ABO正反定型_ABO血清效价滴定和亲和力试验_RH血型鉴定

1、LOGO血型输血实验一血型输血实验一 ABOABO正反定型正反定型 ABOABO血清效价滴定和亲和力试验血清效价滴定和亲和力试验 RhRh血型鉴定血型鉴定Company Logo实验目的实验目的v重点掌握重点掌握ABO血型正反定型的原理、方法、血型正反定型的原理、方法、临床意义临床意义v熟悉效价滴定和亲和力实验熟悉效价滴定和亲和力实验v熟悉熟悉Rh血型鉴定的原理、方法、临床意义血型鉴定的原理、方法、临床意义Company LogoABO血型正反定型血型正反定型原理原理 v用已知特异性的抗体检测试剂检查红细胞的抗原用已知特异性的抗体检测试剂检查红细胞的抗原（forward typing，正向定型

2、或红细胞定型），正向定型或红细胞定型）v用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体（reverse typing， 反向定型或血清定型），反向定型或血清定型），结合正反定型来判断红细胞的结合正反定型来判断红细胞的ABO血型血型Company Logo正向定型正向定型v 玻片法玻片法v 1.标记玻片标记玻片 将玻片分为两区分别标记抗将玻片分为两区分别标记抗A、抗、抗Bv 2.在相应区域滴加抗在相应区域滴加抗A/抗抗B试剂试剂1dv 3.滴加血液各滴加血液各1d，不断轻摇玻片，充分混匀，不断轻摇玻片，充分混匀，2min内判内判断结果断结果forward typin

3、g（cell typing）anti-A anti-B Testing result O+ A + B+ + ABCompany Logo反向定型反向定型试管法试管法v 1.制备制备2标准红细胞生理盐水悬液标准红细胞生理盐水悬液 1d已知血型已知血型RBC+49d生理盐水生理盐水 混匀混匀v 2.分离血浆分离血浆 2500r/min 3minv 3.取两支试管分别标记取两支试管分别标记A1、B，加入待检血浆各，加入待检血浆各2dv 4.将将A1、B型标准红细胞生理盐水悬液型标准红细胞生理盐水悬液1d加入相应标记的试管加入相应标记的试管 混混匀匀 1000r/min 30secv 5.观察结果观

4、察结果 观察上层有无溶血观察上层有无溶血 管底有无凝集管底有无凝集 再用低倍镜观察再用低倍镜观察reverse typing（serum typing）AC BCTesting result+ +O +A+ B ABCompany Logoblood groupantigen in red blood cellantibody in serumAAanti-BBBanti-AOanti-A,anti-BABA、BABO blood group Company Logo注意事项注意事项v 1.严格标记严格标记 摇动玻片动作要轻摇动玻片动作要轻v 2.所有器材干燥清洁、防止溶血，避免交叉污染所有器

5、材干燥清洁、防止溶血，避免交叉污染v 3.血型试剂平衡至室温再使用，用后尽快放回冰箱血型试剂平衡至室温再使用，用后尽快放回冰箱v 4.玻片法注意防止干涸，以免误判为凝集玻片法注意防止干涸，以免误判为凝集v 5.试管法试管法 若溶血表明有补体激活（应区别标本采样等其它若溶血表明有补体激活（应区别标本采样等其它因素引起的溶血），视为凝集因素引起的溶血），视为凝集v 6.防止冷凝集素干扰，室温（防止冷凝集素干扰，室温（20-24）下试验）下试验Company Logo临床意义临床意义vABO血型系统，是迄今为止发现的最具临床价值血型系统，是迄今为止发现的最具临床价值的一个血型系统，它将人的红细胞分成

6、的一个血型系统，它将人的红细胞分成A、B、O和和AB四种血型，是输血医学和器官移植中最重要四种血型，是输血医学和器官移植中最重要的血型系统之一。的血型系统之一。Company LogoABOABO血清效价滴定和亲和力试验血清效价滴定和亲和力试验原理原理v将标准血清用生理盐水经最大倍数稀释与相应的将标准血清用生理盐水经最大倍数稀释与相应的红细胞抗原发生一定强度以上的凝集即为该血清红细胞抗原发生一定强度以上的凝集即为该血清的效价，也就是血清中所含抗体的浓度的效价，也就是血清中所含抗体的浓度v亲和力试验是指该血清中抗体与相应红细胞发生亲和力试验是指该血清中抗体与相应红细胞发生凝集的强度与速度凝集的强

7、度与速度Company Logo效价滴定效价滴定试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9(空白空白)生理盐水（生理盐水（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2抗抗A血清（血清（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 2A红细胞（红细胞（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2最后稀释度最后稀释度 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512混匀混匀 1000r/min 2min 观察结果观察结果+ 凝集成大块，几乎无游离红细胞凝集成大块，几乎

8、无游离红细胞+ 凝集块稍小，有少量游离红细胞凝集块稍小，有少量游离红细胞+ 凝块更小，游离红细胞占凝块更小，游离红细胞占1/2+ 细小凝块，游离更多细小凝块，游离更多凝集程度凝集程度+时对应稀释度的倒数为该抗体的效价时对应稀释度的倒数为该抗体的效价弃去弃去Company Logo亲和力试验亲和力试验v已知抗体待测血清已知抗体待测血清1d于玻片上，于玻片上，10相应红细相应红细胞生理盐水悬液胞生理盐水悬液2d加于血清液滴旁（不相接触）加于血清液滴旁（不相接触）v玻棒混合两者，同时开动秒表，轻转玻片，混匀玻棒混合两者，同时开动秒表，轻转玻片，混匀v记录出现凝集时间和记录出现凝集时间和3min时凝块

9、大小时凝块大小（要求（要求15s内开始凝集，内开始凝集，3min时凝块时凝块1mm2）Company LogoRh血型鉴定血型鉴定原理原理v 单克隆混合试剂检测法单克隆混合试剂检测法 用用Rh各抗血清（各抗血清（IgM+IgG型）试剂通过凝集型）试剂通过凝集反应对红细胞上反应对红细胞上Rh抗原进行鉴定。抗原进行鉴定。Company Logo试管法试管法v 1.试管内加试管内加1dRh抗血清试剂抗血清试剂v 2.加加1d待测血待测血v 3.轻轻混合，离心。轻轻混合，离心。v 4.观察试管底并轻摇重悬，观察有无凝集观察试管底并轻摇重悬，观察有无凝集Company Logo注意事项注意事项v1. R

10、h血型系统的抗体多由后天免疫刺激（主要血型系统的抗体多由后天免疫刺激（主要是输血或妊娠）而产生，故不需做反定型是输血或妊娠）而产生，故不需做反定型 v2.若为阴性反应，应进一步做若为阴性反应，应进一步做Rh阴性确认试验。阴性确认试验。用抗用抗D、E、C、c、e（IgG+IgM）混合型血）混合型血清定型试剂鉴定待测红细胞上的全部清定型试剂鉴定待测红细胞上的全部Rh抗原抗原Company Logo临床意义临床意义v Rh血型系统是当前发现的红细胞血型系统中最复杂的一个，其重要血型系统是当前发现的红细胞血型系统中最复杂的一个，其重要性仅次于性仅次于ABO血型系统。血型系统。v D抗原是抗原是Rh抗原中免疫性最强的抗原，通过输血和妊娠，抗原中免疫性最强的抗原，通过输血和妊娠，50%75%的的Rh阴性的个体，可因阴性的个体，可因D抗原阳性红细胞免疫而产生抗抗原阳性红细胞免疫而产生抗D，并，并可导致严重的溶血反应。可导致严重的溶血反应。 v 受血者或孕妇血浆中如含有受血者或孕妇血浆中如含有Rh抗体，在输入含相应抗原的血