二十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2.抗原性的保存：上述谈到的抗原或半抗原物质，防止在组织或细胞内丢失是非常重要的。在组织处理过程中，如固定、包埋、薄切、反应，必须保持其抗原性，特别是选择的固定液及包埋方法要十分注意。抗原性的保存：上述谈到的抗原或半抗原物质，防止在组织或细胞内丢失是非常重要的。在组织处理过程中，如固定、包埋、薄切、反应，必须保持其抗原性，特别是选择的固定液及包埋方法要十分注意。3.抗体：抗体是机体受抗原刺激后，由抗体：抗体是机体受抗原刺激后，由B淋巴细胞、特别是浆细胞分泌产生的一种与相应抗原发生反应的一种球蛋白，即免疫球蛋白（淋巴细胞、特别是浆细胞分泌产生的一种

49、与相应抗原发生反应的一种球蛋白，即免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig)，共有五类：，共有五类：IgG, IgA, IgM, IgD, 和和IgE，主要分布在血清或外分泌物中，以，主要分布在血清或外分泌物中，以IgG为主，约占为主，约占7080。第123页/共209页第一百二十四页，编辑于星期日：十八点 三十六分。1抗体的制备方法：抗体的制备方法：A 多克隆抗体多克隆抗体（血清抗体：指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后从血清中分离提纯的抗体。（血清抗体：指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后从血清中分离提纯的抗体。B 单克隆抗体单克隆抗体：是：是1975年由年由Kohlenh Milste

50、in发明的一种新技术。其原理是将体外培养的骨髓细胞和免疫的脾细胞相融合，产生杂交细胞。这种融合的杂交细胞既有骨髓细胞的无限生长能力，又有浆细胞分泌单一抗体的能力。将该免疫细胞纯化，成为单克隆系，就能产生大量专一的高纯度的抗体，即单克隆抗体（发明的一种新技术。其原理是将体外培养的骨髓细胞和免疫的脾细胞相融合，产生杂交细胞。这种融合的杂交细胞既有骨髓细胞的无限生长能力，又有浆细胞分泌单一抗体的能力。将该免疫细胞纯化，成为单克隆系，就能产生大量专一的高纯度的抗体，即单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb)第124页/共209页第一百二十五页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2)

51、 单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较特性特性 多克隆多克隆 单克隆单克隆组成组成 多种类抗体的混合物多种类抗体的混合物 单一种类的抗体单一种类的抗体 特异性特异性 低针对多个抗原决定族低针对多个抗原决定族 高针对单一的抗原决定族高针对单一的抗原决定族亲和力亲和力 平均亲和力较高平均亲和力较高 不定，较低不定，较低交叉反应交叉反应 高高 低低第125页/共209页第一百二十六页，编辑于星期日：十八点 三十六分。4抗原与抗体的特异性结合抗原与抗体的特异性结合 抗原与抗体的结合具有高度的特异性。在抗体的轻链和重链的可变区中有抗原与抗体的结合具有高度的特异性。在抗体的轻链

52、和重链的可变区中有3个特殊的易变部位，即在第个特殊的易变部位，即在第30位、位、50一一60位和第位和第100位氨基酸残基附近，这些部位称为超变区。超变区直接参与抗原接合部位的组成，形成的接合部位是一个浅平穴槽，槽大小约位氨基酸残基附近，这些部位称为超变区。超变区直接参与抗原接合部位的组成，形成的接合部位是一个浅平穴槽，槽大小约抗原决定族在空间呈互补性地嵌入槽内，借分子间的范德华力、疏水作用静电引力以及氢键而相互结合。抗原与抗体分子的结合不受两者数量比例的限制，但如要出现肉眼可见的反应，抗原决定族在空间呈互补性地嵌入槽内，借分子间的范德华力、疏水作用静电引力以及氢键而相互结合。抗原与抗体分子的

53、结合不受两者数量比例的限制，但如要出现肉眼可见的反应， 则抗原与抗体的量需有一定的适当的比例，否则在抗原与抗体过量的情况下，不能聚合成大颗粒，因此不能出现肉眼可见的反应。则抗原与抗体的量需有一定的适当的比例，否则在抗原与抗体过量的情况下，不能聚合成大颗粒，因此不能出现肉眼可见的反应。 第126页/共209页第一百二十七页，编辑于星期日：十八点 三十六分。三免疫组织化学的基本技术 （一 取材1实验动物：麻醉 （处死，锋利刀片切成大小适中， 厚度3mm4mm; 小型实验动物：灌注（流）固定（生理盐水和4多聚甲醛 取材2人体材料：活检组织、手术标本、细胞和组织 第127页/共209页第一百二十八页，

54、编辑于星期日：十八点 三十六分。（二）固定：原则是保持组织形态良好和被检测抗原的前提下，应采用浓度最低的固定剂和最短的固定时间，固定时间一般为（二）固定：原则是保持组织形态良好和被检测抗原的前提下，应采用浓度最低的固定剂和最短的固定时间，固定时间一般为112h。1常用的固定剂：常用的固定剂：1）甲醛缓冲液：广泛应用于病理标本的固定，甲醛在很好地保护组织形态结构完整的同时也有效地保存某些抗原。由于甲醛的交联作用会影响被固定细胞膜的通透性不利于染色时抗体的渗透，因此染色前常用酶进行消化以使抗原决定簇充分暴露，固定时间不直超过）甲醛缓冲液：广泛应用于病理标本的固定，甲醛在很好地保护组织形态结构完整的

55、同时也有效地保存某些抗原。由于甲醛的交联作用会影响被固定细胞膜的通透性不利于染色时抗体的渗透，因此染色前常用酶进行消化以使抗原决定簇充分暴露，固定时间不直超过24h。第128页/共209页第一百二十九页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2）4多聚甲醛磷酸缓冲液：广泛应用于光镜细胞化学研究。多聚甲醛磷酸缓冲液：广泛应用于光镜细胞化学研究。3）戊二醛）戊二醛多聚甲醛缓冲液：适用于光镜、电镜免疫组织化学研究。多聚甲醛缓冲液：适用于光镜、电镜免疫组织化学研究。4）其它：如）其它：如PLP液（过碘酸液（过碘酸赖赖AA多聚甲醛固定液）、丙酮及醇类、锇酸等。多聚甲醛固定液）、丙酮及醇类、锇酸等。第129页/

56、共209页第一百三十页，编辑于星期日：十八点 三十六分。2固定注意事项：固定注意事项：1）固定液的选择标准：）固定液的选择标准：A. 组织形态结构保存良好；组织形态结构保存良好；B. 最大限度最大限度 保存抗保存抗 原的抗原性。中性甲醛和多聚甲醛是应用最广的固定剂。原的抗原性。中性甲醛和多聚甲醛是应用最广的固定剂。2）组织块的大小：为宜。）组织块的大小：为宜。3）固定时间：与组织块大小成正比，与固定液浓度成）固定时间：与组织块大小成正比，与固定液浓度成 反比。反比。4）温度：一般在室温下进行，电镜标本和固定时间较长时）温度：一般在室温下进行，电镜标本和固定时间较长时 可放置在可放置在4 冰箱。

57、冰箱。5固定后处理：充分冲洗，除去多余固定剂。固定后处理：充分冲洗，除去多余固定剂。第130页/共209页第一百三十一页，编辑于星期日：十八点 三十六分。（三）包埋：（三）包埋：1.石蜡包埋；石蜡包埋；2.冷冻包埋；冷冻包埋；3.环氧树脂包理。环氧树脂包理。（四）切片：（四）切片：1.载玻片的处理：载玻片的处理：1）清洗）清洗 ；2）涂胶（防止脱片）涂胶（防止脱片） 常用粘附剂：常用粘附剂：明胶：铬矾明胶和甲醛明胶；明胶：铬矾明胶和甲醛明胶；树脂胶：树脂胶： 也称白胶；也称白胶； 多聚赖氨酸（多聚赖氨酸（PLL）；）；商品化粘附剂。商品化粘附剂。2.切片类型：切片类型：l）石蜡切片：厚约）石蜡

58、切片：厚约 3 5 m放置放置 37 温箱烘烤过夜，温箱烘烤过夜， 以减少脱片。以减少脱片。2）冷冻切片：）冷冻切片：2 m。3）振动切片：特点是组织经固定后不需包埋，只要用胶水粘在）振动切片：特点是组织经固定后不需包埋，只要用胶水粘在 载物台上即可切片。切片较厚，可将阳性部位作电镜包埋。载物台上即可切片。切片较厚，可将阳性部位作电镜包埋。 神经组织应用神经组织应用 较多。较多。第131页/共209页第一百三十二页，编辑于星期日：十八点 三十六分。四免疫组化染色过程中的基本技术四免疫组化染色过程中的基本技术（一）蛋白酶消化技术（一）蛋白酶消化技术 进行固定时，抗原决定簇有可能被固定剂所封闭，因

59、此在抗原抗体反应前，常用蛋白酶处理组织切片，使抗原决定簇充分暴露出来，并使组织的通透性增高，以利抗原抗体最大限度地结合增强特异性染色。进行固定时，抗原决定簇有可能被固定剂所封闭，因此在抗原抗体反应前，常用蛋白酶处理组织切片，使抗原决定簇充分暴露出来，并使组织的通透性增高，以利抗原抗体最大限度地结合增强特异性染色。1常用的消化酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶常用的消化酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶2消化时间：因组织而异，一般为消化时间：因组织而异，一般为530分钟，消化时间不宜太长，以免损伤组织形态，破坏抗原决定族。消化结束后要充分洗涤，以除去残留的蛋白酶。分钟，消化时间不宜太长，以免损伤组织形态，破坏抗原决定族

60、。消化结束后要充分洗涤，以除去残留的蛋白酶。第132页/共209页第一百三十三页，编辑于星期日：十八点 三十六分。1）非特异染色的控制）非特异染色的控制 非特异染色或背景染色是指在免疫组化染色过程中凡不属于特异性抗原抗体反应所出现的染色。非特异染色或背景染色是指在免疫组化染色过程中凡不属于特异性抗原抗体反应所出现的染色。1原因分析：原因分析：组织方面：主要有组织的自发荧光、内源性过氧化物酶或碱组织方面：主要有组织的自发荧光、内源性过氧化物酶或碱 性磷酸酶、内源性生物素等；性磷酸酶、内源性生物素等；试剂方面：因抗体不纯、标记的酶和荧光不纯或标记过量等。试剂方面：因抗体不纯、标记的酶和荧光不纯或标