中国药典与美英药典微生物限度比较ppt课件

1、中国药典与美英药典微生物限中国药典与美英药典微生物限度检查法的比较度检查法的比较 苏德模苏德模1.收载的检查项目收载的检查项目 CPCPBPBPUSPUSP需气菌需气菌+ + + +真菌真菌+ + + +大肠埃希菌大肠埃希菌+ + + +沙门菌沙门菌+ + + +铜绿色假单胞菌铜绿色假单胞菌+ + + +金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌+ + + +梭菌梭菌+ + + 大肠菌群大肠菌群+ + + +肠杆菌科及其他某些革兰阴性杆菌肠杆菌科及其他某些革兰阴性杆菌 + +肠道菌、肠杆菌肠道菌、肠杆菌科科支原体支原体 + + 分枝杆菌分枝杆菌 + + 病毒的其他因子病毒的其他因子 + + 活螨活螨+ +

2、2.检验量检验量 CP 取取10g或或10ml供试品供试品 BP、USP 10g或或10ml供试品数份供试品数份 CPBPUSP一般制剂一般制剂0.9%的氯化的氯化钠溶液钠溶液pH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤pH7.0氯化钠氯化钠-蛋蛋白胨缓冲液白胨缓冲液其他合适培养基其他合适培养基pH7.2磷酸盐缓冲磷酸盐缓冲液液, 大豆酪蛋白消大豆酪蛋白消化培养基化培养基, 乳糖液乳糖液体培养基体培养基非 水 溶 性非 水 溶 性的制剂的制剂 膏 剂 、 膏 剂 、油剂）油剂）司盘司盘80、单硬、单硬脂酸甘油酯、脂酸甘油酯、吐温吐温-80十四烷酸异丙十四烷酸异丙酯酯

3、5克吐温克吐温-20或吐或吐温温-80十四烷酸异丙酯十四烷酸异丙酯吐温吐温-20其他助溶剂其他助溶剂其他其他不溶于水的膜不溶于水的膜剂剂肠溶胶囊制备肠溶胶囊制备供试液最终供试液最终pH调调至至7.0气雾剂制备法气雾剂制备法样品加稀释剂至培样品加稀释剂至培养 基 时 间 不 超 过养 基 时 间 不 超 过1hr3.供试液制备供试液制备 4.制剂抑菌作用的确定阳性对照试验）制剂抑菌作用的确定阳性对照试验） * 0.4%l卵磷脂，卵磷脂，4.0%吐温吐温 CPBPUSP控 制 菌 阳控 制 菌 阳性菌加量性菌加量10102个个102个个105106个个需 气 菌 及需 气 菌 及真菌计数真菌计数5

4、0100回收率大小于回收率大小于70%判断是否判断是否有抑菌作用有抑菌作用25200个金葡、白念、枯个金葡、白念、枯草、大肠菌在有无制剂存草、大肠菌在有无制剂存在下生长的稀释级差别大在下生长的稀释级差别大小判断是否有抑菌作用小判断是否有抑菌作用根据控制菌阳根据控制菌阳性菌生长的结性菌生长的结果判断果判断 抑 菌 作 用抑 菌 作 用处理方法处理方法 中和法中和法+*稀释法稀释法+薄 膜 过 滤薄 膜 过 滤法法+离 心 沉 淀离 心 沉 淀法法+ 5.需气菌和真菌计数需气菌和真菌计数 CPBPUSP 方法方法 平皿法平皿法 +（浇碟、涂（浇碟、涂抹）抹）+ 试管法试管法 + +薄膜过滤法薄膜过

5、滤法 + 培养基培养基营养琼脂营养琼脂大豆酪蛋白大豆酪蛋白消化琼脂消化琼脂大 豆 酪 蛋 白大 豆 酪 蛋 白消化琼脂消化琼脂 玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂含抗生素的沙含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂氏葡萄糖琼脂沙 氏 葡 萄 糖沙 氏 葡 萄 糖琼脂琼脂5.需气菌和真菌计数需气菌和真菌计数(续续)稀释级的选稀释级的选择择3个连续稀释级个连续稀释级1个个2个个培养温度培养温度303523283035202530352025培 养 时 间培 养 时 间天）天） 需气菌需气菌2(57)523真菌真菌3(57)557计数结果计数结果 需气菌需气菌真菌真菌一般一般3030030100不生长按不生长按10个个/1g

6、或或ml报告报告 30010030300不生长按不生长按10个个/1g或或ml报告报告结果报告结果报告 1g或或ml1g或或ml1g或或ml6.大肠埃希菌大肠埃希菌 CPBPUSP方法方法MI法法I法法IMViC法法检验量检验量g或或ml）1110稀释剂稀释剂09%氯化钠溶氯化钠溶液液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖液体培养基乳糖液体培养基预增菌预增菌 大豆酪胨肉汤大豆酪胨肉汤35371848h 增菌增菌BL增菌培养基增菌培养基35371824h M-I35 3 7 5 、24h Mac 肉汤肉汤43451824h乳糖液体培养基乳糖液体培养基35372448h分别分别Mac

7、.琼脂平板琼脂平板35371872hMac、EMB琼脂琼脂平板平板35372448h生化试验生化试验MI及及IMViC+ 7.大肠菌群大肠菌群 CPBPUSP检验量检验量g或或ml）11 稀释剂稀释剂pH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋蛋白胨缓冲液白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤 预增菌预增菌 353725h 增菌增菌0.1g,0.01g0.001g BL培养基培养基35371824h0.1g,0.01g,0.001g 乳乳糖肉汤培养基糖肉汤培养基35372448h 分别分别EMB或或Mac.C琼脂平板琼脂平板3537 1824hVRB.琼脂平板琼脂平板3537 1824h 生化试验生化试验+- 8.

8、 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 CPBPUSP检验量检验量1（g或或ml）1（g或或ml）10（g或或ml）稀释剂稀释剂09%氯化钠溶液氯化钠溶液pH7.2磷酸盐缓磷酸盐缓冲液冲液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液大豆酪蛋白大豆酪蛋白消化培养基消化培养基增菌增菌胆盐乳糖增菌培胆盐乳糖增菌培养基养基35371824h大豆酪蛋白消化培养基大豆酪蛋白消化培养基35371848h大豆酪蛋白消大豆酪蛋白消化培养基化培养基35372448h分别分别溴化十六烷基三溴化十六烷基三甲铵琼脂平板甲铵琼脂平板35371824h Cetrimide琼脂，培养琼脂，培养1872h大豆酪蛋白消化培养基大豆酪蛋白

9、消化培养基4143 1848h。薄膜过滤。薄膜过滤大豆酪蛋白消化培养基大豆酪蛋白消化培养基1848h，Cetrimide琼脂平板琼脂平板Cetrimide琼琼脂脂353772h生化试生化试验验5种种1种种421）3种种9.金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 CPBPUSP检验量检验量1（g或或ml）1（g或或ml）10（g或或ml）稀释剂稀释剂09%氯化钠溶液氯化钠溶液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨蛋白胨缓冲液缓冲液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲蛋白胨缓冲液液 大豆酪蛋白消化培养大豆酪蛋白消化培养基基 增菌增菌营养肉汤或含亚营养肉汤或含亚碲酸甲培养基碲酸甲培养基35371824h大豆酪蛋白大豆酪

10、蛋白消化培养基消化培养基35371848h h大豆酪蛋白消化培养大豆酪蛋白消化培养基基35372448h分别分别甘露醇氯化钠琼脂甘露醇氯化钠琼脂平板、卵黄氯化钠平板、卵黄氯化钠琼脂平板琼脂平板35372448hBP琼脂平板琼脂平板35371872hVJ(甘露醇氯化锂甘露醇氯化锂)琼琼脂、脂、MS(甘露醇氯化甘露醇氯化钠钠)琼脂、琼脂、BP琼脂平琼脂平板板35372448h凝固酶试凝固酶试验验+凝固酶、凝固酶、DNA酶酶+10.沙门菌沙门菌 CPBPUSP检验量检验量1（g或或ml）10（g或或ml）10（g或或ml）稀释剂稀释剂09%氯化钠溶液、氯化钠溶液、pH7.0氯化钠蛋白氯化钠蛋白胨缓冲

11、液胨缓冲液pH7.0氯化钠蛋白氯化钠蛋白胨缓冲液胨缓冲液 乳糖液体培养基乳糖液体培养基增菌增菌营养肉汤培养基营养肉汤培养基35371824h大豆酪胨肉汤大豆酪胨肉汤35371824h乳糖液体培养基乳糖液体培养基3537培育培育二次增二次增菌菌TTB培养基培养基35371824h四硫酸盐肉汤培养基四硫酸盐肉汤培养基41431824hSC、TTB液体培养基液体培养基35371224h分别分别EMB、Mac.C、DHL、SS琼脂平琼脂平板板35371824hDC、XLD、BG.琼琼脂平板脂平板35371872hBG、XLD、BS琼琼脂平板脂平板35372448h生化试生化试验验+11梭菌梭菌 CPB

12、PUSP检 验 量 检 验 量 g 或或ml）11010 稀释剂稀释剂09%无菌氯化钠溶无菌氯化钠溶液液pH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤 加热处理加热处理1份份8010min另另1份不加热份不加热1份份8010min另另1份不加热份不加热 增菌增菌100ml 0.1%葡萄糖葡萄糖庖肉培养基庖肉培养基35377296h100ml梭菌增菌培养梭菌增菌培养基基3537厌氧厌氧48h 分别分别含庆大霉素哥伦比含庆大霉素哥伦比亚琼脂平板亚琼脂平板35374872h含和不含庆大霉素哥含和不含庆大霉素哥伦比亚琼脂平板伦比亚琼脂平板353748h 过氧化氢酶试过氧化氢酶

13、试验验+ 12.结果判断及复试结果判断及复试 CP BP USP控制菌控制菌一次检出为准一次检出为准一次检出为一次检出为准准不符合标准不符合标准规定，取大规定，取大于于25g的样品的样品复试复试需气菌和需气菌和真菌真菌第一次试验结果第一次试验结果超过规定的标准，超过规定的标准，重新抽样复试两重新抽样复试两次，三次结果平次，三次结果平均值报告均值报告测定结果在测定结果在规定的限度规定的限度标准标准5倍以内倍以内均为合格均为合格 同上同上 微生物限度标准微生物限度标准 1.收载方式收载方式 CPBPUSP各论项下各论项下+制剂通则制剂通则+ 专论专论+2. 制剂通则中规定微生物限度的剂型制剂通则中

14、规定微生物限度的剂型 CP BP USP注射液注射液1、植入剂、植入剂1、酊剂、栓剂、软乳糊剂酊剂、栓剂、软乳糊剂2、眼用剂眼用剂2、糖浆、气粉喷、糖浆、气粉喷雾雾2膜、口服液混悬乳剂、膜、口服液混悬乳剂、散剂散剂2、滴耳、滴耳2、滴鼻、滴鼻、洗冲灌肠剂洗冲灌肠剂2、搽涂摸剂、搽涂摸剂、凝胶剂、贴剂凝胶剂、贴剂无微生物限度：片、胶无微生物限度：片、胶囊、丸、颗粒囊、丸、颗粒中药中药除膏药、橡胶膏剂、巴除膏药、橡胶膏剂、巴布膏剂外药典均有规定布膏剂外药典均有规定胶囊剂、口胶剂、颗粒剂、胶囊剂、口胶剂、颗粒剂、搽剂、泡腾剂搽剂、泡腾剂1、灌洗剂、灌洗剂1、滴鼻剂滴鼻剂2、口服液、口服散、口服液、口服散剂、注射液剂、注射液1、直肠制剂、直肠制剂、棒剂棒剂1