实验十一、植物组织培养实验-精

1、第四部分第四部分 : :浅尝现代生物技术浅尝现代生物技术实验目的实验目的:1.进行菊花的组织培养进行菊花的组织培养2.尝试植物激素的应用尝试植物激素的应用 通过必修课的学习，我们已经了解到大通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？ 组织培养组织培养营养繁殖营养繁殖扦插扦插嫁接嫁接压条压条 扦插扦插嫁接嫁接压条压条 组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂

2、培养基花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。根发芽。一、组织培养概述一、组织培养概述1.概念概念2、植物组织培养的原理是什么？、植物组织培养的原理是什么？植物细胞具有全能性，即生物体的细胞，具有使后代细植物细胞具有全能性，即生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。胞形成完整个体的能力。3.植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程:离体离体的植物的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体植物组织培养过程示

3、意图植物组织培养过程示意图 2、上图中还有什么地方不够完善的？、上图中还有什么地方不够完善的？没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。4.植物组织培养条件植物组织培养条件 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。、适时光照等。生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素高高利于生根利于生根适中适中愈伤组织的形成愈伤组织的形成有利于芽的形成有利于芽的形成低低二、菊花的组织培养二、菊花的组织培养(一一)设备及用品设备及用品1. 100ml三角瓶或大口培养瓶三角瓶或大口培养瓶

4、2. 镊子镊子 3. 超净台超净台 4. 灭灭菌锅菌锅 5.封口膜和橡皮圈封口膜和橡皮圈 6. 有棉球的广口瓶有棉球的广口瓶 7. 酒精灯酒精灯 8.三角漏斗三角漏斗 9.培养皿培养皿(二二)材料材料1.MS培养基培养基(用于配置发芽和生根培养基用于配置发芽和生根培养基)2.奈乙酸奈乙酸(NAA)用少量用少量0.1mol/LNaOH溶液溶解溶液溶解,苄基腺苄基腺嘌呤嘌呤( BA)用少量用少量0.1mol/LHCL溶解溶解3.发芽培养基发芽培养基(灭菌灭菌)4.生根培养基生根培养基(灭菌灭菌)(三三)步骤步骤1.取外植体取外植体超净台上将无菌幼苗切段超净台上将无菌幼苗切段,每段至少每段至少1张叶

5、片张叶片2.生芽培养生芽培养生芽培养基中生芽培养基中,放入放入1-3段切段段切段(茎部插入培养基茎部插入培养基,盖上盖上封口膜封口膜.日光灯下保持日光灯下保持1825的温度培养的温度培养,每天光照每天光照不少于不少于14.5h3.生根培养生根培养23周后周后,将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中,在上述条件下继续培养在上述条件下继续培养.4.适应锻炼适应锻炼将苗转移至草炭土或蛭石中将苗转移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持用玻璃罩或塑料布保持80以上的湿度以上的湿度,23天后打开减低湿度进行锻炼天后打开减低湿度进行锻炼,直直到将罩全部打开处于自然湿度下为

6、止到将罩全部打开处于自然湿度下为止5.定植定植将苗转移到土中培养将苗转移到土中培养6.自然生长的茎进行组织培养方法自然生长的茎进行组织培养方法:70乙醇乙醇中浸中浸泡泡10分钟分钟5次次氯酸钠氯酸钠溶液中溶液中浸泡浸泡5min5次次氯酸钠氯酸钠溶液中溶液中浸泡浸泡5min超净超净台上台上用无用无菌水菌水清洗清洗将茎将茎移至移至生芽生芽培养培养基中基中课后题课后题:1.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？验相同的生长素和细胞分裂素浓度？2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激本实验用人工合成的

7、激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？素，为什么？不可相同不可相同天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，效果显著。间长，效果显著。3.如果在自然界取植物样本进行组织培养如果在自然界取植物样本进行组织培养,你认为应采取什你认为应采取什么措施保证样本不被污染么措施保证样本不被污染?（1）操作环境清洁（）操作环境清洁（2）植物样本的洁净（）植物样本的洁净（3）操作）操作敏捷迅速敏捷迅速 脱分化：脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。分裂活性。 再分化再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。可有转变为各种不同细胞类型的能力。愈伤组织愈伤组织1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径污染的预防措施污