基因工程知识点

1、专题1基因工程1.1 DNA重组技术的基本工具1 .基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。操作水平是DNA分子水平，操作环境是在体外。2 .分子手术刀”一限制性核酸内切酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已从近300种微生物中分离出了约4000种限制酶。能够识别双链DNA分子的某种特定核甘酸序列；切开两个两个核甘酸之间的磷酸二酯键,形成黏性末端或平末端。3 .分子缝合针”NA连接酶。将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，恢复被限制酶切开的磷酸二

2、酯键。种类：1)E.coliDNA连接酶：只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来2)T4DNA连接酶：既可以“缝合”双链DNM段互补的世世末端，又可以“缝合”双链DNM段的土末端，但连接光末端之间的效率比较低4 .分子运输车”一基因进入受体细胞的载体。作为载体的必要条件：能自我复制、有切割位点、有遗传标记基因等。载体的种类：细菌质粒、2噬菌体的衍生物、动植物病毒1.2 基因工程的基本操作程序1.基因工程的基本操作步骤主要包括:目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。2 .目的基因的获取方法：从基因文库中获取、利用PCR提取目的基因、人工合成法。

3、3 .PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。原理DNA双链复制。条件：模板DNA;RNA引物;四种脱氧核甘酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列H含、DNAM合酶作用下延伸合成互补链。4 .基因表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以迎及给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。5 .基因表达的载体的组成目的基因+启动子+终止子+标记基因6 .转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。7 .导入植物细胞：农杆菌转化法（表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞）这是双子叶植物和

4、裸子植物中常用的基因转化方法；基因枪法,这是单子叶植物中常用的基因转化方法；花粉管通道法,这种方法十分简便经济，我国的转基因抗虫棉就是用这种方法得到的。8 .导入动物细胞：显微注射法，将基因表达载体提纯，用显微注射仪注射到受精卵中。9 .导入微生物细胞：Ca2+处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。10 .检测是否插入目白基因，利用DNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交,看是否有杂交带。检测是否转录出了mRNA利用DNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交,看是否有杂交带。检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质

5、进行抗原-抗体杂交,看是否有杂交带。还可以根据其性状进行勺生水平的鉴定。11 3基因工程的应用一、植物基因工程成果12 抗虫转基因植物杀虫基因：主要有Bt毒蛋白基因、蛋白酶抵制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。13 抗病转基因植物抗病基因：使用最多的是病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因;抗真菌转基因植物中可使用的基因有几丁质酶基因抗毒素合成基因。14 其他抗逆转基因植物：抗逆基因：调节渗透压的基因（使植物细胞渗透压升高以适应盐碱或干旱环境）、抗冻蛋白基因、抗除草剂基因。15 利用转基因改良植物的品质举例：将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中,或者改变这些氨基酸合成途径中某种关

6、键酶的活性，以提高植物氨基酸含量。二、动物基因工程1 .用于提高动物生长速度：外源生长激素基因2 .用于改善畜产品的品质：肠乳糖酶基因，转基因牛的乳糖含量减少。3 .用转基因动物生产药物基因来源：药用蛋白基因+乳腺蛋白基因的启动子成果：乳腺生物反应器4 .用转基因动物作器官移植的供体原理：使移植动物器官没有抗原，就不会发生免疫排斥反应方法：将器官供体基因组导入某种调节因子，以抑制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因。5 .基因工程药品来源：转基因工程菌。成果：白细胞介素、干扰素、抗体、疫苗、激素等。三、基因治疗1 .概念：把正常基因导入病人体内,使该基因的表达产物发挥功能,从而达到治疗疾

7、病的目的，这是治疗遗传病的最有效手段。2 .种类：体外基因治疗和体内基因治疗。3 .原理：遗传病患者一般缺少正常基因,所以导入正常基因后，使基表达，即可对病情起到缓解作用。4 .4蛋白质工程的崛起1 .基因工程的实质：将一种生物的基因转移到另一种生物体内，后者可以产生它本来不能产生的蛋白质，进而表现出新的性状。基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,天然蛋白质不一定完全符合人类生产和生活的需要。2 .蛋白质工程的目的：生产符合人们生活需要的并非自然界已存在的蛋白质3 .蛋白质工程的目标：根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行分子设计4 .蛋白质工程的基本途径：预期蛋白质功能一设计预期蛋白质结构-推测应有的氨基酸序列-找到相对应的脱氧核音序列，可以创造自然界不存在的蛋白质5 .概念：以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行或建，或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。也就是说，蛋白质工程是在基因