放线菌的杂交育种

1、玻璃纸法玻璃纸法平板杂交法平板杂交法用于杂交实验的两个直接亲本都携带营养缺用于杂交实验的两个直接亲本都携带营养缺陷型标记。另外，其中一个亲本带某药物的陷型标记。另外，其中一个亲本带某药物的抗性标记，而另一亲本则是对同种药物具有抗性标记，而另一亲本则是对同种药物具有敏感性。敏感性。eg： A亲本带亲本带met-和和str B亲本带亲本带his-和和ura-，但对，但对str敏感。敏感。所用培养基：完全培养基所用培养基：完全培养基 选择培养基（即在基本培养基选择培养基（即在基本培养基中加入同一种药物的补充培养基）中加入同一种药物的补充培养基）将玻璃纸转移到含有某药物的补充培养将玻璃纸转移到含有某药

2、物的补充培养基上继续培养。基上继续培养。一定时间培养在该补充培养基上有此几类菌不能生长：在该补充培养基上有此几类菌不能生长：异核体菌落B亲本A亲本因为因为B亲本对该药物有敏感性，亲本对该药物有敏感性，则在异核体中带有对该药物敏感则在异核体中带有对该药物敏感的等位基因。的等位基因。B对该药物敏感，且所在的培对该药物敏感，且所在的培养基中又缺乏所需养基中又缺乏所需his，ura营养营养成分。成分。培养基上缺乏所需要的培养基上缺乏所需要的met成成分分所谓异核体：即放线菌杂交过程的两直接所谓异核体：即放线菌杂交过程的两直接亲本不发生染色体交换，两亲本的染色体亲本不发生染色体交换，两亲本的染色体独立存

3、在在同一细胞内。菌落表型是原养独立存在在同一细胞内。菌落表型是原养型。基因型分别与亲本之一相同，无重组型。基因型分别与亲本之一相同，无重组体出现，没有发生遗传信息交换体出现，没有发生遗传信息交换玻璃纸平板杂交的具体方法：制孢子悬浮液制孢子悬浮液 混合液接种到完全混合液接种到完全培养基上的半透性玻璃纸表面培养基上的半透性玻璃纸表面 移取长移取长有基质菌丝的玻璃纸到添加有某药物的补有基质菌丝的玻璃纸到添加有某药物的补充培养基上充培养基上 分离子的检出和鉴别分离子的检出和鉴别该方法适合于大量菌落与一个共同实该方法适合于大量菌落与一个共同实验菌株配对测定致育能力验菌株配对测定致育能力 优点：适于在短时

4、间内进行大量配对优点：适于在短时间内进行大量配对菌株的杂交。菌株的杂交。具体方法：具体方法：将多株亲本将多株亲本A菌株的菌落以点种法菌株的菌落以点种法分别接种到各个分别接种到各个完全培养基完全培养基平板上，培养备用。平板上，培养备用。将一株共同配对的亲本菌株将一株共同配对的亲本菌株B产生的孢子作成产生的孢子作成孢子悬液，取一定量加入到另一个孢子悬液，取一定量加入到另一个有限培养基有限培养基琼琼脂平板上，培养备用。脂平板上，培养备用。待待A孢子成熟后，采用影印法复印到孢子成熟后，采用影印法复印到B菌株平板菌株平板上培养。形成部分结合子。上培养。形成部分结合子。两亲本染色体进行一次两亲本染色体进行一次单交换单交换而形成杂合系。而形成杂合系。进一步培养、繁殖、杂合系形成孢子，采用影印进一步培养、繁殖、杂合系形成孢子，采用影印法将杂合系孢子复印到各种选择性培养基平板上，法将杂合系孢子复印到各种选择性培养基平板上，从而从中检出重组体分离子。重组体。从而从中检出重组体分离子。重组体。有限培养基：是专供异核体菌株生长是专供异核体菌株生长使用的培养基。通常在基本培养基活使用的培养基。通常在基本培养基活蒸馏水中加入适量的完全培养基，加蒸馏水中加入适量的